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輸尿管不全梗阻平滑肌肌球蛋白及其重鏈mRNA表達(dá)的研究

發(fā)布時(shí)間:2020-07-02 20:47
【摘要】:目的:輸尿管不全梗阻為泌尿外科常見疾病,梗阻后導(dǎo)致輸尿管、腎盂擴(kuò)張積水,但該病變過(guò)程中,輸尿管本身的改變將先于腎臟,探討不全性輸尿管梗阻不同時(shí)間段平滑肌結(jié)構(gòu)與功能改變,可為臨床如何控制輸尿管不全梗阻非手術(shù)治療時(shí)間長(zhǎng)短及輸尿管不可逆性損害提供理論參。方法:將120只SD大鼠(雌雄各60只)隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組;陰性對(duì)照組30只,對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組各45只,陰性對(duì)照組不實(shí)施干預(yù)措施,對(duì)照組麻醉后腹部切開,游離右側(cè)輸尿管下段約2.5cm,逐層縫合腹部切口;實(shí)驗(yàn)組參照腰大肌隧道包埋法實(shí)施右側(cè)輸尿管下段包埋,建立輸尿管不全梗阻模型;術(shù)后各組1、2、3周分別隨機(jī)處死部分大鼠,觀察、照相并切取雙側(cè)腎、輸尿管,陰性對(duì)照組每周處死10只,對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組每周處死15只。取梗阻部位以上輸尿管,分為兩部分,一部分部分存放于-80℃冰箱保存,另一部分用4%多聚甲醛固定后制作成為石蠟標(biāo)本。通過(guò)觀察、測(cè)量不同時(shí)間段輸尿管直徑,免疫組化定性檢測(cè)輸尿管平滑肌肌球蛋白表達(dá)量,RT-PCR定量檢測(cè)平滑肌肌球蛋白重鏈mRNA表達(dá)量。結(jié)果:1.輸尿管形態(tài)學(xué)改變?nèi)庋塾^察:陰性對(duì)照組及對(duì)照組右側(cè)輸尿管未見明確粘連、梗阻、無(wú)明顯增粗,實(shí)驗(yàn)組1、2、3周右側(cè)輸尿管包埋處粘連,包埋近端輸尿管增粗,遠(yuǎn)端與對(duì)側(cè)無(wú)明顯差異,剪斷遠(yuǎn)端見尿液溢出,梗阻3周組輸尿管增粗較為明顯,腎臟體積也明顯增大;切除輸尿管剖開見實(shí)驗(yàn)組管腔較對(duì)照組寬;鏡下觀察:陰性對(duì)照組及對(duì)照組各周輸尿管壁無(wú)明顯變化,炎癥反應(yīng)輕,少量炎細(xì)胞浸潤(rùn);實(shí)驗(yàn)組1周:右側(cè)輸尿管壁增厚,部分平滑肌增生,可見少量纖維結(jié)締組織增生;2周:右側(cè)輸尿管壁增厚明顯,平滑肌層增厚、細(xì)胞增生、核增大,部分細(xì)胞排列紊亂,可見部分輸尿管纖維化改變;3周:右側(cè)輸尿管壁變薄,單位橫切面平滑肌減少,細(xì)胞核變小,肌細(xì)胞減少,大量纖維化結(jié)締組織增生。2.輸尿管直徑變化陰性對(duì)照組、對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組各周右側(cè)輸尿管直徑間存在差異,對(duì)照組與陰性對(duì)照組右側(cè)輸尿管直徑比較無(wú)顯著性差異(P0.05),二者與實(shí)驗(yàn)組各周比較存在顯著性差異(P0.01);實(shí)驗(yàn)組隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng),梗阻近端輸尿管擴(kuò)張逐漸增加、直徑逐漸增大,以第3周組最為顯著,與其它周組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。3.輸尿管平滑肌肌球蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)各組右側(cè)輸尿管平滑肌肌球蛋白均有不同程度的表達(dá),陰性對(duì)照與對(duì)照比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),二者與實(shí)驗(yàn)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);實(shí)驗(yàn)組1、2周右側(cè)梗阻近端輸尿管平滑肌肌球蛋白表達(dá)量逐漸增加、2周時(shí)最明顯,3周時(shí)卻顯著減少,其間差異有顯著性(P0.01),且3周組表達(dá)低于陰性對(duì)照與對(duì)照組(P0.01)。4.輸尿管平滑肌肌球蛋白重鏈mRNA表達(dá)陰性對(duì)照組、對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組各周均有不同程度的表達(dá),彼此間存在差異,陰性對(duì)照與對(duì)照組間比較差異無(wú)顯著意義(P0.05),二者與實(shí)驗(yàn)組各周比較差異有顯著意義(P0.01);實(shí)驗(yàn)組1、2周右側(cè)梗阻近端輸尿管平滑肌肌球蛋白重鏈mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于陰性對(duì)照和對(duì)照組(P0.01);3周時(shí)右側(cè)梗阻近端輸尿管平滑肌肌球蛋白重鏈mRNA相對(duì)表達(dá)量卻顯著低于陰性對(duì)照和對(duì)照組(P0.01);實(shí)驗(yàn)組1、2、3周肌球蛋白重鏈m RNA相對(duì)表達(dá)量隨著梗阻時(shí)間延長(zhǎng)呈現(xiàn)先增加后降,1、2周增加,以2周時(shí)最明顯,3周降低,顯著低于1周組(P0.01)。結(jié)論:1.輸尿管不全梗阻時(shí)間越長(zhǎng),輸尿管平滑肌損害越重;2.輸尿管不全梗阻持續(xù)過(guò)程中,平滑肌細(xì)胞肌球蛋白及其重鏈表達(dá)的變化與輸尿管形態(tài)結(jié)構(gòu)改變基本一致。3.輸尿管不全梗阻超過(guò)2周,其形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)與分子水平的變化較明顯。
【學(xué)位授予單位】:遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2018
【分類號(hào)】:R693
【圖文】:

