【摘要】：研究背景:2007年,美國(guó)4000多只狗、貓食用了含有三聚氰胺的飼料而出現(xiàn)腎功能衰竭。2008年,因長(zhǎng)期食用含有三聚氰胺的嬰幼兒配方奶粉,我國(guó)累計(jì)294,000嬰幼兒接受檢查治療,其中住院患兒51,900人,死亡4人,主要是因?yàn)槿矍璋穼?dǎo)致了泌尿系結(jié)石和腎衰竭。2008年,就診于我院門診的泌尿系結(jié)石患兒數(shù)量也明顯增多,這些患兒年齡多在3歲以內(nèi),表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、咳痰、哭鬧、惡心、腹瀉、嘔吐、少尿、無(wú)尿、血尿等癥狀,少數(shù)家屬發(fā)現(xiàn)患兒尿液混濁或在患兒尿液中發(fā)現(xiàn)泥沙樣結(jié)石排出,通過(guò)超聲可以診斷為泌尿系結(jié)石。當(dāng)詢問(wèn)這些患兒病史時(shí),我們發(fā)現(xiàn)這些患兒都在喂養(yǎng)同一品牌奶粉(三鹿牌嬰幼兒配方奶粉)。隨后,我院泌尿外科將該事件及時(shí)上報(bào)省衛(wèi)生廳。并針對(duì)這一社會(huì)重大熱點(diǎn)問(wèn)題,采用流行病學(xué)方法探討了嬰幼兒發(fā)生三聚氰胺泌尿系結(jié)石以及梗阻性急性腎損傷的危險(xiǎn)因素。在臨床診治過(guò)程中探索了體外沖擊波碎石、手術(shù)干預(yù)等治療方案,改進(jìn)了藥物溶石及腎后性急性腎損傷的治療方案,建立了一整套行之有效的診療方法。對(duì)部分患兒進(jìn)行了1到3年的跟蹤隨訪,并對(duì)不同治療方式的安全性、有效性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。采用相關(guān)物理化學(xué)方法,定量測(cè)定了患兒結(jié)石、血漿及尿液標(biāo)本中三聚氰胺含量并定性分析了結(jié)石的形態(tài)及成分。然而關(guān)于三聚氰胺相關(guān)泌尿系結(jié)石細(xì)胞和動(dòng)物模型的建立及實(shí)驗(yàn)研究在國(guó)內(nèi)外均較少,氧化損傷被認(rèn)為是普通泌尿系結(jié)石形成的重要機(jī)制之一,本研究首先建立三聚氰胺相關(guān)泌尿系結(jié)石細(xì)胞和動(dòng)物模型,之后我們利用還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶的抑制劑香莢蘭乙酮(apocynin)對(duì)這兩種模型進(jìn)行干預(yù),為抗氧化損傷預(yù)防和治療三聚氰胺相關(guān)泌尿系結(jié)石提供分子生物學(xué)依據(jù)。研究目的:通過(guò)建立三聚氰胺相關(guān)泌尿系結(jié)石細(xì)胞和動(dòng)物模型,觀察氧化損傷程度、泌尿系結(jié)石相關(guān)蛋白的表達(dá)、動(dòng)物腎臟組織病理變化、腎臟內(nèi)結(jié)晶的沉積和腎毒性的改變,并預(yù)防性和治療性的使用apocynin,觀察上述指標(biāo)的變化。從而探討三聚氰胺相關(guān)泌尿系結(jié)石發(fā)病機(jī)制,為泌尿系結(jié)石的發(fā)病機(jī)制提供相應(yīng)的理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法:在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)三聚氰胺和三聚氰酸(melamineandcyanuricacid,mca)的混合物(600μmol/l,1:1)刺激人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(hk-2)來(lái)建立三聚氰胺相關(guān)泌尿系結(jié)石的細(xì)胞模型。同時(shí)預(yù)防性或治療性地給予不同濃度的香莢蘭乙酮(apocynin)(0.1或0.2mmol/l),當(dāng)mca混合物作用hk-2細(xì)胞24小時(shí)后,收集細(xì)胞和培養(yǎng)液,檢測(cè)氧化應(yīng)激(os)的指標(biāo)丙二醛(mda)、8-異前列腺素(8-ip)及超氧化物歧化酶(sod)。