發(fā)布時間：2020-05-23 23:12

【摘要】：目的:通過高通量測序(High-throughput sequencing)檢測腎衰竭患者自體動靜脈內(nèi)瘺(autologous arteriovenous fistula,AVF)流出道靜脈狹窄組織中長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)的表達譜變化,探討lncRNA與AVF流出道靜脈狹窄的關系。方法:選擇2017年2至6月在南昌大學第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科診斷AVF失功患者再次手術的血管組織28例(實驗組),納入標準為內(nèi)瘺使用時間≥3個月;內(nèi)瘺透析時血流量≤200 ml/min;內(nèi)瘺狹窄程度大于50%,排除有明顯血栓形成者;上肢血管超聲檢查資料完整者。對照組選自同一機構尿毒癥患者初次行動靜脈內(nèi)瘺術的血管組織75例,納入標準為流出道血管內(nèi)徑≥1.6 mm,且無血管狹窄或其他血管疾病者。將103個樣本采用Trizol法提取總RNA,分別選取實驗組和對照組各4例,利用高通量測序分別檢測其lncRNA及mRNA表達譜的差異,隨后篩選出差異表達的lncRNA及mRNA,進行聚類分析,GO功能分析、KEGG pathway分析;并用實時熒光定量PCR(real-time RT-PCR,qRT-PCR)對RNA-seq結(jié)果進行驗證;最后擴大樣本量驗證LINC01615在動靜脈內(nèi)瘺流出道靜脈狹窄組織中高表達。結(jié)果:與對照組相比,表達變化≥2倍并且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)的lncRNA或mRNA,認為是顯著差異表達的lncRNA或mRNA。(1)lncRNA表達變化≥2倍的共247個,實驗組表達上調(diào)≥2倍的有141個,表達下調(diào)≥2倍的有106個;(2)mRNA表達變化≥2倍的共1386個,實驗組表達上調(diào)≥2倍的有874個,表達下調(diào)≥2倍的有512個;(3)GO功能分析提示顯著差異表達的lncRNA主要參與了細胞的分化、凋亡;血管形態(tài)發(fā)生、血管發(fā)育、脈管系統(tǒng)發(fā)育等;(4)KEGG pathway分析提示差異表達的基因注釋到PI3K-AKT信號通路是最多的,其顯著性最高的是TGF-β信號通路。(5)在顯著差異表達的ncRNA中,使用qRT-PCR技術對關鍵性的9個lncRNA及7個mRNA表達水平進行驗證,其結(jié)果與測序一致;(6)與對照組相比,LINC01615在動靜脈內(nèi)瘺流出道靜脈狹窄組織中高表達。結(jié)論:尿毒癥血液透析患者動靜脈內(nèi)瘺流出道靜脈組織存在顯著差異性表達的lncRNA,這些lncRNA及某些信號通路可能在尿毒癥患者AVF流出道靜脈狹窄發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究可能為AVF流出道狹窄的發(fā)病機制的闡述奠定基礎,并為AVF失功患者提供潛在的預防靶點。
【圖文】：

圖 1：HE 染色結(jié)果A：對照組血管 HE 染色×200，B：實驗組血管 HE 染色×200，，4.2 RNA-seq 測序結(jié)果4.2.1 差異表達的 lncRNA 與 mRNA（1）與對照組相比，表達變化倍數(shù)≥2 并且差異lncRNA 或 mRNA,認為是差異表達的 lncRNA 或 mRN數(shù)≥2 的共 247 個,占所有可探測的 lncRNA 的 0.89%。141 個,其中≥5 倍的有 21 個;表達下調(diào)≥2 倍的有 106 mRNA 表達變化≥2 倍的共 1386 條，占所有可探測的表達上調(diào)≥2 倍的有 874 個,其中≥5 倍的有 194 個;表達≥5 倍的有 69 個。（2）使用 R 語言 ggplot2 軟件包繪制差異表達轉(zhuǎn)

第 4 章 結(jié)果火山圖可直觀看出 Fold Change≥2.0，P-value <0.05 的差異表達 lncRNA 和mRNA。藍點表示顯著下調(diào)基因，紅點表示顯著上調(diào)基因，灰色表示無顯著差異表達基因。通過 MA 圖可以看出轉(zhuǎn)錄本呈對稱表達，說明表達差異不隨轉(zhuǎn)錄表達而發(fā)生偏倚。結(jié)果見圖 2 和圖 3。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R692.5;Q811.4

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