發(fā)布時(shí)間：2020-05-22 21:48

【摘要】：目前,被國(guó)際輸血協(xié)會(huì)(ISBT)確認(rèn)的29個(gè)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中最具多態(tài)性和復(fù)雜性的血型系統(tǒng)即是Rh血型系統(tǒng)。傳統(tǒng)上,認(rèn)為Rh血型系統(tǒng)在臨床中的重要性?xún)H次于ABO血型系統(tǒng)。RhD是Rh血型系統(tǒng)中最為重要的血型表型,根據(jù)紅細(xì)胞表面是否含有D抗原將Rh血型分為Rh陽(yáng)性和Rh陰性。RhD血型是腎移植術(shù)前的必備檢測(cè)項(xiàng)目。D抗原在大多數(shù)個(gè)體中是表達(dá)的,有一部分個(gè)體的紅細(xì)胞與抗D血清反應(yīng)較弱,提示D抗原在紅細(xì)胞表面表達(dá)異常,這其中包括弱D(weak D)、部分D(partial D)、放散D(Del)表現(xiàn)型等,而這些D抗原變異型的血清學(xué)初篩結(jié)果部分為陰性,這種RhD假陰性的存在對(duì)腎移植供受者產(chǎn)生了潛在的威脅。2012年1月1日起,歐美日均已實(shí)行對(duì)所有RhD血清學(xué)陰性的供受者進(jìn)行RHD基因檢測(cè),而目前在我國(guó)腎移植中RhD血型的確定基本為血清學(xué)檢測(cè)。RhD假陰性變異型是影響中國(guó)腎移植長(zhǎng)期生存未被重視的一個(gè)領(lǐng)域。為此,本研究對(duì)經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)為RhD陰性的潛在腎移植受者103例血液樣本行定量PCR檢測(cè)RHD10個(gè)外顯子,分析D抗原變異型(弱D、部分D、放散D表現(xiàn)型)對(duì)臨床腎移植供受選擇的影響,同時(shí)分析RhD血型對(duì)腎移植術(shù)后的相關(guān)影響。目的:探討我國(guó)腎移植中RhD陰性血型對(duì)腎移植供受者選擇及腎移植術(shù)后的影響。方法:收集2006年1月-2016年1月我科等候腎移植的患者中經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)為RhD-Neg的血樣103例,采用分子生物學(xué)方法(定量PCR-測(cè)序技術(shù))進(jìn)行RHD基因分型。結(jié)果:103例血樣中,RhD真陰性(即10個(gè)外顯子全部缺失)56例(占54.5%),RhD假陰性(即RhD陽(yáng)性,但是10個(gè)外顯子中有部分缺失、重復(fù)、錯(cuò)義突變)47例(占45.6%)。在47例RhD假陰性中,放散D(Del)33 例(占70.2%)、部分 D(partialD)占 13例(占27.7%),弱D(weak D)1例(占2.1%)。血清學(xué)與分子生物學(xué)對(duì)RhD陰性識(shí)別的差異呈統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P0.001)。結(jié)論:血清學(xué)檢測(cè)出的RhD陰性中有45.6%實(shí)際為RhD陽(yáng)性變異體,說(shuō)明血清學(xué)技術(shù)對(duì)識(shí)別RhD陰性呈較高錯(cuò)誤率。由此,在臨床腎移植中,會(huì)導(dǎo)致RhD變異體的受者喪失腎臟移植替代治療的機(jī)會(huì);RhD變異體的供者移植給RhD真陰性的受者后可能發(fā)生不明原因的排斥反應(yīng)、移植腎功能恢復(fù)延遲(DGF)、移植物存活時(shí)間縮短等不良愈后。本研究證明,利用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行受者和供者RhD血型基因分型,對(duì)于精確腎移植的進(jìn)步具有重要的臨床意義。
【圖文】：

１．原理：定量ＰＣＲ方法逡逑本方法采用多重ＰＣＲ技術(shù)，擴(kuò)增所選擇的的ＲＨＤ基因外顯子突變區(qū)域，逡逑結(jié)合新一代半導(dǎo)體測(cè)序平臺(tái)ＢＥＳ邋４０００進(jìn)行檢測(cè)。如圖２所示，該半導(dǎo)體測(cè)序技逡逑術(shù)使用了一種布滿(mǎn)小孔的高密度半導(dǎo)體芯片，一個(gè)小孔就是一個(gè)測(cè)序反應(yīng)池。逡逑在每個(gè)反應(yīng)池中，ＤＮＡ聚合酶以單鏈ＤＮＡ為模板，按堿基互補(bǔ)原理，合成互逡逑補(bǔ)的ＤＮＡ鏈，當(dāng)ＤＮＡ聚合酶把核苷酸聚合到延伸中的ＤＮＡ鏈上時(shí)，會(huì)釋放逡逑出１個(gè)氫離子，反應(yīng)池中的ＰＨ發(fā)生改變，位于池下的離子感受器感受到Ｈ＋離逡逑子信號(hào)，Ｈ＋離子信號(hào)再直接轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號(hào)，從而讀出ＤＮＡ序列。新一代半逡逑導(dǎo)體測(cè)序芯片的每個(gè)微孔里僅能容納一個(gè)微球，微球表面含有大約１００萬(wàn)個(gè)逡逑ＤＮＡ分子拷貝。測(cè)序時(shí)１個(gè)個(gè)核苷酸分子連續(xù)流過(guò)芯片微孔，如果核苷酸與特逡逑定微孔中的ＤＮＡ分子互補(bǔ)

邐碩士學(xué)位論文邐逡逑１１）邋程序運(yùn)行結(jié)束后７２小時(shí)內(nèi)，返回主菜單，進(jìn)行水洗。如超過(guò)７２小逡逑時(shí)，則對(duì)儀器進(jìn)行氯洗再進(jìn)行水洗。水洗完畢，，在主菜單上關(guān)儀器，在放ｄＮＴＰ逡逑孔上套上管子防塵。如長(zhǎng)時(shí)間不使用，關(guān)閉氮?dú)馄繗忾y。逡逑結(jié)果：逡逑Ｄ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R699.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2676663