發(fā)布時(shí)間：2020-06-17 13:52

【摘要】：目的:探尋自噬在可溶性尿酸(uric acid,UA)誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞(HK-2細(xì)胞)炎癥反應(yīng)中的作用。方法:可溶性尿酸溶液刺激HK-2細(xì)胞,用透射電鏡觀察自噬體,western blotting檢測(cè)單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、自噬微管相關(guān)的輕鏈蛋白3(LC3-II)和自噬相關(guān)調(diào)控基因蛋白Beclin1的表達(dá)。分別將雷帕霉素(rapamycin,RAP)和氯喹(chloroquine,CQ)與12 mg/dL可溶性尿酸共刺激細(xì)胞12h,透射電鏡觀察各組細(xì)胞的自噬體,western blotting分別檢測(cè)MCP-1、LC3-II和Beclin1的表達(dá)水平。用10μmol/L的Akt抑制劑Perifosine預(yù)處理細(xì)胞1h后再與12 mg/dl可溶性尿酸共同孵育細(xì)胞12h,電鏡下觀察自噬體,western blotting檢測(cè)p-Akt和MCP-1的表達(dá)。結(jié)果:可溶性尿酸誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞MCP-1、LC3-II和Beclin1表達(dá)上調(diào),透射電鏡觀察到自噬體數(shù)量增加。雷帕霉素與可溶性尿酸共刺激HK-2細(xì)胞后,較之單用可溶性尿酸,自噬進(jìn)一步增強(qiáng)而MCP-1表達(dá)減弱,氯喹則抑制可溶性尿酸的上調(diào)自噬作用而MCP-1表達(dá)增加。Akt阻斷劑Perifosine和尿酸共刺激細(xì)胞后MCP-1表達(dá)減弱。結(jié)論:可溶性尿酸可誘發(fā)腎小管上皮細(xì)胞炎癥,促進(jìn)HK-2細(xì)胞的自噬。自噬參與調(diào)控可溶性尿酸誘導(dǎo)的腎小管炎癥反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R692
【圖文】：

自噬在可溶性尿酸誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用 2015 級(jí)碩士學(xué)位結(jié) 果1 可溶性尿酸刺激腎小管上皮細(xì)胞產(chǎn)生 MCP-1。1.1 加入不同濃度的尿酸刺激 HK-2 細(xì)胞 24 小時(shí)后 WB 檢測(cè) MCP-I 蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示，可溶性尿酸刺激 HK-2 細(xì)胞 MCP-1 表達(dá)呈劑量依賴(lài)性，尿酸濃度為 12 mg/dL 時(shí)提高最顯著(P＜0.05 )，見(jiàn)圖 1A。1.2 用尿酸（12 mg/dL）分別作用細(xì)胞 0h、6h、12h、24h 和 48h 后 W測(cè) MCP-1，結(jié)果顯示：可溶性尿酸誘導(dǎo) HK-2 細(xì)胞 MCP-1 表達(dá)呈時(shí)間依性,在 24 小時(shí)表達(dá)最高 ( P＜0.05 )，見(jiàn)圖 1B。

注： A: control group; B: uric acid group. scale bar: 500 nm圖 2 透射電鏡觀察 HK-2 細(xì)胞的自噬體Figure 2. Quantitative change of autophagic vacuoles in HK-2 cell.3 可溶性尿酸刺激 HK-2 細(xì)胞表達(dá)自噬相關(guān)蛋白。3.1 不同濃度的尿酸刺激 HK-2 細(xì)胞 LC3-II,Beclin1 的表達(dá) WB 結(jié)果表明，對(duì)照組（未刺激組）LC3-II 、Beclin1 表達(dá)水平較低，隨著刺激濃度增加，LC3-II,Beclin1 的表達(dá)逐漸提高，在尿酸濃度 12 mg/dL 表達(dá)最高(P＜0.05 )，見(jiàn)圖 3A 。3.2 可溶性尿酸刺激 HK-2 細(xì)胞后不同時(shí)間點(diǎn) LC3-II,Beclin1 的表達(dá)WB 結(jié)果表明對(duì)照組（0h）表達(dá)水平較低，尿酸刺激 6 小時(shí)后LC3-II,Beclin1 表達(dá)增加，12 小時(shí) LC3-II,Beclin1 表達(dá)最高，24 小時(shí)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 肖慧捷;李倩;;高尿酸血癥與腎臟疾病[J];中華實(shí)用兒科臨床雜志;2014年17期

2 張曉敏;劉宏;劉必成;;高尿酸血癥與慢性腎臟病發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究進(jìn)展[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年01期

3 李雨t

本文編號(hào)：2717699