【摘要】：第一部分AOE調(diào)節(jié)micro RNA在糖尿病小鼠肝臟中的表達譜目的miRNA參與肥胖和2型糖尿病的病理生理過程。有研究表明,益智仁有抗氧化活性和抗糖尿病活性。本研究旨在建立經(jīng)AOE處理后的db-/db-小鼠糖尿病腎病的miRNA差異表達譜。方法db-/db-小鼠是將24只小鼠分為三組,其中8只DB/DB小鼠和16只db-/db-小鼠,DB/DB小鼠組和db-/db-H_20小鼠組給予安慰劑(生理鹽水)db-/db-AOE組每天一次通過胃內(nèi)途徑給藥500mg/kg AOE,持續(xù)8周。將安樂死的小鼠解剖并從肝中提取miRNA,使用標準方法進行測序,用聚類分方法來預(yù)測目標基因,并通過q RT-PCR確認,再用KEGG對靶miRNA進行分類。結(jié)果測序表明,在與db-/db-H_20組小鼠相比,在DB/DB組小鼠的肝臟中,有19個miRNA表達有差異,其中8個下調(diào),11個上調(diào);在db-/db-AOE組小鼠肝臟中有7個miRNA表達有差異調(diào)節(jié),其中5個下調(diào),2個上調(diào),分別在兩組中鑒定出mmu-mi R-423-5p和mmu-mi R-598-3p。在db-/db-AOE組小鼠肝臟組織中mmu-mi R-598-3p和mmu-mi R-423-5p的表達量的均高于未經(jīng)AOE處理的DB/DB組與db-/db-H_20組。結(jié)論相比較于db-/db-H_20組小鼠,我們確定了DB/DB組中存在19種miRNA有表達差異,在db-/db-AOE組中有7種miRNA存在表達差異。本研究中發(fā)現(xiàn)的大多數(shù)miRNA先前都與肥胖或糖尿病有關(guān),并確認了2種miRNA(mi R-598和mi R-423)的表達在db-/db-H_20小鼠中受到抑制,但通過AOE處理其表達可能恢復(fù)。這兩種miRNA可能參與重要的信號傳導(dǎo)途徑,其中包括MAPK和Ras信號通路。第二部分AOE下調(diào)PTEN表達的抗糖尿病作用機制目的糖尿病以高血糖水平為特征�；钚匝�(ROS)水平升高可能破壞胰島素信號并導(dǎo)致胰島素抵抗。益智仁提取物(AOE)具有強大的抗氧化活性,因此可以抑制胰島素抵抗。本研究的目的是探討AOE對2型糖尿病動物模型db-/db-小鼠的血糖、胰島素和脂質(zhì)水平的影響,通過測量小鼠體重和血糖濃度的變化來測100,300和500mg/kg的AOEs對db-/db-小鼠的作用,測定500mg/kg AOE對葡萄糖耐量,血漿胰島素濃度,血漿脂質(zhì)譜,肝臟脂質(zhì)譜和尿蛋白影響。方法AOE以不同劑量(100,300和500mg/kg)給予這些小鼠8周,用2,2-二苯基-1-苦基肼基(DPPH)測定AOE的自由基清除活性,測定經(jīng)不同濃度AOE處理的小鼠體重和血漿葡萄糖濃度變化。用AOE 500mg/kg處理小鼠8周,測定其OGTT、血漿胰島素水平、血漿血脂水平及腎功能。8周后處死小鼠,解剖取出腎臟、肝臟組織,用Western Blotting檢測腎臟組織、肝臟組織中PTEN的蛋白表達水平。結(jié)果10g/L的AOE表現(xiàn)出最佳的抗氧化能力來清除DPPH自由基。DB/DB和db-/db-小鼠以及經(jīng)不同濃度AOE處理8周,體重的變化在任何組間均無顯著差異。與db-/db-H_20組相比,經(jīng)不同濃度AOE處理組的血漿葡萄糖水平顯著降低,最高劑量的AOE 500mg/kg對于降低血糖水平是最有效的。葡萄糖刺激顯著增加了db-/db-H_20組小鼠的血糖濃度,而AOE500小鼠在葡萄糖負荷后30,60和90分鐘顯示出顯著抑制的血糖濃度。AOE對血漿胰島素濃度的影響為db-/dbH_20組的血漿胰島素濃度顯著高于DB/DB組和db-/db-AOE組。db-/db-組甘油三酯和膽固醇的血漿濃度分別比db-/db-小鼠中的水平低15.0%和10%(P0.05)。與DB/DB小鼠相比,db-/db-H_20組小鼠的尿白蛋白(P0.05),肌酐(P0.05)和BUN(P0.05)均顯著增加。在db-/db-AOE組,小鼠24小時尿白蛋白排泄量為0.62±0.17mg,顯著低于db-/db-H_20組(1.27±0.31mg,P0.05),但仍高于DB/DB組(0.32±0.04 mg,P0.05)。AOE處理后肌酐和BUN的濃度也顯著降低(P0.05)。在db-/db-H_20組小鼠的肝臟和腎臟組織中PTEN蛋白表達均增強,但在db-/db-小鼠中AOE500處理后,PTEN蛋白表達顯著降低(P0.05)。結(jié)論AOE通過降低血糖濃度和氧化應(yīng)激,增加血漿胰島素水平,改善腎功能,并減少T2DM小鼠PTEN表達,最終改善高血糖和高脂血癥。因此,AOE可能作為一種新型藥物或功能性膳食補充劑用于預(yù)防糖尿病。
【圖文】：

圖 2.2 用聚類分析的方法分析 DB/DB 組和 db-/db- H20 組小鼠的肝臟組織中 miRNA 的表達的分層聚類分析。由于在未經(jīng) AOE 處理的 DB/DB 小鼠，db-/db- H20 小鼠和經(jīng) AOE 處理的 db-/dbAOE500 小鼠這三個組中存在 24 個 miRNA 表達有差異，所以肝組織被聚類了。這些分析的樣品以隊列的行程排列。左側(cè)是 miRNA 聚類樹，頂部是樣本聚類樹。頂部的色標表示 miRNA 的相對表達水平，紅色表示表達水平相對較高，藍色表示表達水平相對較低。

圖 2.2 用聚類分析的方法分析 DB/DB 組和 db-/db- H20 組小鼠的肝臟組織中 miRNA 的表達的分層聚類分析。由于在未經(jīng) AOE 處理的 DB/DB 小鼠，db-/db- H20 小鼠和經(jīng) AOE 處理的 db-/dbAOE500 小鼠這三個組中存在 24 個 miRNA 表達有差異，所以肝組織被聚類了。這些分析的樣品以隊列的行程排列。左側(cè)是 miRNA 聚類樹，頂部是樣本聚類樹。頂部的色標表示 miRNA 的相對表達水平，紅色表示表達水平相對較高，，藍色表示表達水平相對較低。
【學(xué)位授予單位】：海南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R587.2;R692.9

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本文編號：2706742