【摘要】：目的:急性腎損傷(AKI)慢性化轉(zhuǎn)歸是影響患者遠(yuǎn)期預(yù)后的關(guān)鍵因素,也是腎臟病領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題。本研究從生物信息學(xué)、分子生物學(xué)和臨床回顧性研究三個(gè)角度探討AKI后慢性化轉(zhuǎn)歸過(guò)程中的機(jī)制。研究方法:在公共基因芯片數(shù)據(jù)庫(kù)NCBI GEO中搜集AKI和CKD相關(guān)樣本,使用WGCNA對(duì)表達(dá)差異基因進(jìn)行基因共表達(dá)分析,識(shí)別與CKD發(fā)生相關(guān)性最高的樞紐基因,并獲得富含半胱氨酸蛋白61(CCN1)與其他樞紐基因的相關(guān)程度。構(gòu)建大鼠AKI后腎纖維化模型,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白印跡法分別檢測(cè)大鼠腎組織中CCN1及上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)基因表達(dá)。構(gòu)建缺氧復(fù)氧損傷細(xì)胞模型及CCN1(D125A)突變體細(xì)胞系并利用si RNA、過(guò)表達(dá)質(zhì)粒等技術(shù)研究CCN1(D125A)對(duì)EMT的影響。最后本研究共納入71041名住院患者,隨訪時(shí)間為5-63個(gè)月并觀察患者住院期間腎損傷與預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果:我們分析了公共數(shù)據(jù)庫(kù)中CKD的數(shù)據(jù),結(jié)果顯示CCN1基因在高血壓腎病、微小病變性腎病、膜性腎病、狼瘡性腎炎、局灶階段性腎小球硬化腎小球及腎間質(zhì)中表達(dá)均降低;基因共表達(dá)分析結(jié)果顯示,CCN1基因?yàn)镃KD發(fā)生的樞紐基因,并與MAFF、JUN、KLF6、ATF3、JUNB高度相關(guān)。隨后,我們構(gòu)建了大鼠缺血再灌注(I/R)模型,結(jié)果顯示CCN1主要在腎小管上皮細(xì)胞中表達(dá),并在I/R后2h上調(diào)且持續(xù)至7天。在缺氧復(fù)氧細(xì)胞模型中,CCN1和CCN1(D125A)過(guò)表達(dá)可以下調(diào)缺氧復(fù)氧早期炎性因子、凋亡相關(guān)基因,從而緩解細(xì)胞損傷;相反,CCN1表達(dá)抑制會(huì)加重細(xì)胞損傷。在TGF-β誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞EMT模型中,CCN1過(guò)表達(dá)可以上調(diào)α-SMA、Vimentin、Col3α1和Snail,下調(diào)E-cadherin,從而加重TGF-β誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞EMT;相反,CCN1表達(dá)抑制會(huì)緩解EMT,且CCN1(D125A)同樣可以緩解腎小管上皮EMT,證明CCN1(D125A)可以緩解TGF-β誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞EMT。我們進(jìn)一步采集了臨床數(shù)據(jù),研究AKI與CKD的關(guān)系,結(jié)果顯示共有16098例(22.66%)患者出現(xiàn)腎功能損害,其中5895例(8.30%)一過(guò)性AKI患者,4580例(6.44%)亞急性AKI患者,5623例(7.91%)持續(xù)性AKI患者。持續(xù)性AKI患者具有較高的住院死亡率(16.59%),而一過(guò)性AKI(3.82%)和亞急性AKI(2.12%)死亡率較低。持續(xù)性AKI進(jìn)展為CKD的比例高達(dá)8.95%,相比亞急性腎臟病(AKD)為7.29%,而短暫性AKI患者為5.48%(P0.05)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),腎功能損害與長(zhǎng)期存活之間存在密切關(guān)聯(lián),且死亡風(fēng)險(xiǎn)與腎損傷等級(jí)呈現(xiàn)比例變化(P趨勢(shì)0.05),其中持續(xù)性AKI的死亡風(fēng)險(xiǎn)(HR 4.51,4.32-4.71,P0.05)比亞急性AKD(HR 2.25,2.13-2.39,P0.05)和短暫性AKI(HR 1.18,1.09-1.26,P0.05)死亡風(fēng)險(xiǎn)高。結(jié)論:CCN1參與了急性腎損傷向慢性腎臟病進(jìn)展的過(guò)程,且CCN1(D125A)可能作為腎纖維化的潛在治療靶點(diǎn)。
【圖文】：

CCN1基因在CKD腎小球中的相對(duì)表達(dá)

5圖 2 CCN1 基因在 CKD 腎間質(zhì)中的相對(duì)表達(dá) CCN1 基因在慢性腎病腎小球及間質(zhì)中的差異型腎間質(zhì) 腎P 值 FDR LogFC P 值 F <0.001 <0.001 -1.504 <0.001 <0 <0.001 <0.001 -1.970 <0.001 <0 <0.001 <0.001 -1.281 0.007 0 <0.001 0.001 -1.544 0.080 0 <0.001 <0.001 -0.997 <0.001 0S 0.005 0.030 -0.848 <0.001 0
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R692.5

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本文編號(hào)：2669109