發(fā)布時(shí)間：2020-06-01 23:34

【摘要】：目的明確2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)合并糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)患者外周血白介素10(interleukin-10,IL-10)的表達(dá)水平及與DNA甲基化的關(guān)系,為DN抗炎及表觀遺傳機(jī)制的進(jìn)一步闡明提供線索。方法選取2017年08月至2018年07月于新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腎病科及內(nèi)分泌科住院的51例T2DM合并DN患者作為DN組,其中DNⅢ期21例、DNⅣ期30例。對照組:48例健康體檢人員。所有入組研究對象均知情同意并簽署知情同意書。收集患者一般資料及生化資料:年齡、性別、病程、血壓、血肌酐、血尿素、總膽固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、空腹血糖、糖化血紅蛋白、血鈣、24小時(shí)尿蛋白定量、超敏C反應(yīng)蛋白等,同時(shí)記錄健康體檢者相關(guān)資料。利用ELISA法檢測DN組和對照組外周血IL-10水平,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-Time Quantitative PCR,qPCR)法檢測兩組外周血IL-10 RNA表達(dá)水平,使用血液基因組DNA提取試劑盒對兩組進(jìn)行DNA提取,經(jīng)亞硫酸氫鈉處理后送至生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測序。運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,探討T2DM合并DN患者外周血IL-10的表達(dá)水平及與DNA甲基化的關(guān)系。結(jié)果1.一般資料及生化資料對比:DN組的收縮壓、血尿素、血肌酐、空腹血糖水平均高于對照組,且有顯著差異(P0.01)。DN組糖化血紅蛋白水平比對照組明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。DNⅢ期患者的血尿素、血肌酐、24小時(shí)尿蛋白定量明顯低于DNⅣ期患者,有顯著差異(P0.01)。DNⅢ期患者的糖化血紅蛋白、腎小球?yàn)V過率明顯高于DNⅣ期患者,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。DNⅢ期患者的收縮壓明顯低于DNⅣ期患者,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.ELISA檢測結(jié)果:DN組IL-10表達(dá)水平明顯低于對照組(P0.01)。3.qPCR檢測結(jié)果:與對照組相比,DN組的IL-10RNA表達(dá)水平明顯降低,且存在顯著性差異(P0.01)。其中,DNⅣ期患者的IL-10RNA水平較DNⅢ期患者升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.014);與對照組相比,DNⅢ期與DNⅣ期患者IL-10RNA的表達(dá)水平均明顯降低,且存在顯著性差異(P0.01)。4.DNA甲基化測序結(jié)果:DN組啟動(dòng)子區(qū)有稍高水平的DNA甲基化,但與對照組相比沒有明顯差異。結(jié)論T2DM合并DN患者的外周血IL-10蛋白水平及IL-10RNA水平均明顯下降,其啟動(dòng)子區(qū)有稍高水平的DNA甲基化,可能在DN病程的進(jìn)展中發(fā)揮作用。
【圖文】：

圖 1 ELISA 法檢測 IL-10 建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線見，本實(shí)驗(yàn)中 IL-10 ELISA 檢測的方程為：y=253.31x-4.81984，該標(biāo)準(zhǔn)曲線可信度高。CR 檢測 IL-10RNA 水平法的優(yōu)化β-actin 熒光定量引物的設(shè)計(jì)與合成enbank 中人 IL-10,β-actin 的基因序列信息，，使用 Primer 5.0 簡稱 P1,P2,P3）。由北京六合華大基因科技有限公司合成。IL 擴(kuò)增引物信息見表 3。表 3 IL-10 的熒光定量 PCR 擴(kuò)增引物引物序列（5'-3'） 退火溫度（℃） GC 含量（%GAACCAAGACCCAGACATCACATTCTTCACCTGCTCCAC58.4259.764757GTGATGCCCCAAGCTGCGGCCTTGCTCTTGTTTT62.0055.406350

圖 2 引物 P1,P2,P3 標(biāo)準(zhǔn)曲線A,B,C 分別為 P1,P2,P3 的標(biāo)準(zhǔn)曲線通過圖2 可以看出，P1 的相關(guān)系數(shù)為 0.9767，斜率為-2.4746；P2 的相關(guān)系數(shù)為 0.7822，斜率為-1.9023；P3 的相關(guān)系數(shù)為 0.9996，斜率為-3.2722。在 P3 擴(kuò)增體系下可以得到最優(yōu)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，使起始模板濃度與循環(huán)數(shù)有良好的線性關(guān)系。② 擴(kuò)增曲線、熔解曲線（見圖 3）圖 3 擴(kuò)增曲線和熔解曲線A：cDNA 模板在 100,101,102,103稀釋倍數(shù)下，引物為 P3 時(shí)獲得的擴(kuò)增曲線；B：引物為 P3 時(shí)獲得的熔解曲線。通過圖 3 可以看出，P3 的擴(kuò)增曲線符合標(biāo)準(zhǔn)的“S”形熒光擴(kuò)增曲線
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R587.2;R692.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 徐靜;蘇鴻莉;王俊宏;張春虹;;CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與2型糖尿病腎病的關(guān)系[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 李平;;糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制新認(rèn)識[A];2016年中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腎臟疾病專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)專題講座摘要[C];2016年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 楊穎濤;白細(xì)胞介素10基因多態(tài)性與食管癌的關(guān)系及其機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2017年

本文編號：2692241