【摘要】：研究背景及目的:腎細胞癌(RCC)是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,約占腎臟惡性腫瘤的90%~95%。常見臨床癥狀有腹部腫塊、無痛性血尿、腰痛,但出現(xiàn)這些癥狀時一般預示著RCC已進入晚期,而RCC患者的預后與診斷時的分期密切相關。目前RCC的診斷主要依靠超聲、CT、MRI等影像學檢查,確診率較低。谷氨酸化修飾是蛋白質翻譯后修飾的一種,常發(fā)生在微管蛋白的α-tubulin或β-tubulin。胞質羧肽酶(CCP6)是調節(jié)谷氨酸化修飾的一種酶,其表達不足會導致多聚谷氨酸化產物的累積。DNAJC7蛋白是熱休克蛋白的一種,它以ATP依賴的方式調節(jié)熱休克蛋白(HSP)70和90,發(fā)揮分子伴侶的功能。本研究將對多聚谷氨酸化的DNAJC7蛋白在腎癌早期診斷中的作用進行研究。材料及方法:采用RT-PCR、Western Blot、免疫組化的方法測定了RCC患者癌組織及癌旁組織中CCP6 m RNA水平及蛋白表達情況;采用質譜分析確定CCP6的底物以及使用免疫沉淀、免疫印跡等方法鑒定底物的多聚谷氨酸化修飾。進而采用電化學發(fā)光免疫分析技術(ECLIA)檢測了30位RCC患者、15位腎炎患者、17位腎結石患者及30位健康對照組的血清樣本中GT335抗體(可以識別多聚谷氨酸化修飾的蛋白質)的表達量,即底物多聚谷氨酸化修飾的程度,對上述結果進行驗證。實驗結果:RT-PCR、Western Blot、免疫組化等方法顯示RCC患者癌組織中CCP6 m RNA及蛋白表達量均顯著下降,通過質譜分析鑒定出CCP6的底物為多聚谷氨酸化修飾的DNAJC7蛋白,但RT-PCR檢測癌組織和癌旁組織中DNAJC7 m RNA水平,發(fā)現(xiàn)兩者并無明顯差異,免疫沉淀則顯示癌組織中多聚谷氨酸化修飾的DNAJC7蛋白表達顯著高于癌旁組織。因此,CCP6可以調控DNAJC7蛋白的多聚谷氨酸化修飾。進一步使用ECLIA法檢測RCC患者、不同腎病患者及對照組血清中的多聚谷氨酸化修飾的DNAJC7蛋白表達量,顯示RCC患者中其濃度顯著高于其他組,且能將RCC患者與腎臟良性病變患者進行區(qū)分。因此,多聚谷氨酸化修飾的DNAJC7蛋白可以作為RCC的一個靈敏性、特異性均較高的早期診斷標志物。結論:本研究表明多聚谷氨酸化修飾的DNAJC7蛋白可以作為RCC早期診斷的一種血清生物標志物,其區(qū)分早期RCC與其他腎臟良性疾病的能力較好,具有較高的靈敏性和特異性。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.11

【參考文獻】

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1 高囡囡;鮑嵐;;微管蛋白的翻譯后修飾及功能研究[J];生命科學;2015年03期

本文編號：2758441