發(fā)布時(shí)間：2020-05-22 22:51

【摘要】：勃起功能障礙(erectile dysfunction,ED),又稱(chēng)陽(yáng)痿,是一種典型的男性性功能障礙疾病,主要以陰莖勃起的啟動(dòng)和維持困難為主要表現(xiàn),國(guó)外有研究表明,52%的40-70歲男性存在不同程度的ED,年發(fā)病率為25.9/1000。我國(guó)研究也顯示40歲以上男性勃起功能障礙患病率達(dá)40.2%,并且近年來(lái)呈高發(fā)及低齡化趨勢(shì),這可能與人們逐漸重視生活質(zhì)量的意識(shí)水平提高有關(guān),但同時(shí),隨著近年來(lái)生活水平的提高,飲食結(jié)構(gòu)的逐漸西化,生活節(jié)奏加快,肥胖、高血壓、糖尿病等逐年呈高發(fā)趨勢(shì),陰莖作為受精神和器質(zhì)性雙重影響的功能器官,ED的發(fā)病率也是逐年增加。目前研究認(rèn)為,陰莖的勃起主要通過(guò)激活NO/cGMP/PKG通路實(shí)現(xiàn),以西地那非為代表的磷酸二酯酶抑制劑通過(guò)抑制PDE5的活性,減少陰莖平滑肌細(xì)胞中cGMP的水解,以達(dá)到維持陰莖平滑肌舒張的作用。除此之外,針對(duì)NO合成受損、氧化應(yīng)激、內(nèi)皮素(endothelin,ET)及受體、RhoA/Rho途徑、神經(jīng)損傷及激素等的研究表明,這些因素并不能完全解釋勃起功能障礙發(fā)生。近幾年,有越來(lái)越多的研究表明,O-糖基化可能在ED的發(fā)生中起著重要的作用。O-糖基化作用于1984年由美國(guó)約翰霍普金斯大學(xué)G.W.Hart等最先發(fā)現(xiàn)后,由于該種糖基化形式的獨(dú)特性及功能上的重要性,一直是一個(gè)重要的研究熱點(diǎn),和磷酸化、乙�；�、泛素化等諸多翻譯后蛋白修飾過(guò)程一樣,是體內(nèi)的一種復(fù)雜而基本的生理學(xué)過(guò)程,在眾多生物學(xué)過(guò)程中扮演著重要角色,具有重要的生物學(xué)功能。它參與了一系列重要的生物學(xué)過(guò)程,如基因表達(dá)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫保護(hù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞生長(zhǎng)與分化、細(xì)胞間的黏附、蛋白質(zhì)降解以及炎癥的產(chǎn)生等。O-糖基化以類(lèi)似于磷酸化的修飾機(jī)制參與了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)翻譯、細(xì)胞應(yīng)答以及蛋白質(zhì)降解等一系列復(fù)雜的細(xì)胞活動(dòng)。本研究通過(guò)培養(yǎng)原代陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞(cavernous smooth muscle cell,CSMC),并向細(xì)胞中加入HBP通路中間產(chǎn)物GlcNAc,以明確藥物對(duì)細(xì)胞中促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)通路的影響。MAPKs通路主要包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)途徑,c-JunN-末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)途徑和p38信號(hào)傳導(dǎo)途徑。研究表明,MAPKs通路的改變對(duì)于調(diào)控陰莖勃起具有重要的生物學(xué)意義,因此,GlcNAc與陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞中MAPKs蛋白的相互作用可能對(duì)我們提高ED治療水平有新的指導(dǎo)意義。另外,本研究也在動(dòng)物水平進(jìn)行了探索,通過(guò)灌胃飼養(yǎng)性功能正常的健康SD大鼠,研究發(fā)現(xiàn),GlcNAc能顯著提高陰莖海綿體平滑肌的O-糖基化水平,但是,初步研究未發(fā)現(xiàn)其對(duì)大鼠勃起功能、海綿體平滑肌組織纖維化、性激素及代謝水平的影響同對(duì)照組相比有何不同。本實(shí)驗(yàn)的主要結(jié)果和結(jié)論如下:GlcNAc通過(guò)O-糖基化依賴(lài)性途徑抑制大鼠海綿體平滑肌細(xì)胞的MAPKs通路。成功構(gòu)建大鼠CSMC原代模型,研究發(fā)現(xiàn)GlcNAc可以在細(xì)胞內(nèi)明顯提升蛋白的總O-糖基化水平(P0.05),并且進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),其主要可以通過(guò)糖基化依賴(lài)性途徑抑制ERK和P38 MAPKs通路的磷酸化水平(P0.05),但不影響總蛋白的表達(dá)水平。GlcNAc顯著提升大鼠陰莖海綿體平滑肌的O-糖基化水平,但未發(fā)現(xiàn)其對(duì)大鼠勃起功能、CSMC纖維化、性激素及代謝功能造成明顯影響。通過(guò)IHC研究發(fā)現(xiàn),GlcNAc能顯著提升海綿體平滑肌組織O-糖基化水平(P0.05),但是Masson染色并未發(fā)現(xiàn)纖維化水平通對(duì)照組相比的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,另外,ICP/MAP研究表明,跟對(duì)照組健康大鼠相比,灌胃飼養(yǎng)GlcNAc的大鼠陰莖勃起功能有下降趨勢(shì),但結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。GlcNAc對(duì)大鼠體重和血糖改變的研究也表明同對(duì)照組差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。GlcNAc可以作為研究O-糖基化作用的有效的工具。實(shí)驗(yàn)證明,無(wú)論灌胃飼養(yǎng)還是細(xì)胞培養(yǎng),GlcNAc均能顯著提升大鼠陰莖海綿體平滑肌的O-糖基化水平(P0.05),這位我們研究O-糖基化提供了一條新的研究工具。綜上所述,GlcNAc可以作為一種新的研究O-糖基化的手段,其顯著的提高了大鼠海綿體平滑肌細(xì)胞的O-糖基化水平,并且能顯著抑制細(xì)胞的MAPKs通路的磷酸化,可以為進(jìn)一步研究影響勃起的機(jī)制提供重要的參考意義。另外,初步研究表明,GlcNAc未在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)具有影響大鼠勃起功能的作用,這與糖尿病大鼠又不同,但是我們研究也發(fā)現(xiàn)勃起功能出現(xiàn)了下降的趨勢(shì),因此,仍需要更多的相關(guān)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行證明。ED的研究以往多集中于NO/cGMP/PKG等通路,但近年來(lái)分子機(jī)制研究似乎遇到了瓶頸,為了更好的理解ED的作用機(jī)制,此靶點(diǎn)可能是我們提高ED治療水平提供新的思路及方向。
【圖文】：

