【摘要】：目的：探索出一種構(gòu)建小鼠膀胱腫瘤原位模型的優(yōu)化方法。研究銅綠假單胞菌制劑(PA-MSHA)體內(nèi)抗膀胱癌效應(yīng)和對脾臟細(xì)胞增殖效果的影響,探索其作用的機(jī)制,為膀胱癌的輔助治療提供理論支持和依據(jù)。 方法：通過硝酸銀、鹽酸、胰酶和乙醇預(yù)處理C57BL/6小鼠膀胱粘膜,術(shù)后1和24小時(shí)隨機(jī)處死每組3只小鼠,摘取小鼠膀胱組織,應(yīng)用HE染色后觀察膀胱粘膜的病理變化；戊二醛固定,膀胱粘膜細(xì)胞在電鏡下觀察微觀結(jié)構(gòu)的變化；應(yīng)用甲苯胺藍(lán)染色后,顯微成像系統(tǒng)下觀察膀胱粘膜固有層的肥大細(xì)胞數(shù)目變化；應(yīng)用過碘酸-希夫(PAS)染色,觀察處理后的膀胱粘膜中GAG層的變化。應(yīng)用硝酸銀、鹽酸、胰酶和乙醇預(yù)處理小鼠膀胱后,構(gòu)建膀胱癌的原位腫瘤模型,然后計(jì)算各組的成瘤率。建立C57BL/6小鼠腫瘤皮下模型,7天后隨機(jī)分為PA-MSHA高、中、低濃度組和對照組,同時(shí)監(jiān)測腫瘤體積的變化；分別在建模后14、21和28天處死每組3只小鼠,收集血清,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測CD4+和CD8+；完整摘取腫瘤組織,固定后計(jì)數(shù)VEGF評分和微血管密度(MVD)。外科無菌條件下摘取C57BL/6小鼠的脾臟,制備脾細(xì)胞懸液,給予不同劑量PA-MSHA后孵育72小時(shí),同時(shí)設(shè)立對照組,在孵育結(jié)束后測定0D值,計(jì)算增值效率。 結(jié)果：應(yīng)用胰酶和酒精作用1小時(shí)后,膀胱粘膜局部上皮傘狀細(xì)胞脫落,粘膜下層暴露；在酸堿和硝酸銀處理的膀胱中,粘膜大部完整性被破壞,同時(shí)粘膜下層暴露較多,粘膜的連續(xù)性中斷；在對炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)后發(fā)現(xiàn),對照組和實(shí)驗(yàn)組間炎癥細(xì)胞浸潤均不表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。24小時(shí)后,胰酶和乙醇處理組可見粘膜局部輕度水腫并充血,粘膜的完整性恢復(fù)較好,細(xì)胞間可見緊密連接；酸堿和硝酸銀處理組膀胱上皮粘膜薄厚不均一,仍可見脫落的部分粘膜。PA-MSHA作用組腫瘤的體積與對照組比較明顯縮小,效果呈現(xiàn)濃度梯度變化；同時(shí),高濃度PA-MSHA作用組小鼠生存時(shí)間最長,對照組小鼠生存時(shí)間最短；對腫瘤組織固定切片后發(fā)現(xiàn)VEGF和MVD在PA-MSHA作用組顯著降低；術(shù)后14天,所有指標(biāo)均有所上升；隨著時(shí)間的進(jìn)展,在術(shù)后21天和28天,PA-MSHA作用組小鼠血清CD4+、CD8+水平顯著提高；在脾細(xì)胞增值實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)PA-MSHA作用組OD值較對照組顯著增高,且呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性。 結(jié)論：硝酸銀和酸堿可作為構(gòu)建鼠膀胱腫瘤原位模型的首選預(yù)處理因素。同時(shí),PA-MSHA能夠促進(jìn)脾細(xì)胞的增值,提高血清CD4+、CD8+水平,減少腫瘤組織中VEGF和MVD的數(shù)量,抑制腫瘤的生長,提高小鼠的生存率和免疫力,發(fā)揮抗腫瘤作用。PA-MSHA為膀胱癌的治療提供了新的策略。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.14

【參考文獻(xiàn)】

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1 楊慎敏;溫端改;侯建全;何軍;岑建農(nóng);陳劍華;;原位膀胱癌動物模型的建立及應(yīng)用[J];癌癥;2007年04期

2 梁中錕;張琳;胡志明;陳忠;黃鑫;石向華;譚萬龍;高基民;;新方法簡便高效建立小鼠原位膀胱癌模型[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年04期

3 陳衛(wèi)東;唐中華;徐峰;;TAC方案聯(lián)合使用綠膿桿菌制劑在乳腺癌新輔助化療中的應(yīng)用研究[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年06期

4 王劍;吳德華;陳龍華;;銅綠假單胞菌制劑抑制鼻咽癌細(xì)胞體外增殖[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2012年04期

5 鄒寧;宮衛(wèi)東;周媛;張積仁;;ConA識別的高甘露糖型糖蛋白在腫瘤患者血清中表達(dá)的研究[J];廣東醫(yī)學(xué);2006年06期

6 韓蘇軍;張思維;陳萬青;李長嶺;;中國膀胱癌發(fā)病現(xiàn)狀及流行趨勢分析[J];癌癥進(jìn)展;2013年01期

7 車憲平;韓瑞發(fā);;C57BL/6小鼠原位膀胱腫瘤模型的建立[J];現(xiàn)代泌尿外科雜志;2009年04期

8 張東生,武文森;BBN誘發(fā)大鼠膀胱癌過程的電鏡研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1994年03期

9 潘春武;胡明明;唐小瑩;孫俊;沈周俊;;大鼠原位膀胱癌模型的建立及CT鑒定方法[J];現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志;2011年01期

10 凌偉;劉驊;曹暉;郁豐榮;徐佳;;銅綠假單胞菌注射液對胃癌細(xì)胞體外殺傷作用的觀察[J];中華腫瘤防治雜志;2008年18期

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本文編號：2682125