【摘要】：目前,被國際輸血協(xié)會(ISBT)確認的29個紅細胞血型系統(tǒng)中最具多態(tài)性和復(fù)雜性的血型系統(tǒng)即是Rh血型系統(tǒng)。傳統(tǒng)上,認為Rh血型系統(tǒng)在臨床中的重要性僅次于ABO血型系統(tǒng)。RhD是Rh血型系統(tǒng)中最為重要的血型表型,根據(jù)紅細胞表面是否含有D抗原將Rh血型分為Rh陽性和Rh陰性。RhD血型是腎移植術(shù)前的必備檢測項目。D抗原在大多數(shù)個體中是表達的,有一部分個體的紅細胞與抗D血清反應(yīng)較弱,提示D抗原在紅細胞表面表達異常,這其中包括弱D(weak D)、部分D(partial D)、放散D(Del)表現(xiàn)型等,而這些D抗原變異型的血清學(xué)初篩結(jié)果部分為陰性,這種RhD假陰性的存在對腎移植供受者產(chǎn)生了潛在的威脅。2012年1月1日起,歐美日均已實行對所有RhD血清學(xué)陰性的供受者進行RHD基因檢測,而目前在我國腎移植中RhD血型的確定基本為血清學(xué)檢測。RhD假陰性變異型是影響中國腎移植長期生存未被重視的一個領(lǐng)域。為此,本研究對經(jīng)血清學(xué)檢測為RhD陰性的潛在腎移植受者103例血液樣本行定量PCR檢測RHD10個外顯子,分析D抗原變異型(弱D、部分D、放散D表現(xiàn)型)對臨床腎移植供受選擇的影響,同時分析RhD血型對腎移植術(shù)后的相關(guān)影響。目的:探討我國腎移植中RhD陰性血型對腎移植供受者選擇及腎移植術(shù)后的影響。方法:收集2006年1月-2016年1月我科等候腎移植的患者中經(jīng)血清學(xué)檢測為RhD-Neg的血樣103例,采用分子生物學(xué)方法(定量PCR-測序技術(shù))進行RHD基因分型。結(jié)果:103例血樣中,RhD真陰性(即10個外顯子全部缺失)56例(占54.5%),RhD假陰性(即RhD陽性,但是10個外顯子中有部分缺失、重復(fù)、錯義突變)47例(占45.6%)。在47例RhD假陰性中,放散D(Del)33 例(占70.2%)、部分 D(partialD)占 13例(占27.7%),弱D(weak D)1例(占2.1%)。血清學(xué)與分子生物學(xué)對RhD陰性識別的差異呈統(tǒng)計學(xué)顯著性(P0.001)。結(jié)論:血清學(xué)檢測出的RhD陰性中有45.6%實際為RhD陽性變異體,說明血清學(xué)技術(shù)對識別RhD陰性呈較高錯誤率。由此,在臨床腎移植中,會導(dǎo)致RhD變異體的受者喪失腎臟移植替代治療的機會;RhD變異體的供者移植給RhD真陰性的受者后可能發(fā)生不明原因的排斥反應(yīng)、移植腎功能恢復(fù)延遲(DGF)、移植物存活時間縮短等不良愈后。本研究證明,利用分子生物學(xué)技術(shù)進行受者和供者RhD血型基因分型,對于精確腎移植的進步具有重要的臨床意義。
【圖文】：

１．原理：定量ＰＣＲ方法逡逑本方法采用多重ＰＣＲ技術(shù)，擴增所選擇的的ＲＨＤ基因外顯子突變區(qū)域，逡逑結(jié)合新一代半導(dǎo)體測序平臺ＢＥＳ邋４０００進行檢測。如圖２所示，該半導(dǎo)體測序技逡逑術(shù)使用了一種布滿小孔的高密度半導(dǎo)體芯片，一個小孔就是一個測序反應(yīng)池。逡逑在每個反應(yīng)池中，ＤＮＡ聚合酶以單鏈ＤＮＡ為模板，按堿基互補原理，合成互逡逑補的ＤＮＡ鏈，當ＤＮＡ聚合酶把核苷酸聚合到延伸中的ＤＮＡ鏈上時，會釋放逡逑出１個氫離子，反應(yīng)池中的ＰＨ發(fā)生改變，位于池下的離子感受器感受到Ｈ＋離逡逑子信號，Ｈ＋離子信號再直接轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號，從而讀出ＤＮＡ序列。新一代半逡逑導(dǎo)體測序芯片的每個微孔里僅能容納一個微球，微球表面含有大約１００萬個逡逑ＤＮＡ分子拷貝。測序時１個個核苷酸分子連續(xù)流過芯片微孔，如果核苷酸與特逡逑定微孔中的ＤＮＡ分子互補

邐碩士學(xué)位論文邐逡逑１１）邋程序運行結(jié)束后７２小時內(nèi)，返回主菜單，進行水洗。如超過７２小逡逑時，則對儀器進行氯洗再進行水洗。水洗完畢，，在主菜單上關(guān)儀器，在放ｄＮＴＰ逡逑孔上套上管子防塵。如長時間不使用，關(guān)閉氮氣瓶氣閥。逡逑結(jié)果：逡逑Ｄ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R699.2

【參考文獻】

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本文編號：2676663