發(fā)布時(shí)間：2020-07-25 19:34

【摘要】：目的:急性腎損傷(acutekidneyinjury,AKI)是以腎功能迅速下降為主要特征的臨床綜合征,是引起慢性腎病,腎衰竭和死亡的重要因素之一。Tempol是一種抗氧化劑,可清除急性腎損傷時(shí)體內(nèi)產(chǎn)生過多的自由基。本實(shí)驗(yàn)通過建立缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)誘導(dǎo)的AKI小鼠模型,初步探討Tempol對(duì)AKI小鼠腎臟的保護(hù)作用及其相關(guān)的機(jī)制。方法:將24只健康雄性C57B1/6小鼠,體重25～28 g,隨機(jī)分為三組:(1)Sham組:小鼠開腹暴露30 min后隨即關(guān)腹;(2)I/R組:小鼠單側(cè)腎動(dòng)脈夾閉30 min后恢復(fù)腎臟血流灌注;(3)Tempol+I/R組:腹腔注射Tempol(50 mg/kg)1h后,小鼠單側(cè)腎動(dòng)脈夾閉30 min然后恢復(fù)腎臟血流灌注。缺血復(fù)灌24h后處死小鼠,檢測小鼠血清中的肌酐、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和氧化應(yīng)激水平,通過希氏高碘酸染色觀察腎臟組織的病理變化情況,用蛋白質(zhì)印跡法檢測腎組織中絲氨酸和蘇氨酸激酶(serine/threonine protein kinase,Akt)、磷酸化Akt(phosphorylated-Akt,p-Akt)、核轉(zhuǎn)錄因子 κB(nuclear factor κB,NF-κB)、蕾帕毒素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、磷酸化 mTOR(phosphorylated-mTOR,p-mTOR)、氨基末端激酶(jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化 JNK(phosphorylated-JNK,p-JNK)、糖原合成酶激酶(glycogen synthase kinase-3β,GSK3β)、磷酸化 GSK3 β(phosphorylated-GSK3β,p-GSK3β)、p53和B淋巴細(xì)胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白的表達(dá)水平,通過腎小球入球動(dòng)脈灌注技術(shù)測量腎小球入球動(dòng)脈直徑變化從而展現(xiàn)出腎小球入球動(dòng)脈對(duì)Ang Ⅱ的反應(yīng)性變化。結(jié)果:(1)與Sham組比較,I/R組中小鼠血清中肌酐、BUN、超氧陰離子(superoxide anion,O2·-)和苯二醛(malonyldialdehyde,MDA)增加,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和過氧化氫酶(catalase,CAT)減少。腎小管上皮細(xì)胞壞死增加。p-Akt、p-GSK3β、p-mTOR和Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào),NF-κB、p-JNK和p53蛋白表達(dá)上調(diào)。此外,腎小球入球動(dòng)脈對(duì)Ang Ⅱ的反應(yīng)降低。(2)與I/R組比較,Tempol+I/R組小鼠血清中的肌酐、BUN降低、O2·-和MDA減少,SOD和CAT上升。腎小管上皮細(xì)胞壞死減少。p-Akt、p-GSK3β、p-mTOR和Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào),NF-κB、p-JNK和p53蛋白表達(dá)下調(diào)。且腎小球入球動(dòng)脈對(duì)AngⅡ的反應(yīng)增強(qiáng)。結(jié)論:在缺血再灌注誘導(dǎo)的AKI小鼠模型中,Tempol對(duì)AKI小鼠腎臟組織有明顯的保護(hù)作用,其保護(hù)作用機(jī)制是通過抗氧化作用,調(diào)控PI3K/Akt/mTOR和GSK3β信號(hào)通路,NF-κB的表達(dá)以及提高腎小球入球動(dòng)脈的活性等方面來實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R692
【圖文】：

圖４．１小鼠缺血再灌注２４ｈ后血清中肌酐和ＢＵＮ的水平。（Ａ）邋Ｓｈａｍ組、Ｉ／Ｒ組Ｔｅｍｐｏｌ邋＋邋Ｉ／Ｒ組小鼠血清中肌酐的水平；（Ｂ）邋Ｓｈａｍ組、Ｉ／Ｒ組和Ｔｅｍｐｏｌ邋＋邋Ｉ／Ｒ組鼠血清中ＢＵＮ的水平。Ｍｅａｎ土邋ＳＥＭ（ｎ＝８），邋＊Ｐ＜ｆｔｆｔ５，與Ｓｈａｍ組相比；與Ｉ／Ｒ組相比。逡逑

