【摘要】：目的:建立并采用腎臟缺血-再灌注necroptosis大鼠模型(Ischemia-Reperfusion Injury,IRI),觀察其生化指標(biāo)、腎臟病理學(xué)改變及LC3-II、JNK、CYPD蛋白的表達(dá),以探討JNK及親環(huán)素D對腎缺血再灌注中necroptosis的影響及其相關(guān)性。方法:1.建立腎臟缺血-再灌注necroptosis大鼠模型:選取9只體重為220-250mg的健康成年雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠,按數(shù)字隨機(jī)法將其隨機(jī)分為3組:1組陰性對照組,2組模型組,3組nec-1組,每組3只大鼠。通過將雙側(cè)腎動脈夾閉45分鐘然后再灌注24小時,在2組和3組中建立腎缺血再灌注necroptosis大鼠模型,于模型完成前1h在3組中予腹腔注射nec-1(由DMSO溶解),在2組中再灌注前1小時給予腹腔注射相應(yīng)體積的DMSO溶液,1組僅把雙側(cè)腎蒂游離,余未做任何治療與處理,于再灌注24小時后取腎臟組織用Western blot方法檢測各組LC3-II的表達(dá),驗(yàn)證大鼠腎臟necroptosis造模成功。2.模型成功后,選取24只體重為220-250mg的健康成年雄性SD大鼠,按數(shù)字隨機(jī)法將其隨機(jī)分為4組:A組假手術(shù)組,B組模型組,C組JNK抑制組,D組親環(huán)素D抑制組,每組6只大鼠。在C組和D組建立腎缺血再灌注necroptosis大鼠模型,于模型完成前1小時予腹腔注射給藥(干預(yù)藥物由DMSO溶解)。在B組進(jìn)行缺血再灌注necroptosis模型建立后,在再灌注前1小時給予腹腔注射等體積的DMSO溶液。A組僅把雙側(cè)腎蒂游離,余未做任何治療與處理。建模成功后,四組大鼠收集標(biāo)本:尾靜脈采血檢測血肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN);取腎臟組織行HE染色制作病理切片,觀察腎臟組織在顯微鏡下的病理改變及評估腎小管損傷指數(shù)。用Western blot方法檢測LC3-II、JNK、親環(huán)素D(CYPD)的表達(dá)。結(jié)果:1.與1組正常對照組相比,3組nec-1組的LC3-II蛋白的表達(dá)明顯升高(P0.05),比2組模型組明顯降低(P0.05)。2.與假手術(shù)組相比,JNK抑制組、親環(huán)素D抑制組及模型組的Scr、BUN水平均升高(P0.05),以模型組升高更為顯著(P0.01)。且JNK抑制組及親環(huán)素D抑制組比模型組的Scr、BUN均降低(P0.05)。3.HE染色顯示:假手術(shù)組:腎小管上皮細(xì)胞是完整的,基底膜是連續(xù)且完整的。模型組:腎小管結(jié)構(gòu)異常,表現(xiàn)為不同程度的細(xì)胞脫落壞死、腫脹、渾濁、管型形成、炎癥細(xì)胞浸潤。JNK抑制組及親環(huán)素D抑制組:細(xì)胞脫落壞死、腫脹、渾濁、管型形成較模型組均減輕,炎癥細(xì)胞浸潤相對減少。與假手術(shù)組相比,JNK抑制組及親環(huán)素D抑制組腎小管壞死評分顯著增加(P0.05),但低于模型組(P0.05)。4.Western blot結(jié)果示:1)假手術(shù)組中LC3-II、CYPD、JNK蛋白的表達(dá)量很低,模型組中三者的表達(dá)均高于假手術(shù)組(P0.05)。JNK抑制組及親環(huán)素D抑制組LC3-II、親環(huán)素D、JNK的表達(dá)較假手術(shù)組均升高(P0.05),但均低于模型組(P0.05)。2)當(dāng)阻斷JNK時,JNK及親環(huán)素D的表達(dá)量均下降,C組中的親環(huán)素D表達(dá)量和D組中的親環(huán)素D表達(dá)量無明顯差異,兩者間的差異不具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);當(dāng)阻斷親環(huán)素D時,親環(huán)素D的表達(dá)量明顯下降,而JNK的表達(dá)量無明顯下降,D組中JNK的表達(dá)量明顯高于C組中JNK的表達(dá)量,其差異具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1)JNK抑制劑及親環(huán)素D抑制劑均能減輕腎臟缺血再灌注損傷,對腎臟缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用,JNK及親環(huán)素D在腎缺血再灌注誘導(dǎo)線粒體途徑necroptosis中起重要作用。2)JNK抑制劑改善大鼠的腎臟缺血再灌注損傷可能與下調(diào)親環(huán)素D的表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

第 3 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果注模型中 LC3-II 蛋白的：1 組 LC3-II 蛋白的表達(dá)量很。3 組的 LC3-II 蛋白的表達(dá)較的表達(dá)量水平比較（n=3， X±S）N LC) 3 0.3393 0.5843 0.446150.2 組，P<0.051 組 2 組 3 組LC

C 組（HE×200） D 組（HE×200）圖 3.4 各組大鼠的 HE 染色切片的病理學(xué)表現(xiàn)注：A 組表示假手術(shù)組，B 組表示模型組，C 組表示 JNK 抑制組，D 組表示親環(huán)素 D 抑制組。3.4.2 腎小管壞死評分結(jié)果根據(jù)各組大鼠腎臟 HE 染色切片在 200×光鏡下進(jìn)行觀察評價，并進(jìn)行腎小管壞死評分。如表 3.3 所示，與假手術(shù)組相比，模型組、JNK 抑制組及親環(huán)素 D抑制組的腎小管壞死評分均升高（P<0.05），以模型組為甚（P<0.01）。與模型組相比，，JNK 抑制組及親環(huán)素 D 抑制組的腎小管壞死評分均下降（P<0.05），其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。JNK 抑制組和親環(huán)素 D 抑制組的腎小管壞死評分無明顯差異（P>0.05）。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R692

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本文編號：2689726