【摘要】：第一部分:TNAP在心臟、腎臟纖維化中表達(dá)上調(diào)目的:探討TNAP在心臟及腎臟纖維化中的表型變化。方法:采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支的方法構(gòu)建大鼠心肌梗死(Myocardial infarction,MI)誘導(dǎo)的心臟纖維化模型;采用結(jié)扎左側(cè)輸尿管的方法構(gòu)建小鼠單側(cè)輸尿管梗阻(Unilateral ureteral obstruction,UUO)誘導(dǎo)的腎臟纖維化模型。MI大鼠分別獲取心肌梗死后1天,3天,7天,14天,28天心肌組織,于液氮中保存。Western Blot檢測(cè)心肌TNAP及α-SMA表達(dá)。UUO小鼠10天后處死并獲取左側(cè)腎臟組織。Western Blot及免疫組化檢測(cè)腎臟組織TNAP表達(dá)。結(jié)果:①心梗后左室α-SMA及TNAP表達(dá)隨心梗時(shí)間有逐漸上調(diào)趨勢(shì)。在心肌梗死后14天,心肌α-SMA、TNAP表達(dá)達(dá)到高峰,心梗后28天反而下降;②與假手術(shù)組相比,UUO組TNAP表達(dá)顯著增高(p0.001)。結(jié)論:TNAP在心、腎纖維化中表達(dá)上調(diào),提示TNAP可能參與心臟及腎臟纖維化過(guò)程。第二部分:抑制TNAP對(duì)心臟纖維化的影響目的:探討抑制TNAP對(duì)心臟纖維化的影響及可能機(jī)制。方法:大鼠隨機(jī)分為3組,每組8只:假手術(shù)組(Sham)、心肌梗死+鹽水注射組(MI+Saline)和心肌梗死+TNAP抑制劑組(MI+Tetra)。在心梗前28天,給予大鼠Tetra(11 mg·kg-1·day-1)或等體積生理鹽水腹腔注射,于心梗第14天處死。超聲心動(dòng)圖檢測(cè)心功能和心臟病理改變。Western blot 方法測(cè)定 Collagen I,α-SMA,TGF-β1 和 TNAP 表達(dá)。免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)心肌TNAP、α-SMA和TGF-β1表達(dá)。結(jié)果:TNAP在心梗后心臟中表達(dá)增高,其分布與心梗后膠原增生分布區(qū)域一致(P0.05)。TNAP抑制劑(Tetra)可顯著抑制心臟TNAP表達(dá),降低心梗誘導(dǎo)的膠原沉積、TGF-β1及α-SMA表達(dá),同時(shí)改善心梗后心臟重塑及心功能改變,包括FS,EF,LVIDs以及ⅣSs(P均0.05)。結(jié)論:抑制TNAP可能通過(guò)抑制肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化及膠原合成的方式改善心肌纖維化,同時(shí)改善心梗誘導(dǎo)的心臟重塑及心功能變化。第三部分:抑制TNAP對(duì)腎臟纖維化和鈣化的影響目的探討抑制TNAP對(duì)單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)小鼠腎臟纖維化和鈣化的影響。方法SPF級(jí)C57BL/6雄性小鼠24只,隨機(jī)分為3組,假手術(shù)組(n=8),UUO+生理鹽水組(n=8),UUO+Ins16 組(n=8)。UUO 模型建立后第10日處死小鼠,取術(shù)側(cè)腎組織。采用天狼星紅染色、Masson染色、茜素紅S染色分別檢測(cè)腎臟膠原沉積及鈣化程度。Western Blotting檢測(cè)腎臟TGF-β1,TNAP表達(dá)。免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)腎臟TNAP 表達(dá)。RT-PCR 檢測(cè)腎臟 TGF-β1、BMP2、Col1a1、Col2a1 mRNA表達(dá)。結(jié)果與假手術(shù)組相比,UUO+生理鹽水組腎臟膠原面積百分比顯著增加,以Ⅰ型膠原為主,鈣鹽沉積顯著增加,TNAP,TGF-β1表達(dá)顯著增加,TGF-β1、BMP2、Col1a1、Col2a1 mRNA表達(dá)顯著增加(P均0.05)。與UUO+生理鹽水組相比,UUO+Ins16組小鼠腎臟膠原面積,鈣鹽沉積,TGF-β1,TNAP,TGF-β1、BMP2、Col1a1、Col2a1mRNA表達(dá)均顯著降低(P均0.05)。結(jié)論 采用Ins16抑制TNAP具有抗UUO誘導(dǎo)的腎臟纖維化及鈣化作用,其機(jī)制可能與調(diào)控TGF-β1、Collagen Ⅰ、BMP2、Collagen Ⅱ表達(dá)水平有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R54;R692
【圖文】：

邐邐逡逑１．３統(tǒng)計(jì)學(xué)方法逡逑所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均由ＳＰＳＳ邋１２．０統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料正態(tài)分布使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差逡逑表示。多組間比較采用單因素方差分析，以ｐ＜０．０５為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。逡逑２結(jié)果逡逑２．１心梗后ＴＮＡＰ及ａ－ＳＭＡ表達(dá)逡逑Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔｔｉｎｇ檢測(cè)ＳＤ大鼠心肌梗死后不同時(shí)間點(diǎn)心肌ａ－ＳＭＡ及ＴＮＡＰ表逡逑達(dá)，發(fā)現(xiàn)心梗后左室ａ－ＳＭＡ及ＴＮＡＰ表達(dá)隨心梗后時(shí)間推移有逐漸上調(diào)趨勢(shì)。在逡逑心肌梗死后１４天，心�。幔樱停�、ＴＮＡＰ表達(dá)達(dá)到高峰，心梗后２８天反而下降（圖逡逑２．１）。逡逑４－１邐．．逡逑－－邐－ｎ－

逡逑圖２．３免疫組化檢測(cè)腎臟ＴＮＡＰ表達(dá)逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．３邋Ｒｅｎａｌ邋ＴＮＡＰ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｂｙ邋ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ邋ａｎａｌｙｚｅ．逡逑１６逡逑

＜逡逑ｇ逡逑圖２．２邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔｔｉｎｇ檢測(cè)腎臟ＴＮＡＰ表達(dá)逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．２邋Ｒｅｎａｌ邋ＴＮＡＰ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｂｙ邋ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔｔｉｎｇ．逡逑２．３免疫組化檢測(cè)腎臟ＴＮＡＰ表達(dá)逡逑與假手術(shù)組相比，ＵＵＯ組ＴＮＡＰ表達(dá)顯著增高（ｐ＜０．００１）。逡逑Ｓｈａｍ，邋ｘ２００邐ＵＵＯ邋，邋ｘ２００逡逑ｍｓ？ｍ逡逑Ｓｔ邋１０，邐ｐ＜０．０１逡逑｜邐ｉ邐￣ｉ逡逑９邋８－邐丁逡逑ｃ邐■逡逑？§邋６－逡逑（Ａ逡逑ｉ．邋４－逡逑＆逡逑％邋２－逡逑Ｓ邐邐邐邐逡逑圖２．３免疫組化檢測(cè)腎臟ＴＮＡＰ表達(dá)逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．３邋Ｒｅｎａｌ邋ＴＮＡＰ邋

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