【摘要】：目的:通過(guò)高通量測(cè)序(High-throughput sequencing)檢測(cè)腎衰竭患者自體動(dòng)靜脈內(nèi)瘺(autologous arteriovenous fistula,AVF)流出道靜脈狹窄組織中長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)的表達(dá)譜變化,探討lncRNA與AVF流出道靜脈狹窄的關(guān)系。方法:選擇2017年2至6月在南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科診斷AVF失功患者再次手術(shù)的血管組織28例(實(shí)驗(yàn)組),納入標(biāo)準(zhǔn)為內(nèi)瘺使用時(shí)間≥3個(gè)月;內(nèi)瘺透析時(shí)血流量≤200 ml/min;內(nèi)瘺狹窄程度大于50%,排除有明顯血栓形成者;上肢血管超聲檢查資料完整者。對(duì)照組選自同一機(jī)構(gòu)尿毒癥患者初次行動(dòng)靜脈內(nèi)瘺術(shù)的血管組織75例,納入標(biāo)準(zhǔn)為流出道血管內(nèi)徑≥1.6 mm,且無(wú)血管狹窄或其他血管疾病者。將103個(gè)樣本采用Trizol法提取總RNA,分別選取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各4例,利用高通量測(cè)序分別檢測(cè)其lncRNA及mRNA表達(dá)譜的差異,隨后篩選出差異表達(dá)的lncRNA及mRNA,進(jìn)行聚類分析,GO功能分析、KEGG pathway分析;并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time RT-PCR,qRT-PCR)對(duì)RNA-seq結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證;最后擴(kuò)大樣本量驗(yàn)證LINC01615在動(dòng)靜脈內(nèi)瘺流出道靜脈狹窄組織中高表達(dá)。結(jié)果:與對(duì)照組相比,表達(dá)變化≥2倍并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)的lncRNA或mRNA,認(rèn)為是顯著差異表達(dá)的lncRNA或mRNA。(1)lncRNA表達(dá)變化≥2倍的共247個(gè),實(shí)驗(yàn)組表達(dá)上調(diào)≥2倍的有141個(gè),表達(dá)下調(diào)≥2倍的有106個(gè);(2)mRNA表達(dá)變化≥2倍的共1386個(gè),實(shí)驗(yàn)組表達(dá)上調(diào)≥2倍的有874個(gè),表達(dá)下調(diào)≥2倍的有512個(gè);(3)GO功能分析提示顯著差異表達(dá)的lncRNA主要參與了細(xì)胞的分化、凋亡;血管形態(tài)發(fā)生、血管發(fā)育、脈管系統(tǒng)發(fā)育等;(4)KEGG pathway分析提示差異表達(dá)的基因注釋到PI3K-AKT信號(hào)通路是最多的,其顯著性最高的是TGF-β信號(hào)通路。(5)在顯著差異表達(dá)的ncRNA中,使用qRT-PCR技術(shù)對(duì)關(guān)鍵性的9個(gè)lncRNA及7個(gè)mRNA表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證,其結(jié)果與測(cè)序一致;(6)與對(duì)照組相比,LINC01615在動(dòng)靜脈內(nèi)瘺流出道靜脈狹窄組織中高表達(dá)。結(jié)論:尿毒癥血液透析患者動(dòng)靜脈內(nèi)瘺流出道靜脈組織存在顯著差異性表達(dá)的lncRNA,這些lncRNA及某些信號(hào)通路可能在尿毒癥患者AVF流出道靜脈狹窄發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究可能為AVF流出道狹窄的發(fā)病機(jī)制的闡述奠定基礎(chǔ),并為AVF失功患者提供潛在的預(yù)防靶點(diǎn)。
【圖文】：

圖 1：HE 染色結(jié)果A：對(duì)照組血管 HE 染色×200，B：實(shí)驗(yàn)組血管 HE 染色×200，，4.2 RNA-seq 測(cè)序結(jié)果4.2.1 差異表達(dá)的 lncRNA 與 mRNA（1）與對(duì)照組相比，表達(dá)變化倍數(shù)≥2 并且差異lncRNA 或 mRNA,認(rèn)為是差異表達(dá)的 lncRNA 或 mRN數(shù)≥2 的共 247 個(gè),占所有可探測(cè)的 lncRNA 的 0.89%。141 個(gè),其中≥5 倍的有 21 個(gè);表達(dá)下調(diào)≥2 倍的有 106 mRNA 表達(dá)變化≥2 倍的共 1386 條，占所有可探測(cè)的表達(dá)上調(diào)≥2 倍的有 874 個(gè),其中≥5 倍的有 194 個(gè);表達(dá)≥5 倍的有 69 個(gè)。（2）使用 R 語(yǔ)言 ggplot2 軟件包繪制差異表達(dá)轉(zhuǎn)

第 4 章 結(jié)果火山圖可直觀看出 Fold Change≥2.0，P-value <0.05 的差異表達(dá) lncRNA 和mRNA。藍(lán)點(diǎn)表示顯著下調(diào)基因，紅點(diǎn)表示顯著上調(diào)基因，灰色表示無(wú)顯著差異表達(dá)基因。通過(guò) MA 圖可以看出轉(zhuǎn)錄本呈對(duì)稱表達(dá)，說(shuō)明表達(dá)差異不隨轉(zhuǎn)錄表達(dá)而發(fā)生偏倚。結(jié)果見(jiàn)圖 2 和圖 3。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R692.5;Q811.4

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本文編號(hào)：2678094