【摘要】：目的:腎癌的發(fā)病率和死亡率逐年升高,傳統(tǒng)手術(shù)術(shù)后復(fù)發(fā)率也很高,因此本實驗的實驗?zāi)康氖菫榱祟A(yù)測腎癌的抗腫瘤藥物新靶點,尋找高效的抗腎癌藥物。方法:從手術(shù)切除中獲得5對腎癌組織和癌旁的腎組織,并使用QExactive Plus與nanoLC系統(tǒng)以無標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法進行分析,篩選出差異性表達的蛋白。通過qRT-PCR、Western blotting和IHC方法在小樣本水平上驗證差異性表達蛋白,如PYGL,ANXA4,PSMB8,ATP5B。在大樣本水平上進一步檢測,包括用新技術(shù)高通量免疫印跡方法(QDB)檢測五十個腎癌病人的腎癌組織及其癌旁腎組織中ANXA4,PYGL,PSMB8和ATP5B的絕對定量。體內(nèi)驗證,用腎細(xì)胞癌細(xì)胞(786-0)轉(zhuǎn)染siPYGL,轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞用xCELLigence實時細(xì)胞分析儀(RTCA)-DP系統(tǒng)檢測細(xì)胞增殖和遷移功能。結(jié)果:通過質(zhì)譜方法共檢測到2091種蛋白,其中532種蛋白表達在腎癌組織及其癌旁腎組織中具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。在50對組織中,腎癌組織的PYGL絕對定量的中位值顯著高于癌旁腎組織(1.21 nml/g比0.16 nmol/g,P0.0001,配對 t檢驗)。PYGL 的 ROC分析顯示 AUC為 0.93(P0.001;95%CI 0.87-0.99)。當(dāng)PYGL臨界值為0.35nmol/g時,PYGL的敏感性為92%,特異性為92%,總體準(zhǔn)確性為96%。而ANXA4、PSMB8和ATP5B的總體準(zhǔn)確率分別為92%、82%、70%。細(xì)胞實驗顯示,敲除PYGL之后,細(xì)胞的增殖和遷移功能均有所降低。結(jié)論:我們通過定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法檢測了腎癌組織及其癌旁腎組織中差異性表達蛋白,并對其中多種蛋白進行了分子生物學(xué)實驗檢測,并在群體水平上進行了驗證。篩選出了差異性明顯并且表達穩(wěn)定的蛋白-PYGL。進一步分析得到PYGL有可能成為腎癌的抗腫瘤藥物新靶點。
【圖文】：

圖２－１：實驗路線逡逑１３逡逑

邐ｐｓｍｂｓ逡逑圖２－２：在小范圍樣本量中檢測ＰＹＧＬ、ＡＮＸＡ４、ＰＳＭＢ８和ＡＴＰ５Ｂ的相對表達水平逡逑圖２－２．以上圖片是用分子生物學(xué)實驗在小樣本上驗證差異性表達蛋白。（Ａ）該圖為逡逑ｑＲＴ－ＰＣＲ邋實驗檢測邋ＰＹＧＬ、ＡＮＸＡ４、ＰＳＭＢ８邋和邋ＡＴＰ５Ｂ邋結(jié)果圖（ｎ＝５），ＡＴＰ５Ｂ，ＰＹＧＬ，逡逑２２逡逑
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.11

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本文編號：2710094