【摘要】：目的:研究雌激素是否通過調(diào)控TGF-β_1表達(dá)來改善腎缺血-再灌注損傷后腎間質(zhì)纖維化的程度,從而進(jìn)一步探討雌激素對腎缺血-再灌注損傷發(fā)揮保護(hù)作用的可能機(jī)制。方法:(1)將提前兩周給予去除卵巢預(yù)處理的32只雌性SD大鼠,隨機(jī)均分為四組(8只/組),分別為:不給予干預(yù)的正常組(Control組),只暴露腎臟不給予腎缺血的假手術(shù)組(Sham組),完成整個造模的腎缺血-再灌注損傷組(I/R組)及造模完成前給予雌激素皮下注射的雌激素干預(yù)組(E_2+I/R組)。Control組:不給予處理,常規(guī)飼養(yǎng)。Sham組:常規(guī)麻醉后,將右側(cè)腎臟完整切除,完全暴露左側(cè)腎臟,但不給予無創(chuàng)血管夾夾閉左側(cè)腎蒂,等待45分鐘并給予鹽水濕潤紗布覆蓋后暴露出來的左側(cè)腎臟,倒計時結(jié)束后將左側(cè)腎臟還納,給予切口絲線逐層縫合并用碘伏在次擦拭切口。I/R組:等待大鼠完全進(jìn)入麻醉狀態(tài)后后,先摘下右側(cè)腎臟,分離左腎腎蒂周圍脂肪組織,使用無損傷血管夾延橫向完全夾閉左側(cè)腎蒂,在45分鐘后松開血管夾,等待腎臟顏色恢復(fù),證明血流再灌注成功,逐層縫合后關(guān)閉腹腔并給予碘伏擦拭切口。E_2+I/R組:在造模開始的三天前,在大鼠大腿內(nèi)側(cè)經(jīng)皮下注射給予雌激素(100微升/公斤)。連續(xù)注射3天,每天固定時間給予一次,剩余步驟參考上一組造模方法。各組大鼠完成上述操作后再常規(guī)飼養(yǎng)14天后,常規(guī)處死后將右側(cè)腎臟完整取出,為避免損傷腎組織,摘除過程中鈍性分離并使用玻璃分針。(2)蘇木素-伊紅(HE)染色觀察腎小管損傷并性數(shù)據(jù)分析。(3)Masson染色組織經(jīng)過固定液處理后,給予乙醇脫水,石蠟包埋后切片,石蠟切片給予馬松染色處理,最后光鏡下觀察每組腎纖維化改變情況。(3)Western-blot檢測每組腎間質(zhì)中TGF-β_1蛋白上調(diào)或者下降與否。結(jié)果:(1)HE顯示I/R組顯現(xiàn)明顯病理損傷,出現(xiàn)腎小球萎縮,腎小管出現(xiàn)腫脹、壞死及細(xì)胞脫落,管腔大小明顯改變、腎間質(zhì)出現(xiàn)了病理變化,Paller評分與Control組和Sham組相比較明顯升高(P0.05);反而再觀察E_2+I/R組時可以看到腎小球結(jié)構(gòu)無明顯改變,腎小管上皮細(xì)胞、腎間質(zhì)、炎性細(xì)胞浸潤較I/R組輕,Paller評分較I/R組低(P0.05)。(2)通過Masson染色實驗表明I/R組間質(zhì)纖維化明顯;E_2+I/R組纖維化較前者明顯緩解。(3)雌激素可降低腎缺血-再灌注損傷后腎間質(zhì)中TGF-β_1蛋白的表達(dá),腎I/R組腎臟中TGF-β_1的表達(dá)較Control組有明顯上調(diào)(P0.05)。E_2+I/R組腎臟中TGF-β_1蛋白的表達(dá)水平較I/R組有明顯下調(diào)(P0.05)。結(jié)論:雌激素可能通過下調(diào)大鼠模型腎間質(zhì)中TGF-β_1的表達(dá),改善腎小管間質(zhì)纖維化的程度,從而發(fā)揮對腎缺血-再灌注損傷后的保護(hù)作用。
【圖文】：

實 驗 結(jié) 果(Results)1. 腎組織 HE 染色及 Paller 評分分析Control 組因為未予特殊處理，遂組織病理表現(xiàn)與正常組織相同，無明顯病理變化。Sham 組大鼠雖然通過操作將其左側(cè)腎臟完全暴露于腹腔外，但是此過程中未傷及腎蒂及腎臟本身，對其功能及形態(tài)未造成巨大影響，遂可以看出其整體結(jié)構(gòu)和腎小管都未見明顯異常，小管上皮細(xì)胞排列整齊同正常組織無異，更無水腫及炎性細(xì)胞浸潤的跡象。缺血-再灌注組腎小球結(jié)構(gòu)明顯變化，出現(xiàn)萎縮，，腎小管出現(xiàn)腫脹、壞死及細(xì)胞脫落，管腔大小明顯改變、腎間質(zhì)廣泛出現(xiàn)病理變化，Paller 評分較 Control組和假手術(shù)組明顯升高（P＜0.05）；E2+I/R 組：腎小球結(jié)構(gòu)無明顯改變，腎小管上皮細(xì)胞、腎間質(zhì)、炎性細(xì)胞浸潤較缺血-再灌注組輕，Paller 評分較缺血-再灌注組組低（P＜0.05，圖 1A,BA-c 黑色箭頭為較典型的腎小管病理變化）

Masson 染色Masson 染色后，光學(xué)顯微鏡下可以觀察到細(xì)胞外膠原纖維染色后呈現(xiàn)藍(lán)色，而胞核染色后分別呈紅色和黑藍(lán)色。觀察可見 Control 組、Sham 組大鼠腎小管上勻排布，腎小囊、小管基底膜、腎小球系膜與血管周圍藍(lán)染區(qū)均較少；I/R 組質(zhì)出現(xiàn)大量膠原堆積。E2+I/R 組雖然有少量藍(lán)色膠原堆積，但較 I/R 組少(圖
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R692

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本文編號：2663563