【摘要】：背景:慢性腎臟病(chronic kidney disease,CKD)是指由各種原因?qū)е碌哪I臟慢性結(jié)構(gòu)和功能障礙,其中腎臟損傷史大于3個(gè)月。腎臟纖維化是各種腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎病(end stage of renal disease,ESRD)的主要病理學(xué)基礎(chǔ),包括腎小球硬化、腎小管萎縮以及腎間質(zhì)纖維化等病理過程。在腎臟結(jié)構(gòu)中,由于腎小管間質(zhì)體積占總體積的90%,因此慢性腎小管間質(zhì)病變?cè)贑KD的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。微血管損傷后將引發(fā)如缺氧、炎癥、內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化以及血管生成因子失衡等一系列的級(jí)聯(lián)反應(yīng),最終導(dǎo)致腎纖維化,所以保護(hù)微血管可以緩解進(jìn)行性腎損傷和改善腎小管間質(zhì)病變。在血管生成素家族中,激活A(yù)ng1/Tie2信號(hào)系統(tǒng)具有抗血管炎癥反應(yīng)、降低血管通透性以及穩(wěn)定血管和促進(jìn)血管生長等作用。在形成慢性腎小管間質(zhì)病變的基礎(chǔ)上,有關(guān)激活Tie2信號(hào)來減少腎小管間質(zhì)纖維化發(fā)生的研究尚未見相關(guān)報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)擬探討Tie2信號(hào)激活對(duì)葉酸腎病小鼠小管間質(zhì)病變的改善作用,旨在為治療慢性腎小管間質(zhì)病變提供潛在的治療靶點(diǎn)。方法:選取4周齡雄性CD1小鼠,向小鼠腹腔注射葉酸(溶解于5%Na HCO3,濃度為24mg/m L,劑量為240mg/kg),建立小鼠葉酸腎損傷模型組(F組),腹腔注射5%Na HCO3建立正常對(duì)照組(Con組)。實(shí)驗(yàn)第7天,稱量12只F組小鼠和6只Con組小鼠體重,取各小鼠右腎,觀察腎臟外觀并稱量腎重。將右腎一分為二,其中一半右腎做Masson染色和免疫組化,另一半右腎做Western blot。Masson染色觀察組織病理,免疫組化檢測(cè)成纖維細(xì)胞特異性蛋白-1(FSP-1)陽性表達(dá)情況,Western blot檢測(cè)血管細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1)表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)第9天,將12只F組小鼠分為6只F+I組和6只F+T組。向Con組及F+I組小鼠腹腔內(nèi)注射大鼠Ig G抗體(1mg/只),向F+T組小鼠腹腔內(nèi)注射大鼠抗小鼠激發(fā)型Tie2單克隆抗體(1mg/只)。實(shí)驗(yàn)第28天,稱量三組小鼠體重,取各小鼠左腎,觀察腎臟外觀并稱量腎重,取一半左腎做Masson染色和免疫組化,另一半左腎做Western blot,進(jìn)行每只鼠前后各項(xiàng)指標(biāo)分析。結(jié)果:1、腎重/體重比值(%):第7天,F+T組(0.8859±0.1168)和F+I組(0.8679±0.1029)比值均大于Con組(0.6671±0.708,p0.05),提示腎臟腫大。第28天,F+T組(0.7883±0.1248)比值與Con組(0.9324±0.0937)相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);F+I組(0.6781±0.0602)比值小于Con組(p0.01)。F+I組第28天比值小于同組第7天(p0.01),提示F+I組腎臟萎縮;F+T組第28天比值與同組第7天相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。2、腎小管間質(zhì)病變面積/總面積比值(%):第7天,F+T組(76.61±6.81)和F+I組(74.11±8.38)比值均大于Con組(p0.0001),提示廣泛腎小管間質(zhì)病變。到第28天,經(jīng)Tie2抗體干預(yù)的F+T組腎小管間質(zhì)病變面積比值(7.47±2.22)小于同組第7天腎小管間質(zhì)病變面積比值(p0.0001),經(jīng)Ig G干預(yù)的F+I組腎小管間質(zhì)病變面積比值(17.74±4.40)也小于同組第7天腎小管間質(zhì)病變面積比值(p0.0001),但F+T組第28天面積比值與第7天面積比值的差值(69.14±6.45)大于F+I組(56.37±4.36,p0.01),提示F+T組比F+I組腎小管間質(zhì)病變改善。第28天,F+T組腎小管間質(zhì)纖維化面積比值(5.43±2.25)小于F+I組(15.07±4.56,p0.01),提示Tie2抗體減少腎小管間質(zhì)纖維化發(fā)生。3、免疫組化:第7天,F+T組和F+I組FSP-1陽性細(xì)胞數(shù)均大于Con組(p0.0001)。第28天,F+T組FSP-1陽性細(xì)胞數(shù)小于F+I組(p0.05)。F+T組和F+I組第28天FSP-1陽性細(xì)胞數(shù)小于同組第7天(p0.001)。F+T組第28天FSP-1陽性細(xì)胞數(shù)與第7天的差值大于F+I組(p0.01)。4、Weston blot:第7天,F+T組和F+I組VCAM-1表達(dá)水平均升高(p0.01)。第28天,F+T組VCAM-1表達(dá)水平與Con組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),F+T組VCAM-1表達(dá)水平低于F+I組(p0.05)。F+T組第28天VCAM-1表達(dá)水平低于同組第7天(p0.001)。F+I組第28天VCAM-1表達(dá)水平與同組第7天相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。結(jié)論:(1)在形成慢性腎小管間質(zhì)病變的基礎(chǔ)上,Tie2信號(hào)激活能明顯改善小鼠葉酸腎病腎小管間質(zhì)病變,并且可以減少腎小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生;(2)Tie2信號(hào)激活可能通過降低FSP-1和VCAM-1表達(dá),起到改善腎小管間質(zhì)病變和減少腎小管間質(zhì)纖維化的作用。
【圖文】：

各組小鼠腎臟外觀（n=6）

15結(jié)果分析：（1）Con 組腎小管結(jié)構(gòu)清晰、形態(tài)正常，無異常病理表現(xiàn)（見圖 4A）。（2）實(shí)驗(yàn)第 7 天，，腎損傷模型組小鼠腎臟可見明顯的慢性腎小管間質(zhì)病變區(qū)域括腎小管結(jié)構(gòu)紊亂、大空泡變性、壞死，腎小管刷狀緣脫落、粗顆粒變性，腎小皮細(xì)胞崩解、脫落、小管堵塞，間質(zhì)水腫和炎性細(xì)胞浸潤（見圖 4B、C）。（3）實(shí)驗(yàn)第 28 天，F(xiàn)+T 組腎小管結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常，較第 7 天腎小管病變面少，且腎小管間質(zhì)纖維化面積小于 F+I 組（見圖 4D、E）。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R692.6

【參考文獻(xiàn)】

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1 Montserrat B Duran-Salgado;Alberto F Rubio-Guerra;;Diabetic nephropathy and inflammation[J];World Journal of Diabetes;2014年03期

本文編號(hào)：2683186