【摘要】：目的:探討翻譯控制腫瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)在高糖環(huán)境下足細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)效應(yīng)中的作用及信號(hào)通路。方法:細(xì)胞實(shí)驗(yàn):分為四組,分別為正常對(duì)照組(LG,5.6mmol/l葡萄糖)、LG+TCTP(-/-)、高糖組(HG,40mmol/l 葡萄糖)、HG+TCTP(-/-),然后用免疫印跡法分別測(cè)量各組 nephrin、α-SMA、ZO-1、PI3K、p-AKT、p-mTOR、TSC2、TCTP 蛋白的表達(dá),PCR檢測(cè)TCTPmRNA的表達(dá),免疫熒光法檢測(cè)ZO-1、α-SMA蛋白的表達(dá)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn):雄性DBA/2J小鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)40 mg/kg建立糖尿病模型。將小鼠分為四組,分別為正常對(duì)照組、正常對(duì)照組+TCTP(-/-)轉(zhuǎn)染組、糖尿病組、糖尿病+ TCTP(-/-)轉(zhuǎn)染組,6周后收集尿液標(biāo)本及腎臟組織,應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法觀察各組TCTP蛋白的表達(dá),應(yīng)用免疫熒光染色觀察Synaptopodin和TCTP蛋白的表達(dá),應(yīng)用電鏡標(biāo)本觀察足細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果:1.高糖刺激的足細(xì)胞中TCTPmRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá):與LG相比,HG組足細(xì)胞中TCTP mRNA表達(dá)明顯增高(P0.05),TCTP mRNA的表達(dá)在6小時(shí)呈高峰。與LG相比,HG組足細(xì)胞中TCTP蛋白表達(dá)明顯增高(P0.05),TCTP蛋白表達(dá)在24小時(shí)呈高峰。2.TCTP蛋白表達(dá)與足細(xì)胞裂孔隔膜(slit diaphragm,SD)蛋白之間的關(guān)系:與LG組相比,HG組足細(xì)胞nephrin、Z0-1等SD蛋白表達(dá)明顯減少(P0.05)。與HG組相比,HG+TCTP(-/-)組足細(xì)胞nephrin、Z0-1等SD蛋白表達(dá)增加(P0.05)。3.TCTP蛋白對(duì)足細(xì)胞EMT的影響:與LG組相比,HG組足細(xì)胞Z0-1蛋白表達(dá)明顯減少、α-SMA蛋白表達(dá)明顯增加(P0.05)。與HG組相比,HG+TCTP(-/-)組足細(xì)胞Z0-1蛋白表達(dá)增加,α-SMA蛋白表達(dá)減少(P0.05)。4.TCTP對(duì)EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響:與LG組相比,HG組p-mTOR、PI3K、p-Akt蛋白表達(dá)明顯增加,TSC2蛋白表達(dá)明顯減少(P0.05)。與HG組相比,HG+TCTP(-/-)組p-mTOR、PI3K、p-Akt蛋白表達(dá)減少,TSC2蛋白表達(dá)增加(P0.05)。5.小鼠腎小球TCTP蛋白表達(dá)情況:與正常對(duì)照組相比,DM組TCTP蛋白在糖尿病腎病中足細(xì)胞中表達(dá)增加。6.腎小球足細(xì)胞形態(tài)變化:正常對(duì)照組足細(xì)胞足突完整,而DM組可見足突廣泛融合,部分足細(xì)胞脫落,基底膜裸露,DM+TCTP(-/-)轉(zhuǎn)染組可見僅有部分足突融合,其形態(tài)學(xué)變化較糖尿病組輕微。結(jié)論:1.高糖條件下足細(xì)胞中TCTP表達(dá)增加;2.抑制TCTP蛋白表達(dá)可改善高糖所介導(dǎo)的足細(xì)胞SD蛋白損傷;3.抑制TCTP蛋白表達(dá)可改善高糖所介導(dǎo)的足細(xì)胞EMT過程;4.TCTP通過PI3K-AKT-mToR信號(hào)通路介導(dǎo)足細(xì)胞EMT過程。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9
【圖文】：

３．邋１．邋１高糖刺激的足細(xì)胞中ＴＣＴＰ邋ｍＲＮＡ及蛋白質(zhì)的表達(dá)逡逑與ＬＧ相比，ＨＧ組足細(xì)胞中ＴＣＴＰ邋ｍＲＮＡ表達(dá)明顯增高，戶＜邋０．邋０５，有逡逑統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，ＴＣＴＰ邋ｍＲＮＡ的表達(dá)在６小時(shí)呈高峰（見下圖１邋）。與ＬＧ相比，逡逑ＨＧ組足細(xì)胞中ＴＣＴＰ蛋白表達(dá)明顯增高，尸＜０．０５，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，ＴＣＴＰ逡逑蛋白表達(dá)在２４小時(shí)呈尚峰。（見下圖２）逡逑２．５「邐l:逡逑２邋－邐＋邐Ｔ逡逑＜邋ｊ邐幽邐＊逡逑１４邋ｉｌ邐ｉｌ邐＂ｉｒ邐－逡逑２ｈ邐６ｈ邐２４ｈ逡逑Ｈｏｕｒｓ逡逑圖１邋ＴＣＴＰ邋ｍＲＮＡ在高糖刺激下足細(xì)胞中的時(shí)間依賴性表達(dá)逡逑注：＊ｐ〈０．邋０５邋ｖｓ邋ＬＧ逡逑ｔｃｔｐ逡逑S茫蘗腦隋澹擼幔悖簦椋鑠義希蹋清危齲清澹齲清澹齲清澹齲清澹齲清澹齲清義希歟希恚椋鑠澹歟希恚椋鑠澹常埃恚椋鑠澹插澹楨澹跺澹楨澹玻村澹楨澹矗稿澹楨義賢跡插澹裕茫裕械鞍自詬嚀譴碳は倫閬赴械氖奔湟覽敵員澩镥義希常保插澹裕茫裕械鞍妝澩鎘胱閬赴芽贅裟ぃǎ螅歟椋翦澹洌椋幔穡瑁潁幔紓�，邋涯）辶x系鞍字淶墓叵靛義嫌耄蹋親橄啾齲齲親樽閬赴睿澹穡瑁潁椋�、Ｚ０－ｄ^齲櫻牡鞍妝澩錈饗約跎伲義希穡跡埃澹埃擔(dān)型臣蒲Р鉅�。与｝x親橄啾齲齲清澹澹裕茫裕校ǎ┳樽閬赴睿澹穡瑁潁椋睢㈠義希冢埃鋇齲櫻牡鞍妝澩鐫黽櫻穡跡埃澹埃擔(dān)型臣蒲Р鉅�。（见蠋n跡常ｅ義希保沖義

本文編號(hào)：2723198