發(fā)布時(shí)間：2020-05-09 18:16

【摘要】：研究背景:不孕癥是一種常見(jiàn)的臨床問(wèn)題,其定義為在一年內(nèi)未采取任何避孕措施卻無(wú)法自然受孕,大約影響到全世界13~15%的育齡夫婦,其病因可分為男性不孕和女性不孕。根據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查發(fā)現(xiàn),不孕不育發(fā)病率不斷增加,逐漸影響人類生殖健康。男性不育癥約占所有不孕病例的一半,其病因較為復(fù)雜多樣,是從睪丸中完全沒(méi)有精子到精子質(zhì)量的明顯改變一系列環(huán)節(jié)。隨著男性不育各項(xiàng)檢查的普及和發(fā)展,部分確定引起男性不育的病因包括:解剖結(jié)構(gòu)缺陷、精液異常、分子遺傳學(xué)紊亂、泌尿生殖道感染、內(nèi)分泌紊亂、遺傳變異或環(huán)境毒素等。其中弱精子癥是男性不育重要因素之一,又稱為精子活力低下,其精液參數(shù)中前向運(yùn)動(dòng)的精子活動(dòng)力小于32%。弱精子癥的病因涉及感染、免疫異常、長(zhǎng)期禁欲、不健康生活方式以及遺傳因素等。然而,遺傳基因引起弱精子癥的原因仍然相對(duì)不為人知。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),microRNA表達(dá)特征、SNP相關(guān)性和蛋白質(zhì)組學(xué)對(duì)弱精子癥發(fā)生發(fā)展變得越來(lái)越重要,這些發(fā)現(xiàn)為弱精子癥的病理生理學(xué)基礎(chǔ)提供了線索。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)探究GRP78基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性在弱精子癥患者與正常男性中的基因型分布情況,分析兩組間基因型與等位基因的分布差異,及分析基因型與精子活力之間的關(guān)系,有助于對(duì)進(jìn)一步了解弱精子癥的發(fā)生的機(jī)制,對(duì)部分弱精子癥患者的診斷及治療有重要的意義。目的:單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)是由于單個(gè)核苷酸的突變引起DNA序列多態(tài)性,是一種最常見(jiàn)的人類遺傳變異。SNP可用于解釋不同群體和個(gè)體對(duì)疾病,特別是對(duì)復(fù)雜疾病的易感性,以及對(duì)環(huán)境因子反應(yīng)的表型差異。本文旨在探究葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP 78)基因啟動(dòng)子區(qū)rs3216733、rs17840761和rs17840762位點(diǎn)多態(tài)性在精子活力正常男性(對(duì)照組)及弱精子癥患者中的分布情況,并在兩組中比較三個(gè)位點(diǎn)基因型與等位基因頻率的分布差異。此外,為了進(jìn)一步明確位點(diǎn)多態(tài)性與弱精子癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系,進(jìn)而分析位點(diǎn)基因型與精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)之間的關(guān)系及其對(duì)血清GRP 78蛋白表達(dá)水平的影響。方法:收集研究對(duì)象的精液、全血及血清樣本。精液樣本經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助精液分析系統(tǒng)進(jìn)行分析,應(yīng)用多重單堿基延伸PCR基因分型技術(shù)對(duì)研究對(duì)象的GRP 78基因啟動(dòng)子區(qū)rs3216733、rs17840761和rs17840762位點(diǎn)進(jìn)行基因分型,用相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析位點(diǎn)多態(tài)性與弱精子癥的相關(guān)性。我們采用酶聯(lián)免疫法吸附實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)血清中GRP 78蛋白水平表達(dá)情況。結(jié)果:研究對(duì)象包括400例弱精子癥不育男性、400例有生育史的健康男性。弱精子癥組和對(duì)照組的前向運(yùn)動(dòng)精子百分率分別為(20.09±8.18)%、(57.16±13.45)%,兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。Rs3216733位點(diǎn)存在dd、Gd和GG三種基因型,對(duì)照組中基因頻率分別為46.5%、43.7%、9.8%,弱精子癥組分別為38.0%、49.8%、12.2%;Rs17840761位點(diǎn)存在CC、CT、TT基因型,對(duì)照組中基因型頻率分別為27.3%、45.2%、27.5%,弱精子癥組分別為28.0%、47.5%、24.5%;Rs17840762位點(diǎn)存在CC、CT、TT基因型,對(duì)照組中基因型頻率分別為74.3%、23.0%、2.7%,弱精子癥組分別為75.0%、23.5%、1.5%。Rs3216733位點(diǎn)Gd、Gd/GG基因型和G等位基因頻率在弱精子癥組和對(duì)照組中分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Gd vs.dd:OR=1.42,95%CI,1.06-1.93,P=0.020;Gd/GG vs.dd:OR=1.43,95%CI,1.08-1.91,P=0.013;G vs.d:OR=1.26,95%CI,1.03-1.56,P=0.027)。但rs17840761和rs17840762位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率在兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。經(jīng)單倍型分析,G-C-C單倍型在弱精子癥組和對(duì)照組之間頻率分布分別為33.9%和29.2%。與對(duì)照組相比,G-C-C單倍體顯著增加了弱精子癥的風(fēng)險(xiǎn)(P=0.026)。我們還比較了rs3216733位點(diǎn)多態(tài)性與精子動(dòng)力學(xué)參數(shù)的相關(guān)性(如前向運(yùn)動(dòng)、曲線速率、直線速率、直線性)。在rs3216733位點(diǎn)中,攜帶Gd、Gd/GG基因型的弱精子癥患者與dd基因型相比,其前向運(yùn)動(dòng)、曲線速率、直線速率和直線性均顯著降低(P0.01)。此外,弱精子癥患者血清中GRP 78蛋白的濃度(0.479±0.104 ng/mL)低于對(duì)照組(0.661±0.225 ng/mL,P0.001)。攜帶rs3216733 Gd/GG基因型(0.414±0.069ng/mL)的患者GRP78蛋白水平低于攜帶dd基因型的患者(0.558±0.082 ng/mL,P0.001)。結(jié)論:綜上所述,GRP 78基因啟動(dòng)子區(qū)rs3216733位點(diǎn)與弱精子癥的發(fā)病存在著相關(guān)性。其中,rs3216733位點(diǎn)Gd/GG基因型可能通過(guò)下調(diào)GRP 78蛋白表達(dá)降低精子活力,從而導(dǎo)致弱精子癥的發(fā)生。
【圖文】：

25圖 1-1 測(cè)序圖顯示 rs3216733 的 dd、Gd 和 GG 基因型。Fig 1-1. Sequencing map showed dd, Gd and GG genotypes for rs3216733.

2.4 GRP 78 基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性單倍型分析2.4.1 連鎖不平衡分析采用在線軟件 SHEsis 對(duì) rs3216733、rs17840761、rs17840762 位點(diǎn)進(jìn)行連鎖不平衡分析（如圖 2）。發(fā)現(xiàn) rs3216733 和 rs17840761 位點(diǎn) D'=0.86、r2=0.37；rs17840761 和rs17840762 位點(diǎn) D'=0.91、r2=0.13；rs3216733 和 rs17840762 位點(diǎn) D'=0.64、r2=0.03，說(shuō)明這 3 個(gè) SNP 兩兩之間存在連鎖不平衡。
【學(xué)位授予單位】：右江民族醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R698.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2656536