【摘要】：目的:探討TET2在膀胱尿路上皮細胞癌T24細胞中對MAP4K1的影響及對T24細胞的遷移及凋亡的影響,為膀胱癌的診治提供實驗依據(jù)。材料與方法:(1)材料:選擇膀胱尿路上皮癌T24細胞株為研究對象。(2)方法:通過向T24細胞轉(zhuǎn)染TET2過表達和抑制表達載體及相應的陰性對照載體,利用Western Blot印跡檢測TET2及MAP4K1蛋白的表達量;利用細胞劃痕實驗檢測T24細胞遷移能力的改變;利用流式細胞學實驗檢測T24細胞凋亡的改變。實驗分為過表達組(T24細胞+過表達TET2質(zhì)粒組)及陰性對照組(T24細胞+空載質(zhì)粒組)、抑制組(T24細胞+si-TET2組)及陰性對照組(T24細胞+si-TET2-NC組)、空白對照組(T24細胞組)。利用Lipofectamine~(TM)2000分別向過表達組及其陰性對照組、抑制組及其陰性對照組T24細胞內(nèi)轉(zhuǎn)染體外合成的TET2過表達質(zhì)粒、空載質(zhì)粒、si-TET2片段、TET2-NC片段。培養(yǎng)6小時后,通過熒光鏡下視野與光鏡下視野對比,細胞的轉(zhuǎn)染效率達到80%以上便可進行后續(xù)的實驗。利用WesternBlot印跡檢測TET2及MAP4K1的蛋白表達量、細胞劃痕實驗檢測各組細胞遷移能力、流式細胞學實驗檢測各組細胞凋亡率。(2)統(tǒng)計方法:用SPSS23.0統(tǒng)計軟件及EXCEL軟件處理分析所得數(shù)據(jù),計量資料以均數(shù)±標準差(?±s)表示,兩組之間計量均數(shù)的比較采用t檢驗(student’s t test),當p0.05時,說明有統(tǒng)計學意義。結果:1.細胞轉(zhuǎn)染:TET2質(zhì)粒和TET2-siRNA成功轉(zhuǎn)染進T24細胞中;2.WB實驗:TET2過表達組與TET2過表達對照組相比,在TET2過表達組中TET2蛋白表達含量明顯增高,而MAP4K1蛋白表達含量明顯下降;TET2抑制組與TET2抑制組對照組相比,TET2抑制組中TET2表達含量明顯下降,而MAP4K1的蛋白表達含量明顯升高;空白組分別與TET2過表達對照組、TET2抑制對照組相比,其差異無統(tǒng)計學意義;3.細胞劃痕實驗:TET2過表達組與TET2過表達對照組相比,TET2過表達組的愈合率降低;TET2抑制組與TET2抑制組對照組相比,TET2抑制組的愈合率明顯增高;空白組分別與TET2過表達對照組、TET2抑制對照組相比,其差異無統(tǒng)計學意義;4.細胞凋亡實驗:TET2過表達組與TET2過表達對照組相比,TET2過表達組的凋亡率降低;TET2抑制組與TET2抑制組對照組相比,TET2抑制組的凋亡率明顯增高;空白組分別與TET2過表達對照組、TET2抑制對照組相比,其差異無統(tǒng)計學意義。結論:TET2下調(diào)MAP4K1的表達抑制T24細胞的遷移能力。
【圖文】：

可進行后續(xù)的實驗。圖 3.1 轉(zhuǎn)染細胞情況（100×）3.2 TET2 水平改變在蛋白層面對 MAP4K1 的影響將檢測合格的且已經(jīng)轉(zhuǎn)染好的細胞培養(yǎng) 24h 后，按照蛋白提取方法提取蛋白，用內(nèi)參調(diào)整每組蛋白量，使之每組蛋白量大致相同；調(diào)整好每組蛋白樣液量后，，用 Western Blot 法檢測目的蛋白含量，每個蛋白重復 Western Blot 3-4，如圖 3.2.1：A：TET2 過表達組；B：TET2 過表達對照組；C：TET2 抑制組 3092；D：TET2 抑制組 1417；E：TET2 抑制組 519；F：TET2 抑制對照組；G：空白組。

圖 3.1 轉(zhuǎn)染細胞情況（100×）2 TET2 水平改變在蛋白層面對 MAP4K1 的影響將檢測合格的且已經(jīng)轉(zhuǎn)染好的細胞培養(yǎng) 24h 后，按照蛋白提取方法提，用內(nèi)參調(diào)整每組蛋白量，使之每組蛋白量大致相同；調(diào)整好每組蛋白樣，用 Western Blot 法檢測目的蛋白含量，每個蛋白重復 Western Blot 圖 3.2.1：A：TET2 過表達組；B：TET2 過表達對照組；C：TET2 抑制組 TET2 抑制組 1417；E：TET2 抑制組 519；F：TET2 抑制對照組；G：空白
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R737.14

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本文編號：2691360