發(fā)布時間：2020-06-10 14:19

【摘要】：【目的】膀胱癌是九大常見的惡性腫瘤之一,根據(jù)流行病學統(tǒng)計全世界每年有約386000新病例被診斷。近年來越來越多的證據(jù)表明microRNA在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起到關(guān)鍵調(diào)控作用。Hsa-miR-429是一種新發(fā)現(xiàn)的microRNA,作為一種潛在的生物標志物并參與多種癌癥的發(fā)展。然而,Hsa-miR-429在膀胱癌中的臨床意義和分子機制尚不清楚。本研究旨在探討Hsa-miR-429在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中的作用�！痉椒ā坎捎脤崟r熒光定量PCR技術(shù)在50例膀胱癌臨床樣本中檢測了hsa-miR-429和細胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子2B(CDKN2B)的表達水平。膀胱癌T24和5637細胞中敲低CDKN2B的表達水平通過轉(zhuǎn)染CDKN2B的siRNA或上調(diào)hsa-miR-429的表達水平通過轉(zhuǎn)染hsa-miR-429 mimic。采用實時熒光定量PCR和Western blot檢測轉(zhuǎn)染后CDKN2B表達水平。采用雙熒光素酶報告實驗檢測hsa-miR-429和CDKN2B的3’-UTR區(qū)域位點之間的相互結(jié)合。采用MTT和EdU實驗測定細胞增殖。采用ELISA法測定細胞凋亡�！窘Y(jié)果】我們發(fā)現(xiàn)hsa-miR-429表達水平與腫瘤的分級分期密切相關(guān),較高的hsa-miR-429表達水平對應較高的腫瘤分級和分期,且所有hsa-miR-429低表達的患者均存活超過5年,而hsa-miR-429高表達的患者五年生存率只有58%。Hsa-miR-429和CDKN2B在膀胱癌中的表達水平呈負相關(guān)。Hsa-miR-429 mimic在膀胱癌細胞T24和5637中能夠降低CDKN2B的mRNA和蛋白質(zhì)的表達水平。雙熒光素酶報告發(fā)現(xiàn)hsa-miR-429能夠與CDKN2B的3’-UTR區(qū)域結(jié)合。上調(diào)hsa-miR-429或下調(diào)CDKN2B均能夠促進細胞增殖,抑制細胞凋亡。【結(jié)論】我們的結(jié)果表明hsa-miR-429在膀胱癌中能夠通過抑制CDKN2B發(fā)揮致癌作用,這可能有助于進一步了解膀胱癌發(fā)生發(fā)展的分子機制。
【圖文】：

hsa-miR-429 高表達的膀胱癌患者預后差（五年生存率為 58%），-miR-429 和 CDKN2B在膀胱癌中的表達水平-429 在膀胱癌組織中的表達升高，而 CDKN2B 在膀胱癌組織中的表iR-429 及 CDKN2B 在膀胱癌組織表達水平呈負相關(guān)，具體結(jié)果如熒光 PCR 檢測 50 胱癌組織與配對癌旁正常組織中 hsa-miR-429

.3 CDKN2B siRNA 和 microRNA mimic 或過表達載體作用效率檢測。A. 分別DKN2B 干擾 RNA 及對照組堿基序列后，qPCR 檢測 CDKN2B 在膀胱癌 5637、T系中的表達水平，P<0.001，P=0.001；Western blot 檢測 CDKN2B 在膀胱7、T24 細胞系中的表達水平。B.分別轉(zhuǎn)染 hsa-miR-429 模擬物及對照組堿基，qPCR 檢測 hsa-miR-429 在膀胱癌 5637、T24 細胞系中的表達水平，P=0.0.002；Western blot 檢測 CDKN2B 在膀胱癌 5637、T24 細胞系中的表達水平實驗均獨立重復 3 次以上。 hsa-miR-429和CDKN2B 3’UTR相互結(jié)合究使用雙熒光素酶結(jié)合靶點實驗檢測hsa-miR-429和CDKN2B 3’UTR的相互結(jié)結(jié)果如下所示：-miR-429 mimic 及 CDKN2B-WT，CDKN2B-MUT 表達質(zhì)粒分別共轉(zhuǎn)染 T24 和 5637，，行雙熒光素酶活性檢測，如圖所示，轉(zhuǎn)染了 CDKN2B-WT 質(zhì)粒的 T24 和 563
【學位授予單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.14

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 黃亮;傅斌;;miRNA在膀胱癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的相關(guān)研究[J];江西醫(yī)藥;2015年06期

2 陳婧;孫奮勇;馬紀;;miRNA-195在膀胱癌細胞中功能的研究[J];檢驗醫(yī)學;2014年05期

本文編號：2706411