【摘要】：一、背景前列腺癌(prostate cancer,PCa)是世界范圍內(nèi)最常診斷的癌癥之一,嚴(yán)重危害男性的健康,尋找前列腺癌治療的分子靶點成為了當(dāng)下的熱點。硫氧還蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)作為抑癌因子,在人類多種腫瘤中被下調(diào),但是目前尚未對TXNIP參與前列腺癌發(fā)生發(fā)展及具體的生物學(xué)功能進(jìn)行深入而全面的研究。二、目的研究TXNIP在前列腺癌組織中的表達(dá),并探究TXNIP與前列腺癌的臨床和病理參數(shù)之間的相關(guān)性。進(jìn)一步通過體外細(xì)胞實驗,探索TXNIP的過表達(dá)對前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖、克隆形成能力,細(xì)胞周期、凋亡,遷移和侵襲能力的影響,為揭示TXNIP在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)作用及為前列腺癌的分子治療提供實驗基礎(chǔ)。三、方法1.收集50例前列腺癌組織標(biāo)本(以49例良性前列腺增生組織為對照組),采用免疫組織化學(xué)染色法檢測組織中TXNIP的表達(dá)水平,分析TXNIP的表達(dá)水平與前列腺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性;2.通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù),構(gòu)建TXNIP過表達(dá)PC-3細(xì)胞。分為空白對照組(CON),陰性對照組(LV-NC)和過表達(dá)TXNIP組(LV-TXNIP),而后采用qRT-PCR和Western Blot驗證轉(zhuǎn)染效率;3.細(xì)胞穩(wěn)定過表達(dá)TXNIP后,前列腺癌PC-3細(xì)胞的增殖能力采用CCK-8和克隆形成實驗檢測,細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期分布采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測;細(xì)胞遷移和侵襲能力采用劃痕實驗和Transwell小室實驗檢測。四、結(jié)果1.TXNIP在前列腺癌組織中的陽性表達(dá)率為36.0%(18/50),顯著低于良性前列腺增生組織79.6%(39/49),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。前列腺癌組織中TXNIP的陽性表達(dá)率與患者術(shù)前前列腺特異性抗原(prostate specific antigen,PSA)、TNM分期、Gleason評分顯著相關(guān)(P0.05),而與年齡無關(guān)。2.慢病毒轉(zhuǎn)染PC-3細(xì)胞后,采用嘌呤霉素藥物篩選,通過qRT-PCR和Western Blot方式驗證轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果顯示,LV-TXNIP組mRNA和蛋白表達(dá)量相對LV-NC組和CON組顯著升高(P0.001)。3.與CON組和LV-NC組對比,LV-TXNIP組PC-3細(xì)胞的克隆形成、增殖能力,侵襲和遷移能力顯著降低;此外,LV-TXNIP組細(xì)胞總凋亡率顯著升高,細(xì)胞周期阻滯于G0/1期,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。五、結(jié)論TXNIP在前列腺癌組織中顯下調(diào),且TXNIP陽性表達(dá)與前列腺癌患者PSA、TNM分期和Gleason評分顯著相關(guān);過表達(dá)TXNIP抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞的生長能力、侵襲和遷移能力,并促進(jìn)細(xì)胞凋亡和周期阻滯于G0/1期。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.25
【圖文】：

為了研究ＴＸＮＩＰ在前列腺組織中的表達(dá)差異，本實驗采用了免疫組織化學(xué)染逡逑色的方法，檢測了邋ＴＸＮＩＰ蛋白在前列腺癌和良性前列腺增生組織中的表達(dá)情況。逡逑結(jié)果顯示，ＴＸＮＩＰ蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，見圖１－１。在前列腺癌組織中，ＴＸＮＩＰ逡逑呈陰性表達(dá)為主，細(xì)胞質(zhì)為透明無色，陽性表達(dá)率為３６．０％邋（１８／５０）；在良性前逡逑列腺增生組織中，ＴＸＮＩＰ多為強陽性表達(dá)，為彌漫片狀棕褐色，陽性表達(dá)率為７９．邋６％逡逑（３９／４９），前列腺癌組織中ＴＸＮ１Ｐ蛋白的陽性表達(dá)率顯著低于良性前列腺增生逡逑組織（戶＜０．０５），見表１－１。逡逑Ａ邐ＢＰＨ邐ＰＣａ邐％逡逑Ｎｅｙａｔｉｖｅ邋［邐＾．廠邐一邐一－…逡逑Ｖ＇．．．．／邐，價邐，邐＂卜邋一一邋丁逡逑—邐■如）邐Ｖ邋．＇－邋Ｕ．Ｉ＇邋邐邋士逡逑圖１－１邋ＴＸＮＩＰ在前列腺癌組織中表達(dá)下調(diào)。Ａ．免疫組織化學(xué)染色顯示ＴＸＮＩＰ在良性前列腺逡逑增生和前列腺癌組織中的表達(dá)。Ｂ．邋４９例良性前列腺增生和５０例前列腺癌組織中ＴＸＮＩＰ免逡逑疫組織化學(xué)染色評分結(jié)果。ＴＸＮＩＰ在不同前列腺組織陽性表達(dá)率的比較采用卡方檢驗，逡逑＜０．０５．逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１邋Ｌｏ

逑為了進(jìn)一步驗證慢病毒轉(zhuǎn)染效率，我們采用ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ的方法在蛋白水平逡逑上檢測ＴＸＮＩＰ的表達(dá)。如圖２－１Ｃ，以ｐ－ａｃｔｉｎ為內(nèi)參蛋白，ＣＯＮ組蛋白質(zhì)相對逡逑表達(dá)量為（０．４０±０．０５）、１＾－l枺鶴櫚鞍字氏嘍員澩锪課ǎ埃矗

本文編號：2738899