【摘要】：目的:研究mi R-7-5p對前列腺癌細胞系中在能量代謝途徑以及生物學功能中相關(guān)作用,初步探尋其在前列腺癌中相關(guān)作用機制。方法:LNCa P、DU145、PC3細胞株體外轉(zhuǎn)染mi R-7-5p慢病毒、mimics,CCK-8實驗及克隆形成實驗檢測細胞增殖克隆能力。另外,通過葡萄糖及乳酸試劑盒檢測轉(zhuǎn)染完48-72小時mi R-7-5p慢病毒的細胞上清,檢測葡萄糖及乳酸變化水平,通過ELISA試劑盒檢測葡萄糖代謝途徑中相關(guān)酶G6PD、NADPH、CITRATE的含量的變化,通過數(shù)據(jù)庫比對發(fā)現(xiàn),mi R-7-5p與MEG3結(jié)合且mi R-7-5p與MEG3表達有一定相關(guān)性,另外在LNCa P、DU145、PC3細胞株體外轉(zhuǎn)染mi R-7-5p INHIBITOR,CCK-8實驗及克隆形成實驗檢測細胞增殖能力變化.實時定量PCR檢測轉(zhuǎn)染完慢病毒的前列腺癌細胞中mi R-7-5p的表達,送基因測序,進一步在PC3細胞中過表達帶有Biotin標記的mi R-7-5p,通過RNA PULL DOWN實驗后送測序,結(jié)合生物學信息網(wǎng)站預(yù)測,選擇交集靶基因,回復(fù)證明下游通路中基因蛋白水平改變,明確下游信號通路,進一步明確糖代謝作用機制及相關(guān)信號通路。結(jié)果:CCK-8法實驗表明過表達mi R-7-5p慢病毒及mimics后明顯抑制前列腺癌細胞LNCa P、DU145、PC3細胞的增殖能力;體外克隆實驗表明,過表達mi R-7-5p后抑制前列腺癌細胞LNCa P、DU145、PC3的克隆形成能力。前列腺癌細胞中過表達mi R-7-5p慢病毒后明顯抑制前列腺癌細胞的葡萄糖攝取,葡萄糖的消耗量明顯降低,同時乳酸產(chǎn)量較對照組明顯減少,且通過ELISA試劑盒檢測糖代謝途徑中G6PD、NADPH、CITRATE等代謝酶含量較對照組有明顯下降,通過RNA pull down和轉(zhuǎn)錄組及TARGETSCAN等基因網(wǎng)站預(yù)測發(fā)現(xiàn)PIK3CD、IL6R為下游靶基因,進一步尋找糖代謝相關(guān)信號通路,并了解mi R-7-5p在前列腺癌中相關(guān)抑癌作用。結(jié)論:mi R-7-5p發(fā)揮抑癌基因的作用,mi R-7-5p能夠明顯抑制前列腺癌細胞的葡萄糖攝取,mi R-7-5p可以結(jié)合MEG3,抑制前列腺癌細胞的增殖及克隆,明確了其在前列腺癌中具有抑癌作用。
【圖文】：

圖 1、MEG3 的含量在不同的組織中含量明顯不同，癌組織要比正常組織低，，而轉(zhuǎn)移性癌組織含量要比癌組織低，且隨著前列腺癌 Gleason 評分增加 MEG3 表達也是下降2. MEG3 表達量的不同對患者生存率的影響也不相同圖 2、高表達 MEG3 的患者的生存率要比低表達的患者預(yù)后好很多。

腺癌組織、轉(zhuǎn)移性前列腺癌中含量明顯不同。圖 1、MEG3 的含量在不同的組織中含量明顯不同，癌組織要比正常組織低，而轉(zhuǎn)移性癌組織含量要比癌組織低，且隨著前列腺癌 Gleason 評分增加 MEG3 表達也是下降2. MEG3 表達量的不同對患者生存率的影響也不相同
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.25

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1 馬建宏;曹開源;徐霖;鐘慧玲;張素粉;羅虹嬌;庹玖玲;張?zhí)?劉建中;;前列腺癌細胞轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的篩選[J];熱帶醫(yī)學雜志;2015年11期

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本文編號：2691822