【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)通過研究Rho相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)抑制劑RKI-1447對外源性TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠尿道成纖維細(xì)胞的增殖、遷移、細(xì)胞外基質(zhì)合成、膠原酶抑制因子及細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)的影響,為臨床應(yīng)用ROCK抑制劑治療和預(yù)防尿道狹窄形成提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:原代培養(yǎng)大鼠尿道成纖維細(xì)胞并鑒定。實(shí)驗(yàn)分為三大組,包括正常組,對照組(予10μg/L TGF-β1處理細(xì)胞)及實(shí)驗(yàn)組(予10μg/L TGF-β1+1,2,4,8,16μmol/L RKI-1447處理細(xì)胞)。用MTT比色法檢測細(xì)胞活力;用Transwell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力變化;用Western印跡法檢測各組I型膠原蛋白、III型膠原蛋白、TIMP-1、α-SMA、p-MLC、ROCK-1的表達(dá)量。結(jié)果:TGF-β1能誘導(dǎo)大鼠尿道成纖維細(xì)胞增殖及遷移,能誘導(dǎo)I型膠原蛋白、III型膠原蛋白、TIMP-1、α-SMA、p-MLC、ROCK-1的表達(dá)。與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組尿道成纖維細(xì)胞增殖及細(xì)胞遷移能力下降;隨著加入的RKI-1447的濃度升高,實(shí)驗(yàn)組I型膠原蛋白、III型膠原蛋白、TIMP-1、α-SMA、p-MLC、ROCK-1的表達(dá)逐漸減少。結(jié)論:RKI-1447可抑制外源性TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠尿道成纖維細(xì)胞的增殖、遷移、細(xì)胞外基質(zhì)成分I型和III型膠原蛋白的合成以及細(xì)胞中膠原酶抑制因子TIMP-1、細(xì)胞骨架蛋白α-SMA、p-MLC的表達(dá)。它在防治尿道狹窄形成中的作用值得進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R695
【圖文】：

圖 1.尿道成纖維細(xì)胞波形蛋白免疫熒光鑒定（400×）7 對 TGF-β1 誘導(dǎo)的尿道成纖維細(xì)胞增殖的結(jié)果顯示，與正常組相比，經(jīng) 10μg/L TGF-β1 處nm 吸光度（OD）值升高，刺激了成纖維細(xì)胞生長（間 24h 組中，當(dāng) RKI-1447 濃度為 1μmol/L 時(shí)，OD（表 1）；當(dāng)藥物濃度達(dá)到 2μmol/L 時(shí)，OD 值降低藥物濃度的升高，對細(xì)胞增殖的抑制作用逐漸增強(qiáng)學(xué)意義（表 1、圖 2，P<0.05）。間 48h 組中，RKI-1447 對 TGF-β1 誘導(dǎo)的尿道成纖隨藥物濃度的升高其抑制作用逐漸增強(qiáng)（表 1、圖間（24h、48h）抑制率曲線（圖 2），可得知在同一 24h 抑制率；經(jīng)計(jì)算得 48h 半抑制濃度（IC50）為

組別 24h 48h正常組 0.560±0.007 0.698±0.006對照組 0.826±0.032*1.090±0.008*1μmol/L 干預(yù)組 0.807±0.013 0.799±0.034#2μmol/L 干預(yù)組 0.783±0.007#0.748±0.009#4μmol/L 干預(yù)組 0.721±0.014#0.646±0.019#8μmol/L 干預(yù)組 0.638±0.021# %

本文編號：2745227