【摘要】：目的:通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)UNC5C基因截短突變體對腎胞癌細(xì)胞存活功能的影響。方法:通過慢病毒感染構(gòu)建野生型以及突變型腎癌穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,進(jìn)行一些列的功能實(shí)驗(yàn)以及凋亡指標(biāo)檢測。通過野生型與突變型共轉(zhuǎn)染,探究此突變對野生型的影響。結(jié)果:通過數(shù)據(jù)庫分析UNC5C在三種腎癌組織的表達(dá)均低于正常組織。根據(jù)TCGA數(shù)據(jù)庫腎透明細(xì)胞癌的臨床數(shù)據(jù),我們發(fā)現(xiàn)UNC5C高表達(dá)患者預(yù)后好于低表達(dá)患者(P0.001)。通過Cbio在線分析我們發(fā)現(xiàn)存在14例患者于第491位氨基酸發(fā)生突變Q491Pfs*3,并且次突變?yōu)榻囟掏蛔�。我們對此階段突變位點(diǎn)進(jìn)行野生型與突變型的質(zhì)粒構(gòu)建,通過慢病毒感染構(gòu)建構(gòu)建野生型及突變型腎癌穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,提取細(xì)胞總蛋白進(jìn)行凋亡相關(guān)蛋白酶Caspase-3的蛋白電泳測定,我們發(fā)現(xiàn)UNC5C突變體相比野生型可以減少腎癌細(xì)胞凋亡。將野生型普通表達(dá)質(zhì)粒與突變體普通表達(dá)質(zhì)粒與ACHN細(xì)胞系共轉(zhuǎn)染,收取全蛋白檢測轉(zhuǎn)染情況以及NTN1的表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)UNC5C突變體穩(wěn)定其野生型的蛋白表達(dá)并誘導(dǎo)其配體NTN1的表達(dá),證明此截短突變體能穩(wěn)定UNC5C全長的表達(dá)并誘導(dǎo)NTN1的表達(dá)上升從而抑制腎癌細(xì)胞的凋亡。結(jié)論:UNC5C截短突變體穩(wěn)定其野生型的蛋白表達(dá)并誘導(dǎo)其配體NTN1的表達(dá),從而促進(jìn)腎癌細(xì)胞的存活。本研究通過實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步了解了依賴性受體UNC5C的截短突變的生物學(xué)效應(yīng),為研究其它截短突變位點(diǎn)研究提供思路。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.11
【圖文】：

UNcsc在腎透明細(xì)胞癌中的突變情況

蛋白電泳驗(yàn)證野生型與突變型的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株

UNcsc的科研熱度14UNCSC相關(guān)疾病研究同時，通過公共數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計(jì)，UNCSC相關(guān)疾病研究情況如圖ZOUNcsc與癌癥、阿爾茲海默病以及帕金森病雜弓密切相關(guān)

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本文編號：2757478