【摘要】：環(huán)孢素A(CsA)是一種重要的免疫抑制藥物,因其具有良好免疫抑制作用,被廣泛應(yīng)用于臨床。CsA的治療效果受其主要副作用,即腎毒性作用的限制。CsA導(dǎo)致的急性或慢性腎毒性損傷,都會(huì)使腎功能減退以及組織病理學(xué)和超微結(jié)構(gòu)損傷改變。間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)移植可以預(yù)防或減輕毒性藥物引起的腎損傷,但MSCs對(duì)CsA導(dǎo)致的慢性腎毒性損傷的治療效果及作用機(jī)制尚不清楚。MSCs來源于不同的組織和器官,包括脂肪組織,骨髓,臍帶血,以及實(shí)體器官如肺臟,心臟等。MSCs是一種多能細(xì)胞,具有增殖和分化成成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的能力。它的修復(fù)、再生和免疫調(diào)節(jié)特性使它成為細(xì)胞治療和組織再生的良好候選。越來越多的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)證明了 MSCs治療各種疾病的安全性、可行性和有效性。MSC治療的主要缺點(diǎn)是其靶向歸巢能力及早期在炎癥、缺血缺氧等損傷的微環(huán)境下的存活能力,這些明顯降低了 MSCs的治療效果。應(yīng)用預(yù)處理或改良的MSCs是提高M(jìn)SCs遷移能力、歸巢能力和促進(jìn)組織修復(fù)能力的新策略。我們用促紅細(xì)胞生成素(EPO)預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),研究其對(duì)環(huán)孢素A(CsA)誘導(dǎo)的大鼠慢性腎毒性損傷的治療作用。以不同濃度的EPO(10、100、500、1000 IU/ml)預(yù)處理BMSCs,孵育24、48 h,我們用MTT實(shí)驗(yàn)檢測其增殖率,微絲微管染色觀察細(xì)胞骨架形態(tài),劃痕和遷移實(shí)驗(yàn)檢測其修復(fù)遷移能力,Western blot檢測CXCR4表達(dá),確定最佳預(yù)處理?xiàng)l件。為了研究EPO預(yù)處理的BMSCs療效,我們通過CsA誘導(dǎo)建立了體外HK2毒性損傷的模型和體內(nèi)大鼠慢性腎毒性損傷纖維化模型。我們發(fā)現(xiàn),500 IU/ml濃度的EPO加入BMSCs的培養(yǎng)液中,共培養(yǎng)48 h,能誘導(dǎo)其增殖率顯著升高,細(xì)胞骨架沿細(xì)胞長軸呈平行狀重新排列,在劃痕試驗(yàn)中能明顯修復(fù)劃痕距離,遷移實(shí)驗(yàn)中透過濾過膜明顯向下室受損的HK2細(xì)胞遷移。在CsA誘導(dǎo)建立的體外HK2毒性損傷的模型中,顯著降低HK2細(xì)胞的凋亡率。通過Western blot和RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),在EPO-BMSCs治療組中,顯著降低IL-1β或TGF-β1表達(dá),促進(jìn)HO-1、VEGF和E-cadherin的表達(dá),顯著增加抗凋亡因子Bcl-2的水平,而凋亡因子caspase-3的水平明顯降低。在建立的CsA誘導(dǎo)的大鼠慢性腎毒性損傷的動(dòng)物模型中,EPO-BMSCs對(duì)腎功能的改善能力明顯高于BMSCs。在腎臟病理表現(xiàn)上,EPO-BMSCs的治療作用也明顯好于BMSCs,EPO-BMSCs能明顯減少腎臟間質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤、腎小管腫脹、壞死以及腎間質(zhì)纖維化病理改變。我們證實(shí),在BMSCs輸注前用500 IU/ml EPO進(jìn)行預(yù)處理48h,顯著提高了 BMSCs的歸巢能力和治療修復(fù)能力;能顯著抑制HK2細(xì)胞在CsA毒性損傷中的凋亡;并且一次性的EPO-BMSCs的輸注治療顯著改善了 CsA誘導(dǎo)的慢性毒性腎損傷大鼠的腎功能,促進(jìn)了大鼠慢性毒性纖維化的損傷修復(fù)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R692
【圖文】：

