發(fā)布時(shí)間：2020-07-18 13:47

【摘要】：目的:1、人腎小球系膜細(xì)胞(human renal mesangial cells,HRMC)的體外培養(yǎng)及其生長(zhǎng)狀態(tài)觀察。2、研究正常糖、持續(xù)高糖及波動(dòng)高糖培養(yǎng)對(duì)人腎小球系膜細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響,比較其凋亡率、增殖率的差異。3、探究JNK信號(hào)通路在人腎小球系膜細(xì)胞凋亡過(guò)程中的激活情況及GLP-1受體激動(dòng)劑類(lèi)藥物艾塞那肽的抗細(xì)胞凋亡作用。4、探究GLP-1受體激動(dòng)劑類(lèi)藥物艾塞那肽對(duì)體外人腎小球系膜細(xì)胞的保護(hù)作用,探討其機(jī)制,為其應(yīng)用于糖尿病腎病的臨床治療提供理論依據(jù)。方法:1、進(jìn)行人腎小球系膜細(xì)胞的體外培養(yǎng),并在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。2、將人腎小球系膜細(xì)胞分為6組干預(yù):1組:用正常糖濃度(5.6mmol/L)培養(yǎng)基持續(xù)培養(yǎng)、2組:用高糖濃度(25mmol/L)培養(yǎng)基持續(xù)培養(yǎng)、3組:用波動(dòng)糖濃度(5.6mmol/L、25mmol/L交替)培養(yǎng)基培養(yǎng)(先用高糖濃度培養(yǎng)基培養(yǎng)3h,再用正常糖濃度培養(yǎng)基培養(yǎng)2h,一天中重復(fù)3次,然后正常糖濃度培養(yǎng)基過(guò)夜)、4組:用正常糖濃度(5.6mmol/L)培養(yǎng)基持續(xù)培養(yǎng)基礎(chǔ)上加用終濃度為100nmol/L的艾塞那肽、5組:用高糖濃度(25mmol/L)培養(yǎng)基持續(xù)培養(yǎng)基礎(chǔ)上加用終濃度為100nmol/L的艾塞那肽、6組:用波動(dòng)糖濃度(5.6mmol/L、25mmol/L交替)培養(yǎng)基培養(yǎng)(先用高糖濃度培養(yǎng)基培養(yǎng)3h,再用正常糖濃度培養(yǎng)基培養(yǎng)2h,一天中重復(fù)3次,然后正常糖濃度培養(yǎng)基過(guò)夜)基礎(chǔ)上加用終濃度為100nmol/L的艾塞那肽。6組分別干預(yù)24小時(shí)。在倒置顯微鏡下觀察6組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,并拍照記錄;cck8法測(cè)定6組細(xì)胞的增殖率;RT-PCR法測(cè)定各組細(xì)胞c-junmRNA的相對(duì)表達(dá)量;Western blot法測(cè)定各組細(xì)胞C-JUN蛋白的相對(duì)表達(dá)量;并利用SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析。結(jié)果:1、人腎小球系膜細(xì)胞體外傳代培養(yǎng)生長(zhǎng)狀態(tài)良好。2、倒置顯微鏡下觀察:低倍鏡下觀察未見(jiàn)明顯差異,波動(dòng)組及波動(dòng)加藥組細(xì)胞形態(tài)略不規(guī)則,細(xì)胞膜略模糊;高倍鏡下波動(dòng)組及波動(dòng)加藥組細(xì)胞胞內(nèi)顆粒增多。3、cck8測(cè)增殖率:正常糖組的增殖率大于高糖組及波動(dòng)組并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而從趨勢(shì)上看波動(dòng)組的增殖率要小于高糖組、兩者沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。對(duì)于GLP-1受體激動(dòng)劑能否在不同刺激下提高增殖率,cck8沒(méi)有在三組比較中全部得出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)論,但大致趨勢(shì)是加入GLP-1受體激動(dòng)劑后細(xì)胞增殖率出現(xiàn)升高。4、RT-PCR:正常糖組c-jun基因的相對(duì)表達(dá)量高糖組波動(dòng)組但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,對(duì)于GLP-1受體激動(dòng)劑能否在不同刺激下降低c-jun基因的相對(duì)表達(dá)量發(fā)揮抗凋亡作用,RT-PCR沒(méi)有在三組比較中得出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)論。5、Western blot:對(duì)于不同糖濃度及GLP-1受體激動(dòng)劑能否影響c-jun蛋白的相對(duì)表達(dá)量,Westen bolt沒(méi)有在六組比較中得出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)論,加入GLP-1受體激動(dòng)劑后c-jun蛋白的相對(duì)表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。6、結(jié)論:不能得出在高糖和波動(dòng)糖的刺激下,人腎小球系膜細(xì)胞中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡通路之一JNK通路出現(xiàn)了不同程度的激活。不能得出在艾塞那肽干預(yù)下,人腎小球系膜細(xì)胞中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡通路之一JNK通路出現(xiàn)了抑制。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R587.2;R692.9
【圖文】：

