【摘要】：目的:探討重組人腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白(recombinant human tumor necrosis factor-alphareceptor II:Ig G Fc,rhTNFR:Fc)是否能夠減輕高糖作用下大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞(Rat glomerular endothelial cells,RGECs)壞死性凋亡的發(fā)生,進(jìn)而減輕細(xì)胞死亡、炎癥反應(yīng)及損傷,并探討其機(jī)制。方法:對(duì)RGECs進(jìn)行體外培養(yǎng),用凝血因子VIII鑒定為內(nèi)皮細(xì)胞后,將其根據(jù)不同干預(yù)條件隨機(jī)分為以下四組:正常組(5.5mmol/L葡萄糖)、甘露醇組(5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇)、高糖組(30mmol/L葡萄糖)和高糖+150ng/ml rhTNFR:Fc組(30mmol/L葡萄糖+150ng/ml rhTNFR:Fc)。采用免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光檢測(cè)各組TNF-α、RIP1、RIP3和IL-6的蛋白表達(dá)定量及定位;采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)各組TNF-α、RIP1、RIP3和IL-6的m RNA表達(dá)情況;采用蛋白印跡法(WB)檢測(cè)各組TNF-α、RIP1、RIP3和IL-6的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.培養(yǎng)的大鼠腎小球細(xì)胞胞漿內(nèi)可表達(dá)凝血因子VIII,鑒定為內(nèi)皮細(xì)胞。2.免疫細(xì)胞化學(xué):TNF-α、RIP1、RIP3和IL-6主要在RGECs的胞漿中表達(dá),高糖組的表達(dá)量明顯多于正常組和甘露醇組(P值均0.01),而高糖+150ng/ml rhTNFR:Fc組的表達(dá)較高糖組明顯減少(P0.01),而其余組之間上述指標(biāo)的表達(dá)無(wú)差異(P0.05)。3.免疫熒光:TNF-α、RIP1、RIP3和IL-6主要在RGECs的胞漿中表達(dá),高糖組的熒光明顯強(qiáng)于正常組和甘露醇組。而高糖+150ng/ml rhTNFR:Fc組的熒光明顯弱于高糖組,其余組之間無(wú)明顯亮度差異。4.RT-PCR:高糖組,TNF-α、RIP1、RIP3和IL-6的m RNA相對(duì)表達(dá)量明顯多于正常組及甘露醇組(P值均0.01),而高糖+150ng/ml rhTNFR:Fc組的表達(dá)較高糖組明顯減少(P0.01),其余組之間上述指標(biāo)的表達(dá)無(wú)差異(P0.05)。5.WB:高糖組,TNF-α、RIP1、RIP3和IL-6的蛋白表達(dá)量明顯多于正常組和甘露醇組(P值均0.01),而高糖+150ng/ml rhTNFR:Fc組的表達(dá)較高糖組明顯減少(P0.01),其余組之間上述指標(biāo)的表達(dá)無(wú)差異(P0.05)。結(jié)論:RGECs在高糖刺激下,發(fā)生壞死性凋亡明顯增多,進(jìn)而發(fā)生了較明顯的炎癥反應(yīng)和損傷,而使用了rhTNFR:Fc干預(yù)后,TNF-α、RIP1、RIP3和IL-6的m RNA和蛋白表達(dá)均下調(diào),說(shuō)明rhTNFR:Fc可能通過(guò)抑制TNF-α在RGECs的表達(dá),進(jìn)而部分阻斷壞死性凋亡途徑,減輕了RGECs的炎癥反應(yīng)和損傷。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9
【圖文】：

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 祝建Necroptosis 途徑可以被腫瘤壞死因子-α(TNF-α)激活。TNF-α與細(xì)胞膜上的腫瘤死因子受體 1(TNFR-l)結(jié)合，激活細(xì)胞質(zhì)里的受體相互作用蛋白 1(Receptorinteracprotein 1,RIP1)和受體相互作用蛋白 3(Receptorinteraction protein 3,RIP3)，RIP1和 R是受體相互作用蛋白(Receptorinteraction protein，RIP)的家族成員，兩者 N 末端和末端有 RIP同源結(jié)構(gòu)域(RIP homotypic interaction motif,RHIM)，可使兩者相互結(jié)合［RIP1 和 RIP3 分別在受體相互作用蛋白激酶 1(Receptorinteraction protein kinn1,RIPK1)和受體相互作用蛋白激酶 3(Receptorinteraction protein kinnase 3,RIPK3)的用下磷酸化［16-17］。RIP1 和 RIP3 磷酸化且相互結(jié)合后發(fā)生結(jié)構(gòu)改變形成 RIP1-R復(fù)合體，RIP1-RIP3 復(fù)合體招募并激活下游底物混合譜系激酶結(jié)構(gòu)域樣蛋白(Milineage kinase domain-like protein,MLKL)，MLKL 是壞死性凋亡通路中一個(gè)關(guān)鍵的游效應(yīng)器，在 RIP3 誘導(dǎo)下發(fā)生磷酸化，最終形成壞死性凋亡［18］。如圖 1 所示。

圖 2 大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞 RGECs（X100）定 RGECs：胞漿呈綠色，細(xì)胞核呈藍(lán)色(DAPI 染色)，將于細(xì)胞的胞漿中，即證實(shí)為 RGECs，如圖 3Factor VIII M圖 3 Factor VIII 免疫熒光鑒定（X200）RGECs 的活性

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號(hào)：2728625