丨邋Ｕｌｉｌｋ逡逑ＥＰＯ（ＩＵ／ｍｌ）逡逑圖１－１．邋ＥＰＯ預(yù)處理ＢＭＳＣｓ的增殖率．逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１．Ｔｈｅ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋ｒａｔｅ邋ｏｆ邋ＢＭＳＣｓ邋ｉｎｃｕｂａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＥＰＯ．逡逑Ａｆｔｅｒ邋２４ｈ邋ａｎｄ邋４８ｈ邋ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ邋ｗｉｔｈ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＥＰＯ邋（１０，邋１００，邋５００，邋ａｎｄ邋１０００邋ＩＵ／ｍｌ逡逑ｆｏｒ邋ｅａｃｈ邋ｓｕｂｇｒｏｕｐ，邋ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ），邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋ｒａｔｅ邋ｏｆ邋ＭＳＣｓ邋ｗａｓ邋ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．邋Ｔｈｅｓｅ邋ｒｅｓｕｌｔｓ逡逑ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ邋ｔｈａｔ邋ｔｈｅ邋ｏｐｔｉｍａｌ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｔｉｍｅ邋ｏｆ邋ＥＰＯ邋ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ邋ｗｉｔｈ邋ｔｈｅ邋ＭＳＣｓ邋ｗｅｒｅ邋５００逡逑ＩＵ／ｍｌ邋ａｎｄ邋４８邋ｈ．邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ邋ｗｅｒｅ邋ｒｅｐｅａｔｅｄ邋ｔｈｒｅｅ邋ｔｉｍｅｓ邋（ｎ邋＝邋３），邋＊Ｐ＜０．０５邋ｖｅｒｓｕｓ邋ｕｎｔｒｅａｔｅｄ逡逑ＢＭＳＣｓ，邋ａＰ＜０．０５邋ｖｅｒｓｕｓ邋ｌＯＯＩＵ／ｍｌ邋ＥＰＯ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑２．２邋ＥＰＯ增加ＢＭＳＣｓ的劃痕修復(fù)能力逡逑通過對(duì)劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果的量化分析，來檢測不同濃度預(yù)處理下ＢＭＳＣｓ的劃逡逑痕修復(fù)能力。在劃痕２４小時(shí)后拍攝的圖片可以看出，在１００ＩＵ／ｍｌ和５００邋ＩＵ／ｍｌ逡逑ＥＰＯ預(yù)處理組，劃痕的距離明顯被修復(fù)。與未予以ＥＰＯ預(yù)處理的對(duì)照組相比，逡逑ＥＰＯ處理組

丨邋Ｕｌｉｌｋ逡逑ＥＰＯ（ＩＵ／ｍｌ）逡逑圖１－１．邋ＥＰＯ預(yù)處理ＢＭＳＣｓ的增殖率．逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１．Ｔｈｅ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋ｒａｔｅ邋ｏｆ邋ＢＭＳＣｓ邋ｉｎｃｕｂａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＥＰＯ．逡逑Ａｆｔｅｒ邋２４ｈ邋ａｎｄ邋４８ｈ邋ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ邋ｗｉｔｈ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＥＰＯ邋（１０，邋１００，邋５００，邋ａｎｄ邋１０００邋ＩＵ／ｍｌ逡逑ｆｏｒ邋ｅａｃｈ邋ｓｕｂｇｒｏｕｐ，邋ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ），邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋ｒａｔｅ邋ｏｆ邋ＭＳＣｓ邋ｗａｓ邋ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．邋Ｔｈｅｓｅ邋ｒｅｓｕｌｔｓ逡逑ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ邋ｔｈａｔ邋ｔｈｅ邋ｏｐｔｉｍａｌ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｔｉｍｅ邋ｏｆ邋ＥＰＯ邋ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ邋ｗｉｔｈ邋ｔｈｅ邋ＭＳＣｓ邋ｗｅｒｅ邋５００逡逑ＩＵ／ｍｌ邋ａｎｄ邋４８邋ｈ．邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ邋ｗｅｒｅ邋ｒｅｐｅａｔｅｄ邋ｔｈｒｅｅ邋ｔｉｍｅｓ邋（ｎ邋＝邋３），邋＊Ｐ＜０．０５邋ｖｅｒｓｕｓ邋ｕｎｔｒｅａｔｅｄ逡逑ＢＭＳＣｓ，邋ａＰ＜０．０５邋ｖｅｒｓｕｓ邋ｌＯＯＩＵ／ｍｌ邋ＥＰＯ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑２．２邋ＥＰＯ增加ＢＭＳＣｓ的劃痕修復(fù)能力逡逑通過對(duì)劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果的量化分析，來檢測不同濃度預(yù)處理下ＢＭＳＣｓ的劃逡逑痕修復(fù)能力。在劃痕２４小時(shí)后拍攝的圖片可以看出，在１００ＩＵ／ｍｌ和５００邋ＩＵ／ｍｌ逡逑ＥＰＯ預(yù)處理組，劃痕的距離明顯被修復(fù)。與未予以ＥＰＯ預(yù)處理的對(duì)照組相比，逡逑ＥＰＯ處理組

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 徐璐;廖德懷;陳正;馬俊杰;李光輝;方佳麗;杜楊春;畢文浩;潘光輝;;腎移植中經(jīng)移植腎動(dòng)脈輸注骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞3例報(bào)告[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年53期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 王宜青;SDF-1/CXCR4軸以及MCP-1/CCR2軸對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移及歸巢的影響[D];蘇州大學(xué);2014年

2 陳正;BM-MSC誘導(dǎo)移植免疫耐受和修復(fù)慢性移植腎損傷的初步研究[D];中南大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2726596