【摘要】：我國(guó)癌癥中心的數(shù)據(jù)顯示,自2008年起,前列腺癌已成為發(fā)病率最高的泌尿系統(tǒng)腫瘤,可見(jiàn)其防治形勢(shì)非常嚴(yán)峻。目前的治療措施有手術(shù)摘除、放療、內(nèi)分泌療法、免疫療法等,但仍亟需對(duì)其發(fā)生、發(fā)展機(jī)制深入研究以開(kāi)拓新的治療措施。G蛋白偶聯(lián)受體(G protein coupled receptor,GPCR)是最大也是研究得最多的細(xì)胞膜受體家族,根據(jù)序列同源性及功能相似性分成6個(gè)家族。在經(jīng)典的GPCR信號(hào)通路中,配體激活的GPCR通過(guò)與細(xì)胞內(nèi)的G蛋白相互作用發(fā)揮功能。此外,GPCR也可通過(guò)配體依賴(lài)及非依賴(lài)途徑轉(zhuǎn)激活酪氨酸激酶受體(receptor tyrosine kinase,RTK),如表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)等,調(diào)節(jié)細(xì)胞應(yīng)答。β-arrestin是一類(lèi)與GPCR信號(hào)脫敏有關(guān)的蛋白,也可作為支架蛋白介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。γ-氨基丁酸受體(GABA_BR)是抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸(GABA)受體的一種,屬于GPCR C家族,不僅參與神經(jīng)系統(tǒng)的功能,在腫瘤中也有表達(dá)。研究表明,GABA_BR可促進(jìn)或抑制腫瘤的增殖、遷移、侵襲等,但具體機(jī)制不明。實(shí)驗(yàn)室曾報(bào)道,在人前列腺癌PC-3細(xì)胞中,GABA_BR激動(dòng)劑baclofen通過(guò)配體依賴(lài)途徑轉(zhuǎn)激活EGFR及其下游ERK1/2信號(hào)通路,并促進(jìn)細(xì)胞遷移。本論文以此為基礎(chǔ),探究PC-3細(xì)胞中GABA_BR正向變構(gòu)劑(PAM)rac-BHFF是否可以轉(zhuǎn)激活EGFR及其下游PI3K/Akt信號(hào)通路,并對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行初步探討。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),rac-BHFF可瞬時(shí)誘導(dǎo)Akt的磷酸化,并呈劑量依賴(lài)性。免疫沉降(IP)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明rac-BHFF可誘導(dǎo)EGFR轉(zhuǎn)激活;激光共聚焦實(shí)驗(yàn)顯示,與EGF相似,rac-BHFF可誘導(dǎo)EGFR內(nèi)化。EGFR的小分子抑制劑Tarceva及Iressa可以下調(diào)rac-BHFF誘導(dǎo)的Akt激活,說(shuō)明rac-BHFF引起的Akt激活依賴(lài)于EGFR轉(zhuǎn)激活。為探討其分子機(jī)制,用Gαi/o抑制劑百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)及MMPs抑制劑GM6001處理PC-3細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)二者均不能抑制rac-BHFF引起的Akt激活,提示rac-BHFF誘導(dǎo)的Akt激活不依賴(lài)于Gαi/o及MMPs介導(dǎo)的釋放活性配體途徑。研究表明,β-arrestin1在GPCR誘導(dǎo)的EGFR轉(zhuǎn)激活中具重要作用。為明確β-arrestin1是否介導(dǎo)rac-BHFF誘導(dǎo)的EGFR轉(zhuǎn)激活,建立β-arrestin1敲低的穩(wěn)定細(xì)胞系,發(fā)現(xiàn)敲低β-arrestin1顯著下調(diào)rac-BHFF誘導(dǎo)的EGFR及Akt的磷酸化水平,說(shuō)明GABA_BR誘導(dǎo)的EGFR轉(zhuǎn)激活及其下游Akt的活化依賴(lài)于β-arrestin1。用rac-BHFF長(zhǎng)時(shí)間處理PC-3細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)敲低β-arrestin1抑制rac-BHFF對(duì)克隆形成的促進(jìn)作用,并促進(jìn)低氧條件下rac-BHFF引起的細(xì)胞自噬,提示β-arrestin1在rac-BHFF誘導(dǎo)的細(xì)胞應(yīng)答中具有重要作用�？傊�,本文首次發(fā)現(xiàn),GABA_BR的正向變構(gòu)劑rac-BHFF可通過(guò)β-arrestin1轉(zhuǎn)激活EGFR及其下游的Akt信號(hào)通路;rac-BHFF誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖依賴(lài)于β-arrestin1;β-arrestin1可抑制低氧條件下rac-BHFF對(duì)細(xì)胞自噬的促進(jìn)作用。這些結(jié)果表明,β-arrestin1在GABA_BR誘導(dǎo)的EGFR轉(zhuǎn)激活、細(xì)胞增殖及自噬中起著關(guān)鍵作用。該工作為闡明前列腺癌的發(fā)生機(jī)制提供了新的理論基礎(chǔ),為前列腺癌的治療提供了新靶標(biāo)及新思路。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25
【圖文】：

圖 1.1 2012 年男性前列腺癌的預(yù)測(cè)世標(biāo)率。注：年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率是各年齡段發(fā)病率乘以該年齡段人員占比之和，即去除年齡影響因素之后的發(fā)病率。世標(biāo)率是按世界標(biāo)準(zhǔn)人員構(gòu)成計(jì)算得出的年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率[3]。（3）地理因素 前列腺癌在北美洲、歐洲西北部、澳大利亞和加勒比海群島最為常見(jiàn)，而在亞洲、非洲、及南美洲不太常見(jiàn)。（4）基因及家族因素 前列腺癌是最易遺傳的人類(lèi)惡性腫瘤之一，7-12%的轉(zhuǎn)移性

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文亡等有益效應(yīng)[123]。慢性 β1-AR 激活引起心臟損傷，而 β-arrestin 介導(dǎo)的 β1-AR 轉(zhuǎn)激活 EGFR 對(duì)心臟有保護(hù)作用。因此，開(kāi)發(fā)可以選擇性激活 G 蛋白通路或 β-arrestin 通路的偏向性配體就可以選擇性的促進(jìn)或阻遏GPCR活化誘導(dǎo)的有益效應(yīng)或有害效應(yīng)，這也為靶向 GPCR 藥物的研發(fā)提供了一個(gè)新的思路。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 付尚志;李學(xué)成;;放療在前列腺癌治療中的應(yīng)用[J];臨床軍醫(yī)雜志;2013年09期

2 吳英德;;前列腺癌的預(yù)防研究[J];中國(guó)癌癥防治雜志;2009年02期

本文編號(hào)：2717829