【摘要】：背景:慢性腎臟病(chronic kidney disease,CKD)是指由各種原因?qū)е碌哪I臟慢性結構和功能障礙,其中腎臟損傷史大于3個月。腎臟纖維化是各種腎臟疾病進展到終末期腎病(end stage of renal disease,ESRD)的主要病理學基礎,包括腎小球硬化、腎小管萎縮以及腎間質(zhì)纖維化等病理過程。在腎臟結構中,由于腎小管間質(zhì)體積占總體積的90%,因此慢性腎小管間質(zhì)病變在CKD的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。微血管損傷后將引發(fā)如缺氧、炎癥、內(nèi)皮細胞轉(zhuǎn)分化以及血管生成因子失衡等一系列的級聯(lián)反應,最終導致腎纖維化,所以保護微血管可以緩解進行性腎損傷和改善腎小管間質(zhì)病變。在血管生成素家族中,激活Ang1/Tie2信號系統(tǒng)具有抗血管炎癥反應、降低血管通透性以及穩(wěn)定血管和促進血管生長等作用。在形成慢性腎小管間質(zhì)病變的基礎上,有關激活Tie2信號來減少腎小管間質(zhì)纖維化發(fā)生的研究尚未見相關報道,本實驗擬探討Tie2信號激活對葉酸腎病小鼠小管間質(zhì)病變的改善作用,旨在為治療慢性腎小管間質(zhì)病變提供潛在的治療靶點。方法:選取4周齡雄性CD1小鼠,向小鼠腹腔注射葉酸(溶解于5%Na HCO3,濃度為24mg/m L,劑量為240mg/kg),建立小鼠葉酸腎損傷模型組(F組),腹腔注射5%Na HCO3建立正常對照組(Con組)。實驗第7天,稱量12只F組小鼠和6只Con組小鼠體重,取各小鼠右腎,觀察腎臟外觀并稱量腎重。將右腎一分為二,其中一半右腎做Masson染色和免疫組化,另一半右腎做Western blot。Masson染色觀察組織病理,免疫組化檢測成纖維細胞特異性蛋白-1(FSP-1)陽性表達情況,Western blot檢測血管細胞粘附分子-1(VCAM-1)表達情況。實驗第9天,將12只F組小鼠分為6只F+I組和6只F+T組。向Con組及F+I組小鼠腹腔內(nèi)注射大鼠Ig G抗體(1mg/只),向F+T組小鼠腹腔內(nèi)注射大鼠抗小鼠激發(fā)型Tie2單克隆抗體(1mg/只)。實驗第28天,稱量三組小鼠體重,取各小鼠左腎,觀察腎臟外觀并稱量腎重,取一半左腎做Masson染色和免疫組化,另一半左腎做Western blot,進行每只鼠前后各項指標分析。結果:1、腎重/體重比值(%):第7天,F+T組(0.8859±0.1168)和F+I組(0.8679±0.1029)比值均大于Con組(0.6671±0.708,p0.05),提示腎臟腫大。第28天,F+T組(0.7883±0.1248)比值與Con組(0.9324±0.0937)相比無統(tǒng)計學差異(p0.05);F+I組(0.6781±0.0602)比值小于Con組(p0.01)。F+I組第28天比值小于同組第7天(p0.01),提示F+I組腎臟萎縮;F+T組第28天比值與同組第7天相比無統(tǒng)計學差異(p0.05)。2、腎小管間質(zhì)病變面積/總面積比值(%):第7天,F+T組(76.61±6.81)和F+I組(74.11±8.38)比值均大于Con組(p0.0001),提示廣泛腎小管間質(zhì)病變。到第28天,經(jīng)Tie2抗體干預的F+T組腎小管間質(zhì)病變面積比值(7.47±2.22)小于同組第7天腎小管間質(zhì)病變面積比值(p0.0001),經(jīng)Ig G干預的F+I組腎小管間質(zhì)病變面積比值(17.74±4.40)也小于同組第7天腎小管間質(zhì)病變面積比值(p0.0001),但F+T組第28天面積比值與第7天面積比值的差值(69.14±6.45)大于F+I組(56.37±4.36,p0.01),提示F+T組比F+I組腎小管間質(zhì)病變改善。第28天,F+T組腎小管間質(zhì)纖維化面積比值(5.43±2.25)小于F+I組(15.07±4.56,p0.01),提示Tie2抗體減少腎小管間質(zhì)纖維化發(fā)生。3、免疫組化:第7天,F+T組和F+I組FSP-1陽性細胞數(shù)均大于Con組(p0.0001)。第28天,F+T組FSP-1陽性細胞數(shù)小于F+I組(p0.05)。F+T組和F+I組第28天FSP-1陽性細胞數(shù)小于同組第7天(p0.001)。F+T組第28天FSP-1陽性細胞數(shù)與第7天的差值大于F+I組(p0.01)。4、Weston blot:第7天,F+T組和F+I組VCAM-1表達水平均升高(p0.01)。第28天,F+T組VCAM-1表達水平與Con組相比無統(tǒng)計學差異(p0.05),F+T組VCAM-1表達水平低于F+I組(p0.05)。F+T組第28天VCAM-1表達水平低于同組第7天(p0.001)。F+I組第28天VCAM-1表達水平與同組第7天相比無統(tǒng)計學差異(p0.05)。結論:(1)在形成慢性腎小管間質(zhì)病變的基礎上,Tie2信號激活能明顯改善小鼠葉酸腎病腎小管間質(zhì)病變,并且可以減少腎小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生;(2)Tie2信號激活可能通過降低FSP-1和VCAM-1表達,起到改善腎小管間質(zhì)病變和減少腎小管間質(zhì)纖維化的作用。
【圖文】：

各組小鼠腎臟外觀（n=6）

15結果分析：（1）Con 組腎小管結構清晰、形態(tài)正常，無異常病理表現(xiàn)（見圖 4A）。（2）實驗第 7 天，，腎損傷模型組小鼠腎臟可見明顯的慢性腎小管間質(zhì)病變區(qū)域括腎小管結構紊亂、大空泡變性、壞死，腎小管刷狀緣脫落、粗顆粒變性，腎小皮細胞崩解、脫落、小管堵塞，間質(zhì)水腫和炎性細胞浸潤（見圖 4B、C）。（3）實驗第 28 天，F(xiàn)+T 組腎小管結構基本恢復正常，較第 7 天腎小管病變面少，且腎小管間質(zhì)纖維化面積小于 F+I 組（見圖 4D、E）。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R692.6

【參考文獻】

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1 Montserrat B Duran-Salgado;Alberto F Rubio-Guerra;;Diabetic nephropathy and inflammation[J];World Journal of Diabetes;2014年03期

本文編號：2683186