【摘要】：目的 探索不同濃度水飛薊素對大鼠腎臟缺血再灌注損傷(IRI)的保護(hù)作用及其是否與抑制NF-κB活化有關(guān)。方法 將40只成年的健康雄性SD大鼠進(jìn)行數(shù)字編號,根據(jù)隨機(jī)數(shù)字法規(guī)則,每10只設(shè)定為1個小組,共4組,分為模型組(IR組)、假手術(shù)組(S組)、高濃度水飛薊素組(H組)、低濃度水飛薊素組(L組)。L組、H組術(shù)前分別給予水飛薊素100 mg/(kg·d)、200 mg/(kg·d)灌胃7 d,給予各組大鼠的腹腔內(nèi)緩慢注射10%水合氯醛溶液(300 mg/kg)進(jìn)行麻醉術(shù),打開腹腔各層組織,分離雙側(cè)腎動靜脈,切除右側(cè)腎臟。S組直接關(guān)閉腹腔。IR、L及H組則用動脈夾阻斷左側(cè)腎血供40 min,移去動脈夾使腎臟恢復(fù)血供,持續(xù)時間為24 h。腎功能檢測:主要是對血清的尿素氮及肌酐的濃度的觀察,應(yīng)用儀器AU-5800型號的生化分析儀。將腎組織分塊分裝儲存冰箱,溫度恒定為-80℃。組織切片檢測方法:H-E染色觀察腎小管損傷程度,免疫組化檢測腎臟細(xì)胞質(zhì)IL-6、TNF-α及細(xì)胞核NF-κBp65表達(dá),胞核中的NF-κB及包漿中的IL-6、TNF-α使用酶聯(lián)免疫吸附方法進(jìn)行檢測。結(jié)果 1各組大鼠腎功能變化:IR、L及H組血清中的尿素氮及肌酐的水平出現(xiàn)不同程度的增高,并且明顯在S組之上(P0.05),L及H組血清中的尿素氮及肌酐的濃度比IR組低(P0.05),H組血清中的尿素氮及肌酐的濃度較L組低(P0.05)。2腎臟組織病理變化:H-E染色:S組腎小球、腎小管細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰可見,無見細(xì)胞腫脹、壞死等異常改變。IR組鏡下可見腎組織皮髓質(zhì)交界區(qū)較多的腎小管細(xì)胞明顯腫脹、壞死,刷狀緣脫落,部分阻塞了腎小管,較多的中性粒細(xì)胞在腎間質(zhì)中被發(fā)現(xiàn)。L組的腎小管細(xì)胞有輕度的腫脹,腎小管的細(xì)胞內(nèi)側(cè)的刷狀緣可見少量的脫落下來,沒有看到明顯的破裂的腎基膜,較少的中性粒細(xì)胞在腎間質(zhì)中被發(fā)現(xiàn)。H組的腎小管細(xì)胞有輕度的腫脹,沒有發(fā)現(xiàn)脫落的腎小管的細(xì)胞內(nèi)側(cè)的刷狀緣,沒有中性粒細(xì)胞在腎間質(zhì)中被發(fā)現(xiàn)。3免疫組織化學(xué)染色:當(dāng)腎臟缺血再灌注損傷后,腎小管細(xì)胞損傷明顯,IL-6、TNF-α在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)增加,陽性細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)中呈現(xiàn)棕黃色著色,NF-κBp65由包漿轉(zhuǎn)移進(jìn)胞核內(nèi),出現(xiàn)棕黃色顏色染色的細(xì)胞核。S組腎小管細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核未見明顯著色,表明胞質(zhì)IL-6、TNF-α未見明顯表達(dá),NF-κBp65未見明顯核內(nèi)轉(zhuǎn)移。IR組腎小管的包漿IL-6、TNF-α及胞核NF-κBp65表達(dá)程度較S組明顯增強(qiáng),陽性表達(dá)的細(xì)胞區(qū)域相對大,包漿中及胞核內(nèi)棕黃色的顏色著色相對更強(qiáng)。L及H組表達(dá)較IR降低,陽性表達(dá)的細(xì)胞總數(shù)相對減少,H組更低于較L組的表達(dá),陽性表達(dá)的細(xì)胞總數(shù)更少,但仍高于S組。4 ELISA檢測結(jié)果:IR、L和H組胞質(zhì)IL-6、TNF-α及胞核NF-κB濃度都大于S組(P0.05),其中IR組胞質(zhì)IL-6、TNF-α及胞核NF-κB濃度最高(P0.05),H組較L組IL-6、TNF-α及NF-κB濃度明顯降低(P0.05)。結(jié)論 1水飛薊素可以減輕大鼠腎臟缺血再灌注損傷,其保護(hù)用作的機(jī)制是通過抑制NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核,進(jìn)而減少炎癥因子IL-6與TNF-α的表達(dá)。2高濃度水飛薊素[200mg/(kg·d)]可以增強(qiáng)對腎臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R692

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2701745