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 前能穩(wěn)定[30、31]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路涉及諸多包括 CHOP、JNK、caspase-12 在內(nèi)的信號(hào)導(dǎo)通路，不同通路具有選擇性且在凋亡過(guò)程中并非同時(shí)激活，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)因素、細(xì)胞類(lèi)型和細(xì)胞狀態(tài)不同可能導(dǎo)致不同信號(hào)通路的激活。本實(shí)驗(yàn)主研究 IRE-1/JNK 途徑，具體的 IRE-1 在無(wú)外界刺激時(shí)呈單體形式，較弱外界刺后其與 Bip 分離并形成有活性的二聚體并緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。在較強(qiáng)刺激下 I被持續(xù)激活并與 TRAF2 和 ASK1 形成復(fù)合物，通過(guò) 3 個(gè)級(jí)聯(lián)反應(yīng)雙磷酸化 JN活化的 JNK 進(jìn)入細(xì)胞核并對(duì)其下游轉(zhuǎn)錄因子 AP-1（包括 c-jun、junB、c-fos、ATEIK-1）和 P53 磷酸化最終誘導(dǎo)凋亡。

JNK 通路GLP-1 是一種生理狀態(tài)下受到食物刺激后由主要分分泌的含 37 個(gè)氨基酸殘基的肽類(lèi)激素[32]，基礎(chǔ)狀態(tài)下DPP-Ⅳ酶降解。GLP-1 受體激動(dòng)劑與 GLP-1 同源、與受體Ⅳ酶降解，從而大大延長(zhǎng)作用時(shí)間并增加其生物學(xué)效場(chǎng)的主要有短效的艾塞那肽和長(zhǎng)效的利拉魯肽。GLP-1構(gòu)的 G 蛋白偶聯(lián)受體，屬促胰泌素受體樣家族，廣泛胞、胰島細(xì)胞在內(nèi)的全身多種組織、細(xì)胞。其主要作食從而減輕體重，作用于下丘腦并抑制食欲，刺激胰制胰高血糖素分泌減少糖異生，促進(jìn)胰島素分泌[33、3存在，艾塞那肽作為 GLP-1 受體激動(dòng)劑類(lèi)藥物對(duì)腎臟、樞神經(jīng)系統(tǒng)、骨代謝、能量代謝均可產(chǎn)生不同影響。對(duì)腎臟疾病產(chǎn)生非常重要的影響并延緩糖尿病腎病的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞、腎小球系膜細(xì)胞、近端腎小管細(xì)胞、

正常糖組

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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2 王景;張宏;田國(guó)慶;郭蕾蕾;;槲皮素對(duì)高糖培養(yǎng)海馬神經(jīng)元凋亡及GRP78、Caspase-12蛋白表達(dá)的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年03期

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本文編號(hào)：2760968