同時(shí)用免疫印跡(westernblotting)的方法半定量檢測(cè)泌尿系結(jié)石相關(guān)蛋白骨橋蛋白(opn)和絲裂原活化蛋白激酶(mapk)的表達(dá)情況。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)給予mca混合物(400mg/day/kg,1:1)誘導(dǎo)雄性sd大鼠三聚氰胺相關(guān)泌尿系結(jié)石的形成。同時(shí)預(yù)防性或治療性地給予不同濃度的香莢蘭乙酮(0.2或0.4g/kg/day),造模28天后,對(duì)大鼠和其腎臟進(jìn)行稱重,并收集大鼠的尿液、血液和腎臟,檢測(cè)os和腎毒性(絕對(duì)腎重量、相對(duì)腎重量、尿素氮和血肌酐)的指標(biāo),對(duì)大鼠一側(cè)腎臟用20%的甲醛進(jìn)行固定并進(jìn)行he染色石蠟切片,普通光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠腎臟的病理變化及結(jié)晶的形成情況并進(jìn)行評(píng)分。并用激光共聚焦顯微鏡對(duì)沒(méi)有he染色透明的石蠟切片內(nèi)的結(jié)晶進(jìn)行觀察。同時(shí)用免疫組織化學(xué)的方法對(duì)腎組織切片進(jìn)行免疫組化染色,觀察泌尿系結(jié)石相關(guān)蛋白o(hù)pn和p-p38mapk的表達(dá)情況,用westernblotting的方法對(duì)這兩種蛋白進(jìn)行半定量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,被mca混合物誘導(dǎo)的hk-2細(xì)胞中,os指標(biāo)、opn和p-p38mapk兩種泌尿系結(jié)石相關(guān)蛋白表達(dá)都是增高的,當(dāng)預(yù)防性的給予apocynin后,上述指標(biāo)下降(p0.05).但是當(dāng)治療性的給予apocynin后,os指標(biāo)下降(p0.05),但結(jié)石相關(guān)蛋白o(hù)pn和p-p38沒(méi)有顯著的變化(p0.05)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,mca混合物誘導(dǎo)的三聚氰胺相關(guān)泌尿系結(jié)石sd大鼠腎毒性、腎臟病理變化評(píng)分、腎結(jié)晶評(píng)分、os指標(biāo)以及泌尿系結(jié)石相關(guān)蛋白都較正常大鼠顯著增高(p0.05),當(dāng)預(yù)防性的給予apocynin后,上述指下降(p0.05)。當(dāng)治療性的給予apocynin后,os指標(biāo)下降(p0.05),但上述其他指標(biāo)較三聚氰胺相關(guān)泌尿系結(jié)石大鼠無(wú)顯著改善(p0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:OS是三聚氰胺相關(guān)泌尿系結(jié)石發(fā)病的重要機(jī)制之一,apocynin對(duì)三聚氰胺相關(guān)泌尿系結(jié)石具有一定的預(yù)防性作用。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R726.9
【圖文】：

位論文 香莢蘭乙酮對(duì)三聚氰胺相關(guān)泌尿系結(jié)石形成的影響及其境中超細(xì)微顆粒物如細(xì)胞因子、細(xì)菌脂多糖(LPS)、感染子、炎性介質(zhì)、草酸根等刺激腎臟后，Nox蛋白被激活產(chǎn)生直接抑制入侵的外源物，是機(jī)體不可缺少防御屏障。當(dāng)機(jī)機(jī)體抗氧化損傷的能力時(shí)，殘余的ROS會(huì)導(dǎo)致腎臟炎性反胞內(nèi)的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和染色體的損傷，從而導(dǎo)致腎臟很多

香莢蘭乙酮化學(xué)結(jié)構(gòu)圖

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本文編號(hào)：2739651