【摘要】：研究背景慢性腎臟病(Chronic Kidney Disease,CKD)患者體內(nèi)常存在脂代謝異常,且其在加重慢性腎臟病進(jìn)展中起著重要作用。腎小球足細(xì)胞在維持腎小球?yàn)V過屏障的正常生理功能當(dāng)中,發(fā)揮了非常重要作用。足細(xì)胞的損傷、脫落和凋亡是高脂導(dǎo)致腎臟損害的重要機(jī)制。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是通過激活未折疊蛋白反應(yīng),繼而激活轉(zhuǎn)錄激活因子4(activating transcription factor-4,ATF4)、轉(zhuǎn)錄激活因子 6(activating transcription factor-6,ATF6)和,肌醇需求激酶-1(inositolrequiring enzyme-1,IRE1)的表達(dá)上調(diào),從而抑制蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄翻譯,同時(shí)促進(jìn)未折疊或錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)的正確折疊,從而維持細(xì)胞的穩(wěn)態(tài),增加細(xì)胞的抗損傷能力。若內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激持續(xù)過度激活,則會(huì)啟動(dòng)細(xì)胞凋亡。既往有研究發(fā)現(xiàn),ATF4可以從轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)Parkin的表達(dá)。而Parkin與線粒體自噬以及細(xì)胞凋亡的關(guān)系密切。但是ATF4是是否可通過調(diào)節(jié)Parkin的表達(dá)在高脂誘導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞凋亡中發(fā)揮保護(hù)作用仍不清楚,有待于進(jìn)一步研究。目的本文研究了 ATF4通過調(diào)節(jié)Parkin在棕櫚酸誘導(dǎo)引起的腎小球足細(xì)胞凋亡中的作用,以闡明內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在高脂誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡中的作用,為臨床防治脂質(zhì)腎毒性提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論支持。方法20只雄性SD大鼠隨機(jī)分為兩組:分別為普通飼料喂養(yǎng)的普通飲食組(N=10)及高脂飼料喂養(yǎng)的高脂飲食組(N=10),喂養(yǎng)12周后,處死動(dòng)物,取其血清及腎臟標(biāo)本,送檢驗(yàn)科檢測(cè)血清膽固醇及甘油三酯水平。采用油紅“O”染色法,觀察腎臟組織內(nèi)脂質(zhì)集聚的情況。在體外培養(yǎng)小鼠足細(xì)胞株,待其分化完全后,用不同濃度PA刺激。采用Western印跡檢測(cè)腎組織及PA誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-caspase3表達(dá),并采用Tunel染色法、流式細(xì)胞術(shù)分別觀察腎臟組織及PA誘導(dǎo)的足細(xì)胞的凋亡的情況;采用免疫組化和Western印跡的方法,觀察動(dòng)物腎臟組織及PA誘導(dǎo)的足細(xì)胞Parkin及ATF4的表達(dá)。采用Parkin過表達(dá)質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染足細(xì)胞,或shATF4腺病毒體外轉(zhuǎn)染足細(xì)胞,觀察其對(duì)PA誘導(dǎo)的足細(xì)胞Parkin及其細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果(1)高脂飲食組血清甘油三酯及膽固醇水平顯著高于普通飲食組。此外,高脂飲食組腎小球有輕微的系膜增生,腎小管上皮細(xì)胞有脫落、壞死和凋亡、腎小管萎縮;高脂飲食組腎臟脂質(zhì)集聚增多,細(xì)胞凋亡增加。(2)在一定濃度范圍內(nèi),PA可增加足細(xì)胞的凋亡和Cleaved-caspase3蛋白的表達(dá),且呈濃度依耐性。(3)與普通飲食組相比,高脂飲食組動(dòng)物腎臟Parkin的表達(dá)明顯升高。同時(shí),PA在一定濃度范圍內(nèi)可呈濃度依賴性誘導(dǎo)足細(xì)胞Parkin的表達(dá)升高。(4)Parkin過表達(dá)質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染足細(xì)胞后,可明顯減少PA誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡。(5)與普通飲食組相比,高脂飲食組動(dòng)物腎臟ATF4的表達(dá)明顯升高。同時(shí),PA在一定濃度范圍內(nèi)可呈濃度依賴性誘導(dǎo)足細(xì)胞ATF4的表達(dá)升高。(6)采用shATF4腺病毒轉(zhuǎn)染足細(xì)胞后,足細(xì)胞內(nèi)Parkin的表達(dá)下降,同時(shí)PA刺激的Cleaved-caspase3的表達(dá)升高及其細(xì)胞凋亡更為明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論(1)高脂可誘導(dǎo)腎臟損傷、脂質(zhì)集聚、ATF4和Parkin表達(dá)升高以及凋亡增多。(2)PA可誘導(dǎo)足細(xì)胞ATF4和Parkin表達(dá)升高以及凋亡增多。(3)ATF4可通過維持Parkin的表達(dá)從而改善PA誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