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文糖(β-D-Nacetylglucosamine, GlcNAc)是一種重要的中間底物。以往的糖基主要通過(guò)增加 HBP 底物供應(yīng)或 OGT/OGA 抑制來(lái)實(shí)現(xiàn)，而底物主要由增加葡萄葡萄糖供應(yīng)[13, 14]，以往的研究表明[15, 16]，HBP 通路中 GlcNAc-6-P 形成之前多為可逆反應(yīng)，如圖 1 所示，，

高倍顯微鏡觀察原代陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞爬出組織塊
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R698

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃壯霖;賴(lài)貝;李岳亮;梁一;;免疫細(xì)胞中O-GlcNAc修飾研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù);2018年06期

2 李杰;阿地力江·托乎提;王勇;余小林;王雪梅;馬麗;;小檗堿對(duì)高糖誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷中蛋白O-GlcNAc修飾和氧化應(yīng)激的影響[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2019年03期

3 Hao NIE;Wen YI;;O-GlcNAc修飾與疾病病理學(xué)的聯(lián)系（英文）[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2019年05期

4 ;種康院士團(tuán)隊(duì)揭示植物O-GlcNAc糖基化介導(dǎo)表觀遺傳修飾調(diào)控發(fā)育的新機(jī)制[J];蔬菜;2018年10期

5 孫冊(cè);;Asn-連接的寡糖與腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移的相關(guān)性[J];生命的化學(xué)(中國(guó)生物化學(xué)會(huì)通訊);1989年05期

6 李楠;李忻琳;韋立紅;林忠;;蛋白質(zhì)O-GlcNAc糖基化修飾的生物合成途徑與檢測(cè)方法[J];中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志(電子版);2018年06期

7 張煒琳;王鑫怡;嚴(yán)方;;蛋白質(zhì)O-GlcNAc修飾與腫瘤糖代謝關(guān)系的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2019年02期

8 Mitsutaka Ogawa;Koichi Furukawa;Tetsuya Okajima;;Extracellular O-linked β-N-acetylglucosamine: Its biology and relationship to human disease[J];World Journal of Biological Chemistry;2014年02期

9 高婧;施美霞;寸鏡芬;趙舒融;黃春榮;許艷華;;O-GlcNAc修飾調(diào)控軟骨及成骨分化的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2018年03期

10 于田;金東日;;新型N-糖鏈?zhǔn)荏w氘代MPDPZ-Boc-Asn-GlcNAc的合成及其受體性能[J];延邊大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2015年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 邵文亞;劉洪濤;張麗華;李煌元;;肥胖小鼠肝臟O-GlcNAc糖基化蛋白質(zhì)組定性定量分析[A];2018環(huán)境與健康學(xué)術(shù)會(huì)議--精準(zhǔn)環(huán)境健康：跨學(xué)科合作的挑戰(zhàn)論文匯編[C];2018年

2 陳興;;O-GlcNAc動(dòng)態(tài)糖基化的化學(xué)標(biāo)記和定量分析[A];第十屆全國(guó)化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議報(bào)告摘要集[C];2017年

3 Wei Qin;Pinou Lv;Xinqi Fan;Baiyi Quan;Yuntao Zhu;Ke Qin;Ying Chen;Chu Wang;Xing Chen;;Quantitative time-resolved chemoproteomics reveals stable O-GlcNAc regulates box C/D snoRNP biogenesis[A];第十屆全國(guó)化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集（墻報(bào)）[C];2017年

4 ;A novel coupled-enzyme method for O-linked GIcNAc transferase activity assay[A];第六屆全國(guó)化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

5 劉華東;李艷梅;;UDP-GIcNAc轉(zhuǎn)移酶(OGT)的結(jié)構(gòu)及作用機(jī)理[A];第七屆全國(guó)酶學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2004年

6 王s

本文編號(hào)：2676736