輸尿管,實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組,輸尿管梗阻


圖 1 實(shí)驗(yàn)各組不同時(shí)段左右輸尿管及腎臟形態(tài)學(xué)變化:A1、2、3:陰性對(duì)照組 1、2、3 周;B1、2、3:對(duì)照組 1、2、3 周;C1、2、3:實(shí)驗(yàn)組 1、2、3 周。2.3 輸尿管不全梗阻時(shí)段直徑的變化陰性對(duì)照組、對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組 1、2、3 周輸尿管直徑用游標(biāo)卡尺(0.05mm)測(cè)得結(jié)果為:陰性對(duì)照組 1 周 1.061±0.020,2 周 1.041±0.012,3 周 1.045±0.021;對(duì)照組 1 周 1.049±0.076,2 周 1.041±0.030,3 周 1.046±0.033;實(shí)驗(yàn)組 1 周 1.422±0.141,2 周 2.413±0.387,3 周 4.232±0.396。陰性對(duì)照與對(duì)照組各周比較,輸尿管直徑變化無(wú)顯著性差異(P>0.05);實(shí)驗(yàn)組各周與對(duì)照組及陰性對(duì)照組比較,右側(cè)輸尿管梗阻近端直徑變化有顯著性差異(P<0.01);實(shí)驗(yàn)組 1、2、3 周右側(cè)輸尿管梗阻近端擴(kuò)直徑逐漸增大,以 3 周最明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(見表 4、圖 2)。

柱狀圖,輸尿管,實(shí)驗(yàn)組,柱狀圖


△P<0.01;圖 2 陰性對(duì)照組、對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組右側(cè)輸尿管直徑平均值柱狀圖2.4 鏡下觀察HE 染色觀察到輸尿管形態(tài)學(xué)改變(見圖 3、圖 4)。陰性對(duì)照組及對(duì)照組右側(cè)輸尿管平滑肌細(xì)胞排列規(guī)律、完整,細(xì)胞核呈長(zhǎng)橢圓形,無(wú)明顯核異型,與實(shí)驗(yàn)組間差異較大;實(shí)驗(yàn)組 1 周,右側(cè)輸尿管壁稍增厚,平滑肌層為主,平滑肌細(xì)胞排列紊亂,可見部分細(xì)胞代償性肥大,間質(zhì)增生的纖維結(jié)締組織延伸到細(xì)胞間,細(xì)胞間連續(xù)性及規(guī)律性被局部被破壞;2 周,右側(cè)輸尿管壁明顯增厚,肌層明顯增生肥厚,細(xì)胞排列紊亂,體積增大,胞核成長(zhǎng)梭型,漿膜下部分纖維也有增生;3 周,右輸尿管壁明顯變薄,肌層明顯,細(xì)胞萎縮,體積變小,細(xì)胞核變小變圓,大量纖維增生取代平滑肌。

【參考文獻(xiàn)】

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