【摘要】：缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury,IRI)是腎移植術(shù)后導(dǎo)致移植腎延遲恢復(fù)(delay graft function,DGF)的主要原因,會(huì)對(duì)移植術(shù)后受者預(yù)后產(chǎn)生諸多不良影響,如何預(yù)防和緩解腎臟IRI對(duì)于提高移植物遠(yuǎn)期生存十分關(guān)鍵。近年來(lái)的研究表明:IRI過(guò)程中的炎性細(xì)胞及炎性因子的浸潤(rùn)是促進(jìn)IRI發(fā)生發(fā)展的一個(gè)重要因素,而以調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell,Treg)為代表的免疫抑制型細(xì)胞則可有效緩解IRI過(guò)程中的炎癥反應(yīng),增加腎臟中Treg細(xì)胞的浸潤(rùn)可減少IRI過(guò)程中的組織損傷、保護(hù)腎臟功能。神經(jīng)纖毛蛋白1(neuropilin 1,NRP1)對(duì)于Treg細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能的維持極為重要,研究證實(shí):NRP1可作為受體與信號(hào)素4A(semaphorin 4a,SEMA4A)結(jié)合,通過(guò)抑制Treg細(xì)胞內(nèi)Akt-mTOR信號(hào)通路來(lái)促進(jìn)Treg細(xì)胞穩(wěn)定性及功能性,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤組織中Treg細(xì)胞的浸潤(rùn)。但目前針對(duì)SEMA4A-NRP1軸在腎臟IRI條件下的作用尚不明了。因此,在本研究中,我們以重組嵌合蛋白SEMA4A-Fc作為干預(yù)措施,觀察SEMA4A-Fc對(duì)腎臟Treg細(xì)胞的浸潤(rùn)、腎臟IRI發(fā)生發(fā)展的影響,并對(duì)可能的分子生物學(xué)機(jī)制進(jìn)行探究。研究結(jié)果提示:在野生型小鼠中,IRI術(shù)前使用SEMA4A-Fc可降低小鼠IRI后血肌酐、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、減少組織損傷及腎臟細(xì)胞凋亡、減少TNF-α等炎癥因子浸潤(rùn)。同時(shí)流式細(xì)胞分析檢測(cè)結(jié)果顯示:SEMA4A-Fc處理后小鼠IRI腎臟中中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)減少,而Treg浸潤(rùn)顯著增加。而在使用抗CD25單抗進(jìn)行誘導(dǎo)清除Treg后,上述SEMA4A-Fc緩解腎臟IRI的作用被消除,證明SEMA4A-Fc對(duì)于IRI的緩解作用主要是通過(guò)Treg細(xì)胞來(lái)完成。在進(jìn)一步基于條件基因敲除小鼠—oxP3~(Cre)NRP1~(f/f)小鼠模型的實(shí)驗(yàn)中,結(jié)果提示:Treg細(xì)胞NRP1特異性敲除可逆轉(zhuǎn)SEMA4A-Fc對(duì)小鼠腎臟IRI的緩解作用,同時(shí)可消除SEMA4A-Fc對(duì)IRI腎臟Treg細(xì)胞浸潤(rùn)的促進(jìn)作用;說(shuō)明NRP1是SEMA4A促進(jìn)Treg細(xì)胞浸潤(rùn)、緩解腎臟IRI的關(guān)鍵分子。而在機(jī)制研究方面,體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:SEMA4A-Fc干預(yù)可促進(jìn)Treg細(xì)胞中NRP1對(duì)PTEN的募集,同時(shí)可降低pAkt(S473/T308)、pS6K1水平,而在NRP1~(f/f)FoxP3~(Cre)小鼠Treg細(xì)胞中無(wú)法觀察到上述變化;說(shuō)明SEMA4A結(jié)合NRP1可促進(jìn)NRP1募集PTEN,抑制Akt-mTOR信號(hào)通路的激活,進(jìn)而增加腎臟中Treg細(xì)胞的穩(wěn)定性及功能性。綜上,我們的研究揭示了如下觀點(diǎn):SEMA4A與NRP1結(jié)合可緩解腎臟IRI的發(fā)生及發(fā)展;SEMA4A可通過(guò)結(jié)合Treg細(xì)胞上的NRP1,抑制Akt-mTOR信號(hào)通路,促進(jìn)IRI腎臟中Treg細(xì)胞的浸潤(rùn)與功能,從而減少腎臟IRI過(guò)程中炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度,最終緩解IRI過(guò)程中腎臟的組織損傷。
【圖文】：

邐解放軍醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文邐逡逑二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑１．邋ＳＥＭＡ４Ａ－ＦＣ干預(yù)可保護(hù)小鼠缺血再灌注損傷腎臟功能逡逑行雙側(cè)腎臟ＩＲＩ之前２４ｈ及手術(shù)當(dāng)天對(duì)Ｃ５７ＢＬ／６小鼠使用重組人ＳＥＭＡ４Ａ－ＦＣ或逡逑ＩｇＧ邋（對(duì)照），于不同時(shí)間點(diǎn)（術(shù)前Ｄ０，，術(shù)后Ｄｌ，Ｄ３，Ｄ５）尾靜脈采血，分別檢測(cè)逡逑小鼠血肌酐及尿素氮（ｂｌｏｏｄ邋ｕｒｅａ邋ｎｉｔｒｏｇｅｎ，邋ＢＵＮ）水平。結(jié)果提示：在基線水平無(wú)差逡逑別的情況下，ＳＥＭＡ４Ａ－Ｆｃ／ＩＲＩ組小鼠血肌酐及尿素氮水平在術(shù)后Ｉｄ、３ｄ、５ｄ時(shí)間點(diǎn)逡逑均顯著高于邋ＩｇＧ／ＩＲＩ邋（ｐ＜０．０１、ｐ＜０．０１、ｐ＜０．０５）（如圖邋１、表邋１／２邋示）。逡逑該研究結(jié)果說(shuō)明：ＩＲＩ前使用ＳＥＭＡ４Ａ－ＦＣ可保護(hù)ＩＲＩ腎臟功能。逡逑

Ｓｈａｍ／ＩｇＧ邋０．２±０．４５；邋Ｓｈａｍ／ＳＥＭＡ４Ａ邋０．４±０．５５），ＩＲＩ／ＩｇＧ邋組小鼠腎小管損傷比例高、逡逑程度重，而邋ＳＥＭＡ４Ａ／ＩＲＩ邋組較邋ＩｇＧ／ＩＲＩ邋組損傷明顯減輕（２．４±０．５５邋ｖｓ．邋３．６±０．５５，邋ｐ＝０．０１４）逡逑（如圖２）。逡逑該研究結(jié)果說(shuō)明ＳＥＭＡ４Ａ－ＦＣ干預(yù)可有效緩解缺血再灌注損傷后腎小管損傷程度。逡逑ａ逡逑Ｓｈａｍ邐ＩＲＩ逡逑ＩｇＧ邋ＳＥＭＡ４Ａ－ＦＣ邋ＩｇＧ邐ＳＥＭＡ４Ａ－Ｆｃ逡逑２０逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R699.2

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本文編號(hào)：2702456