氧化應(yīng)激中發(fā)揮了重要作用。但是Ｐａｒｋｉｎ是否參與高脂誘導(dǎo)的腎臟組織和足細(xì)胞逡逑凋亡的發(fā)生，仍未見報(bào)道。我們采用免疫組織化學(xué)染色和Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ，發(fā)現(xiàn)高脂逡逑飲食喂養(yǎng)的大鼠腎臟Ｐａｒｋｉｎ的表達(dá)較普通飲食組明顯升高（尸＜０．０５）（見圖３．３Ａ、逡逑Ｂ邋及邋Ｃ、Ｄ）0逡逑同樣，在體外實(shí)驗(yàn)中，我們采用ＰＡ刺激腎小球足細(xì)胞２４小時(shí)，免疫熒光染逡逑色技術(shù)發(fā)現(xiàn)，，與正常對(duì)照組相比，ＰＡ組足細(xì)胞Ｐａｒｋｉｎ的表達(dá)較正常對(duì)照組升高逡逑２１逡逑

逡逑（尸＜０．０５）（見圖３．３Ｅ、Ｆ）；進(jìn)一步采用Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)ＰＡ在一定濃逡逑度范圍內(nèi)可呈濃度依賴性地誘導(dǎo)足細(xì)胞Ｐａｒｋｉｎ表達(dá)升高（Ｐ＜０．０５）（見圖３．３Ｇ、Ｈ）。逡逑Ａ邐ＮＣＤ邐ＨＦＤ邐Ｂ逡逑ｇ邋ｈ邐＿逡逑一邐Ｉｓ－邐±逡逑｜邐ｉ－邐Ｉ逡逑－邐ｉＬＪＬ逡逑Ｃ邐Ｄ邋Ｃ邋２０－逡逑邐ＮＣＤ邐ＨＦＤ邐邋｜邋１－５－逡逑—二二二二Ｉ邐ｉ邐你邐＿邐＿逡逑ｐ－ａｃｔ邋叫—￡邐Ｓｉ邐ＳＳｆｔＷ逡逑ｉ＾曹懌■曹r>ｉ邐ｉ－５渞逡逑ｉ。N灥＿＿圈＿逡逑Ｅ邋＾＾ＤＡＰ＾＾＾＾Ｐａｒｋｉｒ＾＾＾ｌＶｌｅｒｇ＾＾＾邋ｐ邐，邐爹逡逑ｃｔｒ＾Ｈ＾ｍ邋ｉ逡逑ｉ邋２－邐１逡逑ｉ邋Ｊｐ邐Ｉ，逡逑Ｇ邐Ｈ邋＝邋２５ｌ逡逑邐ＰＡ（，ｏｌ／Ｌ＞邐邋！邋，0．邐ｌ逡逑＿邋０邐＿－Ｊ５０邐３００邐Ｉ邋１５．忐－｜逡逑Ｐａｒ１邋一邋口邋Ｓ：ｎｌｌ逡逑Ｐ－ａｃｔｉｎ邐１邋Ｊ１邋ｉ邋Ｗ邋ＩＩＩ逡逑邐Ｉ邐。屮＃＃逡逑ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｐａｌｍｉｔｉｃ邋ａｃｉｄ（（ｉｍｏｌ／Ｌ）逡逑圖３．３高脂飲食及ＰＡ誘導(dǎo)Ｐａｒｋｉｎ表達(dá)增加逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３．３邋Ｈｉｇｈ邋ｆａｔ邋ｄｉｅｔ邋ａｎｄ邋ｐａｌｍｉｔｉｃ邋ａｃｉｄ邋ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ邋ｏｆ邋Ｐａｒｋｉｎ逡逑高脂飲食喂養(yǎng)ＳＤ大鼠１２周。ＮＣＤ：普通飲食喂養(yǎng)大鼠組（Ｎｏｒｍａｌ邋ｃｈｏｗ邋ｄｉｅｔ）；逡逑ＨＦＤ組：高脂飲食喂養(yǎng)大鼠組（Ｈｉｇｈ邋ｆａｔ邋ｄｉｅｔ）。（Ａ）懫用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)大逡逑鼠腎臟組織Ｐａｒｋｉｎ的表達(dá)（４０0ｘ）；邋（Ｂ）對(duì)Ａ圖進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R692

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 潘陽彬;鄭世祥;柯鴻婷;丁國華;萬建新;;花生四烯酸在誘導(dǎo)人腎小球足細(xì)胞凋亡中的作用[J];中華高血壓雜志;2017年11期