邐Ｓｈａｍ邐ｌ／Ｒ邐Ｔｅｍｐｏｌ＋Ｉ／Ｒ逡逑圖４．２小鼠缺血再灌注２４邋ｈ后血清中氧化應(yīng)激水平。（Ａ）邋Ｓｈａｍ組、Ｉ／Ｒ組和逡逑Ｔｅｍｐｏｌ邋＋邋Ｉ／Ｒ組小鼠血清中ＳＯＤ的水平；（Ｂ）邋Ｓｈａｍ組、Ｉ／Ｒ組和Ｔｅｍｐｏｌ邋＋邋Ｉ／Ｒ組逡逑小鼠血清中ＣＡＴ的水平；（Ｃ）邋Ｓｈａｍ組、Ｉ／Ｒ組和Ｔｅｍｐｏｌ邋＋邋１／Ｒ組小鼠血清中０２－逡逑的水平；（Ｄ）邋Ｓｈａｍ組、Ｉ／Ｒ組和Ｔｅｍｐｏｌ邋＋邋１／Ｒ組小鼠血清中ＭＤＡ的水平。Ｍｅａｎ逡逑土邋ＳＥＭ邋（ｎ＝５），0＜０．仍，與Ｓｈａｍ組相比；＃尸＜邋ｆｔ邋０５，與Ｉ／Ｒ組相比。逡逑４．３小鼠缺血再灌注２４邋ｈ后腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化逡逑為了檢測缺血再灌注對(duì)小鼠腎臟組織形態(tài)產(chǎn)生的影響，我們通過ＰＡＳ染色法，逡逑對(duì)小鼠缺血再灌注２４邋ｈ后的腎臟組織進(jìn)行切片染色，觀察其形態(tài)結(jié)構(gòu)上的變化。逡逑１５逡逑

叫灥邋＿＿丨邋｜￡ｉｌｌｌ邐１１逡逑Ｓｈａｍ邐ｌ／Ｒ邋Ｔｅｍｐｏｌ＋Ｉ／Ｒ逡逑圖４．４邋Ｓｈａｍ組、丨／Ｒ組和Ｔｅｍｐｏｌ邋＋邋Ｉ／Ｒ組小鼠腎臟組織中Ａｋｔ和ｐ－Ａｋｔ表達(dá)水平。逡逑Ｍｅａｎ邋土邋ＳＥＭ邋（ｎ＝５），ｆｔ邋０５，與邋Ｓｈａｍ邋組相比；＃邋尸邋＜邋ｆｔ邋０５，與邋Ｉ／Ｒ邋組相比。逡逑４．５邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ■檢測邋ｍＴＯＲ邋和邋ｐ－ｍＴＯＲ邋表徶逡逑ｍＴＯＲ是絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶，作用于眾多信號(hào)蛋白、結(jié)構(gòu)蛋白和轉(zhuǎn)錄因逡逑子，調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、增殖、存活和凋亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與Ｓｈａｍ組相比，缺血逡逑再灌注小鼠腎臟組織中磷酸化ｍＴＯＲ邋（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ－ｍＴＯＲ，ｐ－ｍＴＯＲ）表達(dá)明顯逡逑下調(diào)，當(dāng)給予Ｔｅｍｐｏｌ治療缺血再灌注２４邋ｈ后，小鼠腎臟組織中ｐ－ｍＴＯＲ表達(dá)顯逡逑著上調(diào)。逡逑＝１．５．逡逑．２逡逑Ｓｈａｍ邋ｌ／Ｒ邋Ｔｅｍｐｏｌ＋Ｉ／Ｒ邋｜逡逑ｐ－ｍＴＯＲ邋Ｍｍｍ邐，邋Ｖ邐ｓ邐Ｉ邋１．０－邐￣逡逑ｌｉＷｆｆ邋■邐ｒＷｍ邋．邋Ｊｇｇｇｌ邐２：邐Ｊ逡逑Ｏｆ邐＃逡逑邐Ｈ邐Ｏ逡逑＿邋丨灥呡ｉ！邐0，ｌ邐１．１邐＾邐Ｉ逡逑Ｓｈａｍ邐ｌ／Ｒ邐Ｔｅｍｐｏｌ＋Ｉ／Ｒ逡逑圖４．５邋Ｓｈａｍ組、丨／Ｒ組和Ｔｅｍｐｏｌ邋＋邋Ｉ／Ｒ組小鼠腎臟組織中ｍＴＯＲ和ｐ－ｍＴＯＲ表達(dá)逡逑水平。Ｍｅａｎ士ＳＥＭ（ｎ＝５）

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1 郎夏冰;楊毅;陳江華;;中國住院患者急性腎損傷流行病學(xué)調(diào)查現(xiàn)狀[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2016年02期

2 李貴森;吳昌為;;人工智能在急性腎損傷診斷中的價(jià)值和應(yīng)用[J];中國血液凈化;2019年11期

3 張美娟;朱斌;朱彩鳳;裘怡;袁博寒;孫s

本文編號(hào)：2770270