【摘要】：目的:腎透明細(xì)胞癌其胞質(zhì)富含脂質(zhì),具有脂代謝重編程的特征。本課題組前期全基因組測(cè)序發(fā)現(xiàn)腫瘤中組織中亮氨酰-tRNA合成酶(mitochondrial leucyl-tRNA synthetase 2,LARS2)基因突變,但其對(duì)腎透明細(xì)胞癌脂代謝作用尚未闡明。因此,本研究旨在驗(yàn)證通過(guò)脂代謝組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)的關(guān)鍵基因三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ATP-binding cassette,sub-family A,ABCA1),在腎透明細(xì)胞癌脂代謝重編程的的表達(dá),探索LARS2調(diào)控ABCA1誘導(dǎo)腎透明細(xì)胞癌脂代謝再變編程的可能機(jī)制,進(jìn)一步闡明LARS2在腎透明細(xì)胞癌脂代謝重編程過(guò)程中的功能和作用機(jī)制,為研究腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生機(jī)制提供資料。方法:(1)對(duì)腎透明細(xì)胞癌組織切片和配對(duì)癌旁組織切片進(jìn)行進(jìn)行油紅染色(2)選擇本課題組前期構(gòu)建的LARS2過(guò)表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞,以及LARS2低表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞及其對(duì)照細(xì)胞,進(jìn)行脂代謝組學(xué)檢測(cè),尋找到顯著差異脂質(zhì)-膽固醇酯。隨后送檢60對(duì)腫瘤組織和配對(duì)癌旁組織再次進(jìn)行脂代謝組學(xué)分析,進(jìn)一步確認(rèn)。根據(jù)結(jié)果,利用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)分析軟件,尋找到編碼調(diào)控膽固醇酯代謝的關(guān)鍵基因ABCA1;(3)在上述細(xì)胞系中采用qT-PCR的方法同時(shí)檢測(cè)LARS2和ABCA1表達(dá),并在90對(duì)腫瘤和配對(duì)癌旁組織中驗(yàn)證;利用試劑盒檢測(cè)細(xì)胞株、腫瘤組織及配對(duì)癌旁組織的膽固醇酯濃度。依腫瘤組織表達(dá)LARS2水平高低分組,比較二組之間ABCA1表達(dá)水平差異及膽固醇酯水平。結(jié)果:腎透明細(xì)胞癌富含脂質(zhì),染色明顯。脂代謝組學(xué)共鑒定超過(guò)1000個(gè)脂類物質(zhì)變化,涉及30亞類,提示腎透明細(xì)胞癌脂代謝重編程。結(jié)果分析顯示腫瘤組織和細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯(ChE)顯著增高,經(jīng)生物信息學(xué)預(yù)測(cè),三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)為調(diào)控ChE表達(dá)關(guān)鍵酶基因。LARS作為抑癌基因在腫瘤中失活,過(guò)表達(dá)LARS2的腫瘤細(xì)胞株的ABCA1表達(dá)水平下調(diào),膽固醇酯含量降低(P0.01)。腫瘤組織ABCA表達(dá)水平顯著高于配對(duì)瘤旁正常腎臟組織,高表達(dá)ABCA1的腫瘤組織膽固醇酯含量高于低表達(dá)者(P0.001);而LARS2表達(dá)水平高的腫瘤組織其ABCA1表達(dá)顯著下調(diào),膽固醇酯含量也顯著低于LARS2表達(dá)低的組織(P0.01)。結(jié)論:腎透明細(xì)胞癌脂代謝重編程,以膽固醇酯富集為主要特點(diǎn)。ABCA1為負(fù)責(zé)調(diào)控膽固醇酯代謝關(guān)鍵酶的基因,其高表達(dá)與膽固醇酯富集相關(guān)。LARS2作為抑癌基因在ccRCC中失活,過(guò)表達(dá)LARS2的細(xì)胞株其ABCA1表達(dá)降低,膽固醇酯含量低于對(duì)照細(xì)胞株及敲低LARS2的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。腫瘤組織內(nèi)低表達(dá)LARS2者ABCA 1表達(dá)水平上調(diào),膽固醇酯含量隨之增高,提示因LARS2失活后誘導(dǎo)ABCA1上調(diào),進(jìn)而促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌脂代謝重編程。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.11
【圖文】：

邐解放軍醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文評(píng)分，Ｒ２Ｙ接近１，Ｑ２均大于０．６，模型穩(wěn)固可靠。在ＯＰＬＳ－ＤＡ模型中，以ＶＩＰ同時(shí)滿足Ｐ〈0．邋０５為顯著指標(biāo)，共選出如圖所示顯著性差異脂質(zhì)（表４），隨后差異脂質(zhì)進(jìn)行了聚類分析（圖４）、相關(guān)分析（圖５）以及脂質(zhì)亞類變化分析（６）通過(guò)比較和分析Ａ－Ｂ、Ａ－Ｃ、Ｂ－Ｃ以及Ｂ－Ｄ四組數(shù)據(jù)及圖表，我們最終發(fā)現(xiàn)固醇酯這一差異脂質(zhì)在不僅差異變化明顯，而且差異可靠性高。同樣，在組織本中，共鑒定１０６４個(gè)脂類化合物，涉及３２個(gè)亞類。結(jié)合四個(gè)組組間、組內(nèi)對(duì)數(shù)據(jù)分析，以Ｂ－Ａ對(duì)比分析為例，結(jié)果如圖７、８所示，我們?cè)谀[瘤－健康組織本的分析中發(fā)現(xiàn)ＣｈＥ表達(dá)具有差異性，且符合細(xì)胞樣本分析結(jié)果。逡逑

顯著性差異脂質(zhì)分子聚類分析

顯著性差異脂質(zhì)分子相關(guān)性分析

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本文編號(hào)：2776726