2 黃松明;張愛華;丁桂霞;費(fèi)莉;郭梅;潘曉勤;陳榮華;;過氧化物酶體增殖物活化受體γ激動(dòng)劑減輕血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞損傷作用[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2007年22期

3 陶于洪;王亞妹;彭文珍;;大鼠腎小球足細(xì)胞的原代培養(yǎng)與鑒定[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年06期

4 林海燕;鮑溪荷;徐將;葉山東;;α-硫辛酸對(duì)2型糖尿病患者氧化應(yīng)激及尿腎小球足細(xì)胞標(biāo)記蛋白排泄的影響[J];中國糖尿病雜志;2014年11期

5 沙玉根,張愛華;腎小球足細(xì)胞生物學(xué)研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).泌尿系統(tǒng)分冊(cè);2004年01期

6 肖家誠,Manfred Wehrmann,Peter Ruck,Edwin Kaiserling,Burkhard Bultmann;腎小球足細(xì)胞損傷與糖尿病性腎病相關(guān)性研究[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2002年01期

7 張兆洲;戴恩來;楊靜;薛國忠;張杰;;大鼠腎小球足細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定[J];甘肅中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2016年06期

8 侯海晶;王立新;楊霓芝;;三芪口服液對(duì)糖尿病腎病大鼠腎小球足細(xì)胞及其蛋白表達(dá)的影響[J];湖北中醫(yī)雜志;2012年06期

9 Letavernier E;Bruneval P;Vandermeersch S;季曙明;;西羅莫司對(duì)維持腎小球足細(xì)胞完整性調(diào)節(jié)途徑的影響[J];中華移植雜志(電子版);2009年03期

10 姚宗浠;楊增;;腎小球足細(xì)胞損傷與糖尿病腎病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];中國自然醫(yī)學(xué)雜志;2010年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張瑜;周建華;;乙肝病毒相關(guān)性腎炎腎小球足細(xì)胞病變機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

2 楊汝春;朱曉玲;張華琴;湯絢麗;李衛(wèi)冬;;從“風(fēng)濕”論治對(duì)腎小球足細(xì)胞表型的影響[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腎臟疾病專業(yè)委員會(huì)2015年學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2015年

3 朱春華;黃松明;袁楊剛;鮑華英;張愛華;;過氧化物酶體增殖物活化受體γ減輕腎小球足細(xì)胞損傷的機(jī)制[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

4 李月紅;黃海長(zhǎng);王素霞;鄒萬忠;章友康;;實(shí)驗(yàn)性局灶節(jié)段性腎小球硬化癥大鼠腎小球足細(xì)胞脫落及其意義[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

5 朱春華;張愛華;黃松明;袁楊剛;陳榮華;;羅格列酮對(duì)醛固酮誘導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

6 趙敏;白咪;丁桂霞;黃松明;張愛華;;PGC-1α阻斷醛固酮誘導(dǎo)腎小球足細(xì)胞損傷的機(jī)制研究[A];第十三屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會(huì)議暨2016年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2016年

7 王文靜;毛建華;;MY01E過表達(dá)后對(duì)腎小球足細(xì)胞的形態(tài)及功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2012年

8 王文靜;毛建華;;MYO1E過表達(dá)后對(duì)腎小球足細(xì)胞的形態(tài)及功能的影響[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

9 孫亮亮;石勇銓;;通絡(luò)方劑對(duì)糖尿病大鼠腎小球足細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制[A];5TH全國中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝病學(xué)術(shù)大會(huì)暨糖尿病論壇論文集[C];2012年

10 李國賢;陳蘭;郭漢城;;腎小球腎炎腎小球足細(xì)胞脫落與腎組織鈉氫交換調(diào)節(jié)因子2表達(dá)的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 雷鳳英;全反式維甲酸對(duì)體外培養(yǎng)阿霉素致腎小球足細(xì)胞損傷的作用及其分子機(jī)制[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

2 張瑜;乙肝病毒相關(guān)性腎炎腎小球足細(xì)胞病變機(jī)制的研究[D];華中科技大學(xué);2010年

3 孫亮亮;氧化應(yīng)激損傷肥胖、糖尿病大鼠腎小球足細(xì)胞的機(jī)制及藥物干預(yù)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

4 張紅霞;腎小球足細(xì)胞UCH-L1的調(diào)控機(jī)制及其在腎炎中表達(dá)的意義[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

5 李建飛;Sp1在高糖誘導(dǎo)腎小球足細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2017年

6 袁楊剛;線粒體功能障礙在腎小球足細(xì)胞早期損傷中作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 吳s

本文編號(hào)：2673768