【摘要】：目的:IgA腎病(IgA nephropathy,IgAN)是世界上最常見的腎小球腎炎,由于其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,因此探討其發(fā)生進(jìn)展的機(jī)制、以及尋找其特異性的治療靶點(diǎn)顯得尤為重要。甘露聚糖結(jié)合凝集素(MBL)在近些年逐漸成為研究熱點(diǎn),其參與多種疾病的發(fā)生及進(jìn)展,但其在IgA腎病中的作用機(jī)制并不明確。課題組通過前期實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)腎小球系膜區(qū)MBL沉積和尿液高M(jìn)BL的水平與Ig A腎病的疾病發(fā)展以及不良預(yù)后相關(guān),且體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)MBL能促進(jìn)人腎系膜細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),生物信息學(xué)預(yù)測MBL可能與成纖維細(xì)胞生長因子受體4(FGFR4)相互作用,進(jìn)而推測其相互作用能夠?qū)е禄虼龠M(jìn)系膜細(xì)胞損傷而致嚴(yán)重腎損傷。本研究將在既往研究基礎(chǔ)上,進(jìn)一步證實(shí)MBL與FGFR4的相互作用,并探討這種相互作用對人腎系膜細(xì)胞的損傷效應(yīng)。研究方法:本實(shí)驗(yàn)收集了186例經(jīng)腎活檢證實(shí)的IgAN患者的血清標(biāo)本,通過ELISA法檢測IgAN患者血清中MBL的水平;通過腎活檢組織免疫熒光、以及系膜細(xì)胞免疫熒光方法檢測MBL與FGFR4的共沉積;免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)MBL與FGFR4的相互作用;通過ELISA法檢測MBL與FGFR4相互作用并對人腎系膜細(xì)胞上清中炎癥因子表達(dá)的影響。結(jié)果:1、血清MBL ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示IgAN患者組中血清MBL水平要顯著高于健康對照組(716.2±23.14 ng/ml vs 440.7±40.14 ng/ml,P0.001);2、腎活檢組織免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)MBL與FGFR4均可沉積于腎小球系膜區(qū),且二者可以共沉積;3、人腎系膜細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示三組不同處理因素的系膜細(xì)胞均存在MBL與FGFR4的表達(dá),MBL與FGFR4在核和漿均表達(dá)以及共沉積。高濃度MBL(800ng/ml)血清+rMBL(1μg/ml)組二者的表達(dá)強(qiáng)度要高于低濃度MBL(400ng/ml)血清組;低濃度MBL血清組二者的表達(dá)強(qiáng)度要高于正常血清對照組。4、內(nèi)源性免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)MBL與FGFR4能夠相互作用,并且這種相互作用在高濃度MBL血清+rMBL(1μg/ml)組比較明顯;5、人腎系膜細(xì)胞上清液IL-6的蛋白水平在正常對照組、低濃度MBL血清組、高濃度MBL血清+rMBL(1μg/ml)組逐漸增高(高濃度MBL血清+rMBL vs.低濃度血清組,162.80±6.45pg/ml vs.37.16±1.80 pg/m,P0.001;低濃度血清組vs.正常血清對照組,37.16±1.80 pg/m vs.28.00±2.67 pg/ml,P0.05)。系膜細(xì)胞MCP-1的蛋白水平顯示出類似的趨勢(高濃度MBL血清+rMBL vs.低濃度血清組,195.2±8.23 pg/ml vs.58.23±3.40 pg/ml,P0.001;低濃度血清組vs.正常血清對照組,58.23±3.40 pg/ml vs.38.03±5.10 pg/ml,P0.01),組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1、MBL與FGFR4在腎小球系膜區(qū)以及人腎系膜細(xì)胞中存在共沉積;2、人腎系膜細(xì)胞內(nèi)源性MBL與FGFR4存在相互作用;3、MBL與FGFR4相互作用能夠促進(jìn)系膜細(xì)胞炎癥因子的分泌,并可能導(dǎo)致腎臟損傷。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R692.31
【圖文】：

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果SA 法檢測 IgA 腎病患者血清 MBL 水平測 IgAN 患者血清中 MBL 的蛋白表達(dá)情況，我們首先在遵循患下，收集了 186 例經(jīng)腎活檢病理診斷的 IgAN 患者血清，以及 血清，置于-80℃冰箱儲存?zhèn)溆�，隨后采用 Human MBL Elisa 試BL 水平的檢測，并根據(jù)檢測出的 MBL 濃度的高（>800ng/ml/ml）用于后續(xù)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示 IgAN 患者組(IgAN group）要顯著高于健康對照組（Control group）（716.2±23.14 ng/ml vs 440..001），兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖 3.2 激光共聚焦顯微鏡檢測 IgA 腎病患者腎活檢組織MBL 和 FGFR4 的表達(dá)（×200）圖中 MBL 采用的是綠色熒光染色標(biāo)簽，F(xiàn)GFR4 采用的是紅色熒光染色標(biāo)簽，DAPI 采用是藍(lán)色熒光染色標(biāo)簽（即核染色），Merge 表示三者重合的結(jié)果；（-）表示陰性對照組，即IgAN 患者腎小球中無 MBL 與 FGFR4 表達(dá)，（+）表示陽性組，即在 IgAN 患者腎小球系膜中存在 MBL 與 FGFR4 共表達(dá)3.3 免疫熒光法檢測MBL與FGFR4在體外培養(yǎng)人腎系膜細(xì)胞中的共沉積為了進(jìn)一步驗(yàn)證 MBL 與 FGFR4 在人腎系膜細(xì)胞的共沉積，我們將人腎系膜胞按照不同的處理因素進(jìn)行分組，并作用 72 小時，隨后進(jìn)行系膜細(xì)胞免疫熒光重染色，并采用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察，結(jié)果顯示三組不同處理因

【參考文獻(xiàn)】

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2 盧宏柱;周建華;;HBV X Gene Transfection Upregulates IL-1β and IL-6 Gene Expression and Induces Rat Glomerular Mesangial Cell Proliferation[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2008年03期

本文編號：2731598