【摘要】：目的:全球范圍內,每年有將近150000人死于膀胱癌。目前,針對進展期膀胱,主要有內腔鏡和開放手術、局部或系統(tǒng)性免疫治療、放化療等治療方案,盡管這些治療策略已經改善了治療效果并延長了膀胱癌患者的生存期以及生活治療,但該疾病仍然無法完全治愈而且還要具有高復發(fā)風險,并治療預后均不太理想。近些年來學者們發(fā)現(xiàn),有一群未或低分化的膀胱腫瘤細胞,他們稱之為膀胱腫瘤干細胞,他們認為腫瘤的復發(fā)與不良預后與膀胱腫瘤干細胞有關。現(xiàn)如今已有許多關于膀胱腫瘤干細胞分子標志物的研究被發(fā)表,CD44、Ck5、CD47、ALDH等分子被認為是腫瘤干細胞的分子標志物,科學家們基于這些分子標志物的研究,為膀胱癌的治療提供新的研究方向與方法。將舊藥重新用于新用途,例如在針對腫瘤的臨床治療中使用舊藥去達到抑癌效果是一個非常有吸引力的,令人興奮的領域。雙硫侖就是類似的一個很好的例子。雙硫侖由于其獨特的已知特性,低成本,低副作用和對不同癌癥的高選擇性以及與其他藥物的協(xié)同活性而被重新用作潛在的抗癌藥物。而且雙硫侖抑制腫瘤細胞的機制之一就是作為ALDH的抑制劑。本次實驗探討雙硫侖對膀胱腫瘤中ALDH1A1表達的影響及其增強腫瘤細胞對順鉑敏感性的潛在機制。方法:將實驗分為對照組和雙硫侖(DSF)組。檢索相關數(shù)據(jù)庫,查詢ALDH1A1膀胱癌標本中的表達情況。提取EJ細胞與SV-HUC-1細胞的mRNA,檢測兩者ALDH1A1的表達情況。采用克隆形成實驗檢測DSF對膀胱腫瘤細胞成團能力的影響。提取DSF干預組與對照組膀胱腫瘤細胞RNA,采用實時熒光定量PCR檢測DSF處理后,腫瘤細胞內ALDH1A1及其他干性相關基因的表達差異。通過劃痕實驗檢測DSF干預后0H以及24H時,DSF對膀胱腫瘤細胞遷移能力的影響。流式周期檢測DSF干預后對于膀胱腫瘤細胞周期的影響。利用CCK8法以及流式檢測細胞凋亡方法檢測DSF對腫瘤細胞順鉑敏感性的影響。結果:DSF組膀胱腫瘤細胞的克隆成球數(shù)目明顯低于對照組。對照組和DSF組克隆形成后,用結晶紫將球團染色,溶解結晶紫后,兩組溶液570nm的吸光度分別為0.884±0.022和0.490±0.027,差異有明顯統(tǒng)計學意義(P0.001)。與正常尿路上皮細胞SV-HUC-1相比,膀胱癌EJ細胞中ALDH1A1的表達量明顯增高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.001)。與對照組相比,DSF組中細胞的ALDH1A1的表達水平明顯下調,NOTCH2,SHH等干細胞基因的表達亦有下調,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與對照組相比,DSF干預后的膀胱腫瘤細胞的遷移能力明顯下降。與對照組相比,DSF干預后的膀胱腫瘤細胞處于G1期的數(shù)量明顯增加,而S期細胞數(shù)量下降。順鉑聯(lián)合DSF與單用順鉑兩種方法分別對膀胱腫瘤細胞干預24h,測得順鉑的中位殺細胞濃度分別為8umol和32umol,差異亦具有統(tǒng)計學意義(P0.05),說明在DSF干預后的膀胱腫瘤細胞對順鉑變得敏感。結論:膀胱癌組織較癌旁組織有較高的ALDH1A1表達。膀胱癌細胞ALDH1A1表達高于正常尿路上皮細胞。雙硫侖作為ALDH的抑制劑,可通過降低膀胱腫瘤細胞內ALDH1A1的表達,影響膀胱腫瘤細胞的遷移、克隆形成能力以及影響細胞周期等表型,并且增強了膀胱腫瘤細胞對于順鉑的敏感性。
【圖文】：

蘭州大學碩士學位論文 雙硫侖抑制膀胱腫瘤干細胞 ALDH1A1 的表達并增強其順鉑敏感性第三章 結果3.1 膀胱癌中 ALDH1A1 表達情況肌肉浸潤性膀胱癌內 ALDH1A1 的表達高于非肌肉浸潤性膀胱癌，腫瘤的ALDH1A1 的表達水平亦與患者的總體生存率相關：通過檢索 Oncomine（https://www.oncomine.org）和 GEPIA 等數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)，肌肉浸潤性膀胱癌內ALDH1A1 基因的表達高于非肌肉浸潤性膀胱癌（圖 1a）； ALDH1A1 表達水平較高的膀胱癌患者，其總體生存率降低（圖 1b）。

2 膀胱癌 EJ 細胞與正常尿路上皮細胞中 ALDH1A1 表達情況。預后膀胱癌 EJ 細胞中 ALDH1A1 基因表達情況制膀胱腫瘤細胞內 ALDH1A1 基因的表達水平：被 2500nm，膀胱腫瘤細胞內 ALDH1A1 mRNA 表達水平明顯降低（P量為對照組的 3.6 倍（圖 3）。說明，DSF 抑制了膀胱癌 E的表達。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R737.14

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本文編號：2668852