【摘要】：由先天性畸形,創(chuàng)傷,炎癥或癌癥引起的尿道缺損,一直是泌尿外科研究領(lǐng)域的熱門話題。目前還沒有修復(fù)長段管狀尿道缺損的理想方法。在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,經(jīng)典的組織工程材料如小腸粘膜下層,膀胱脫細胞基質(zhì)和組織工程口腔粘膜在應(yīng)用上也存在供體組織有限,免疫反應(yīng),纖維化和鈣化,基質(zhì)收縮等諸多問題,往往不足以修復(fù)長段缺損。更重要的是,細胞植入動物體內(nèi)后的功效以及作用機制仍不清楚,能夠跟蹤細胞在植入宿主體內(nèi)的去向和命運至關(guān)重要,示蹤和成像方法可用于回答關(guān)于細胞生物分布的一些關(guān)鍵問題。而相關(guān)的動物模型對于更好地理解修復(fù)的功效和安全性是必不可少的。在修復(fù)尿道缺損后對種子細胞進行中長期的遷移和分化監(jiān)測方面的研究還未見報道。因此,我們使用負(fù)載慢病毒轉(zhuǎn)染的GFP-BMSCs和RFP-EPCs的組織工程化羊膜構(gòu)建體,以外科補片的形式修復(fù)犬會陰部3 cm管狀尿道缺損。選取20只健康成年雄性雜種犬,隨機分為5組,每組4只。建立會陰部3cm管狀尿道缺損模型后,分別用負(fù)載BMSCs、EPCs、BMSCs和EPCs混合的脫細胞羊膜基質(zhì)修復(fù)缺損部位;用未種植細胞的脫細胞羊膜修復(fù)和缺損后不修復(fù)的犬只作為對照。通過術(shù)后排尿觀察和尿液性質(zhì)檢測,尿道造影,剖檢觀察和組織學(xué)觀察來評估修復(fù)效果,并通過免疫熒光手段追蹤監(jiān)測GFP-BMSCs和RFP-EPCs兩種細胞的去向及分化。研究結(jié)果如下:1、BMSCs+EPCs混合組的犬只在術(shù)后排尿正常,新生尿道腔光滑平整,無尿道狹窄,組織學(xué)觀察顯示新生上皮完整;BMSCs組的犬只尿道有小范圍狹窄,剖檢發(fā)現(xiàn)新生段有瘢痕;EPCs組的犬只排尿時間延長,新生尿道段狹窄,剖檢顯示新生段粗糙,瘢痕較多;組織學(xué)顯示新生段上皮化不完整;羊膜修復(fù)組和自體修復(fù)組的犬只排尿異常,新生尿道段狹窄,剖檢顯示新生段瘢痕化嚴(yán)重,有多處皺縮,組織學(xué)顯示上皮化不完整,僅為單層上皮,自體修復(fù)組的犬只尿道新生段幾乎無上皮細胞覆蓋。2、通過免疫熒光染色對組織內(nèi)的GFP-BMSCs和RFP-EPCs進行追蹤監(jiān)測顯示,BMSCs組的綠色熒光集中分布于新生尿道的上皮部位,說明移植的BMSCs幾乎全部分化為尿道上皮細胞。EPCs組紅色熒光在上皮部位也有分布,但分布較少,在血管周圍分布較多,血管輪廓較清晰,證明多數(shù)EPCs分化為血管內(nèi)皮組織,少數(shù)分化為尿道上皮細胞。BMSCs+EPCs混合組的尿道上皮部位出現(xiàn)紅色和綠色兩種熒光,且綠色熒光更多。紅色熒光在上皮下方的血管周圍出現(xiàn)較多,證明移植的絕大多數(shù)BMSCs與少部分EPCs共同參與了新生尿道上皮的形成,EPCs主要參與血管的新生與修復(fù)。綜上所述,負(fù)載BMSCs和EPCs的組織工程化羊膜片可成功修復(fù)犬會陰部3 cm管狀尿道缺損。分化監(jiān)測證明,BMSCs與EPCs共同參與新生尿道上皮的形成,但以BMSCs為主,EPCs主要遷移至血管缺損部位并參與血管的新生。BMSCs與EPCs混合修復(fù)尿道缺損所達到的最優(yōu)效果在上皮化和血管新生兩方面得以體現(xiàn)。
【圖文】：

暴露導(dǎo)尿管（圖2-1C）。試驗組分別用種植 BMSCs、EPCs 和 BMSCs+EPCs 的脫細胞羊膜迅速鋪被并環(huán)狀包裹導(dǎo)尿管，兩端與正常尿道斷端對合，以此替代尿道缺損部位（圖 2-1D、E）。用6-0 PGA 可吸收縫線將羊膜支架和尿道斷端結(jié)節(jié)縫合。將羊膜兩側(cè)的尿道海綿體輕輕牽拉對合裹住縫合好的管狀羊膜，并結(jié)節(jié)縫合。用 3-0 可吸收線連續(xù)縫合球狀海綿體肌，1 號絲線結(jié)節(jié)縫合皮膚（圖 2-1F）。對照組中的羊膜修復(fù)組用未種植細胞的脫細胞羊膜

依然保持原來的狀態(tài)。結(jié)果顯示，BMSCs+EPCs 混合組（圖 2-2 B）和 BMSCs組（圖 2-2 C）的犬只尿道腔與術(shù)前（圖 2-2 A）無明顯區(qū)別，而 EPCs 組、羊膜修復(fù)組和自體修復(fù)組犬只的尿道均出現(xiàn)不同程度的狹窄，EPCs組尿道狹窄范圍較�。▓D2-2 D），羊膜修復(fù)組和自體修復(fù)組的尿道手術(shù)段完全狹窄（圖 2-2 E、F），，自體修復(fù)組個別犬只的狹窄部位有漏尿（圖 2-2 F）。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R318.08;R699.6

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 呂向國;徐月敏;;組織工程技術(shù)在尿道重建中的應(yīng)用[J];中國組織工程研究;2013年11期

2 王營;傅強;;組織工程與干細胞技術(shù)在尿道重建中的應(yīng)用[J];中華男科學(xué)雜志;2012年03期

本文編號：2667662