【摘要】：目的在前列腺癌細(xì)胞系DU145中,通過(guò)檢測(cè)CCAT2的含SNP位點(diǎn)的153bp區(qū)段G/T型啟動(dòng)子活性及其差異,及其啟動(dòng)子結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子的不同,探討長(zhǎng)鏈非編碼基因CCAT2的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。方法質(zhì)粒構(gòu)建,以熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒載體pGL3-Basic-LUC和插入SV40啟動(dòng)子的pGL3-Promoter-LUC為基礎(chǔ),將課題組前期工作篩選出最短長(zhǎng)度(153bp)的可能的CCAT2基因啟動(dòng)子功能區(qū)段分別以不同方向連接到上述質(zhì)粒載體上以驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因表達(dá),分別命名為pGL3-Basic-153Gs-LUC、pGL3-Basic-153Ts-LUC、pGL3-Promoter-153Ts-LUC和pGL3-Promoter-153Gs-LUC、pGL3-PromoterTRANS-153Ts-LUC和pGL3-Promoter-TRANS-153Gs-LUC。應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)方法,檢測(cè)包含CCAT2的SNP位點(diǎn)的G/T差區(qū)段的啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性。與CCAT2基因啟動(dòng)子結(jié)合的候選轉(zhuǎn)錄因子DDX5,采用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western-Blot)方法檢測(cè)其表達(dá)。采用染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)聯(lián)合q PCR檢測(cè)該候選轉(zhuǎn)錄因子DDX5與CCAT2基因啟動(dòng)子的結(jié)合活性,以及G/T差異的該區(qū)段與DDX5的結(jié)合活性差異。結(jié)果在DU145細(xì)胞中,雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示,pGL3-153Gs-LUC和pGL3-153Ts-LUC構(gòu)建成功,雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示,能夠驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因表達(dá)(P0.05,P0.05)。T型CCAT2啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的報(bào)告基因相對(duì)活性高于G型(P0.05),但是與pGL3-Promoter-LUC轉(zhuǎn)染組SV40啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的報(bào)告基因相對(duì)活性比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在pGL3-Promoter-LUC報(bào)告基因質(zhì)粒載體,插入Gs/Ts153bp啟動(dòng)子功能區(qū)段后,驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因的相對(duì)活性升高(P0.05);且T型CCAT2啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因表達(dá)的水平高于G型(P0.05);而反向插入Gs/Ts153bp啟動(dòng)子功能區(qū)段驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因,其相對(duì)活性均與對(duì)照組SV40啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的報(bào)告基因相對(duì)活性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Western-Blot結(jié)果顯示在前列腺癌細(xì)胞系DU145細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞中DDX5蛋白均有表達(dá);ChIP聯(lián)合qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示DDX5與CCAT2基因啟動(dòng)子具有結(jié)合活性,且結(jié)合的T型啟動(dòng)子結(jié)合活性高于G型(P0.05)。結(jié)論在前列腺癌DU145細(xì)胞系中,包含的rs6983267 SNP位點(diǎn)的長(zhǎng)度為153bp G/T差異區(qū)段具有啟動(dòng)子活性,T型區(qū)段的活性高于G型;這差異可能與DDX5的差異結(jié)合有關(guān)。
【圖文】：

2：pGL3-Promoter-153Gs-LUC 酶切，3：moter-TRANS-153Gs-LUC 酶切，，5：pGL3-Promoter1 pGL3-Promoter-LUC 系列報(bào)告基因質(zhì)粒的truction of reporter plasmids basing on pGL3-Pr

- 15 -ANS-153Gs-LUC 的方向 PCR，2：pGLL3-Promoter-153Gs-LUC 連接片段 direction identification.on pGL3-Promoter-153Gs-LUC、pGL3-ProC、pGL3-Promoter--TRANS-
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 Mohammadreza Hajjari;Abbas Salavaty;;HOTAIR:an oncogenic long non-coding RNA in different cancers[J];Cancer Biology & Medicine;2015年01期

2 ;Association between polymorphism rs6983267 and gastric cancer risk in Chinese population[J];World Journal of Gastroenterology;2011年13期

3 李建彬;范廷勇;盧潔;馬志芳;王永勝;邵倩;劉娟;邢軍;白瞳;;乳腺癌保乳術(shù)后部分乳腺三維適形放療的臨床觀察[J];中華放射腫瘤學(xué)雜志;2007年06期

4 楊蕾,高歌,趙建軍,盛傳倫;COX-2在胃癌組織中的表達(dá)及與Hp感染的關(guān)系探討[J];癌變.畸變.突變;2003年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 徐勇;楊全成;劉冉錄;楊闊;齊士勇;李靖;;天津市前列腺癌發(fā)病診斷治療狀況調(diào)查[A];第四屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

本文編號(hào)：2689569