【摘要】：目的:探索Nec-1是否能夠通過(guò)抑制Necroptosis途徑的激活,從而減輕糖尿病腎病大鼠腎組織炎癥介質(zhì)的釋放和損傷。方法:將成年雄性SD大鼠分為糖尿病腎病組(DN組)、正常對(duì)照組(NC)和NC+Nec-1組(NN組),DN組大鼠造模成功后再分為DN組、DN+Vehicle(DV組)、DN+Nec-1(Nec-1組)。每組在4、8、12、16周共設(shè)置4個(gè)觀察點(diǎn),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只大鼠,DN組造模采用鏈脲菌素(STZ)按50mg/kg一次性腹腔注射。DN+Nec-1(Nec-1組)、NC+Nec-1(NN組)從造模成功后第一天開(kāi)始予以Nec-1按單次劑量3.5mg/kg灌胃,隔天一次。DN+DMSO(DV組)從造模成功后第一天開(kāi)始予以Nec-1的溶解劑-二甲基亞砜(DMSO)按10%DMSO-PBS液灌胃,隔天一次。處死大鼠前采集血、尿標(biāo)本,檢測(cè)血清尿素、血糖、血清肌酐和24小時(shí)尿蛋白;腎臟石蠟切片做普通病理;采用免疫組化、免疫印跡(WB)和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)腎組織中受體相互作用蛋白1(RIP1)、受體相互作用蛋白3(RIP3)和白介素-6(IL-6)的蛋白表達(dá)和m RNA相對(duì)表達(dá)量,并分析Nec-1對(duì)糖尿病腎病大鼠以上指標(biāo)的影響。結(jié)果:1.血、尿生化檢測(cè):1)血糖和24小時(shí)尿蛋白:(1)DN、DV組在不同時(shí)間點(diǎn)血糖和尿蛋白均明顯高于NC、NN組(P0.01,Nec-1組不同時(shí)間點(diǎn)血糖和尿蛋白均明顯低于DN、DV組(P0.01)。(2)血糖、尿蛋白在不同時(shí)間點(diǎn)NC與NN組比較以及DN與DV組比較均無(wú)顯著性差異(P0.05)。(3)DN、DV組血糖和尿蛋白隨時(shí)間逐漸升高(P0.05)。2)血清肌酐和尿素:(1)DN、DV組不同時(shí)間點(diǎn)血清肌酐和尿素均明顯高于NC、NN組(P0.01),Nec-1組不同時(shí)間點(diǎn)血清肌酐和尿素均明顯低于DN、DV組(P0.01)。(2)血清肌酐、尿素在不同時(shí)間點(diǎn)NC與NN組比較以及DN與DV組比較均無(wú)顯著性差異(P0.05)。(3)DN、DV組血清肌酐和尿素隨時(shí)間變化無(wú)顯著性差異(P0.05)。2.腎臟病理:DN、DV組可見(jiàn)不同程度的腎小球增大、系膜基質(zhì)增多、細(xì)胞數(shù)增多、部分腎小管擴(kuò)張、顆粒和空泡變性。而Nec-1組大鼠的上述腎臟病理改變較DN、DV組不同程度的減輕。NC、NN組腎小球、小管形態(tài)基本正常。3.免疫組化:(1)不同時(shí)間點(diǎn)DN、DV組大鼠腎臟組織中RIP1、RIP3、IL-6表達(dá)量均明顯高于NC、NN組(P0.01),Nec-1組不同時(shí)間點(diǎn)RIP1、RIP3、IL-6表達(dá)量均較DN、DV組明顯減少(P0.01)。(2)RIP1、RIP3、IL-6表達(dá)量在不同時(shí)間點(diǎn)NC與NN組比較以及DN與DV組比較均無(wú)顯著性差異(P0.05)。4.Western-blot:(1)不同時(shí)間點(diǎn)DN、DV組大鼠腎臟組織中RIP1、RIP3、IL-6蛋白表達(dá)量均較NC、NN組明顯增加(P0.01),Nec-1組不同時(shí)間點(diǎn)RIP1、RIP3、IL-6蛋白表達(dá)量均較DN、DV組減少(P0.05)。(2)RIP1、RIP3、IL-6蛋白表達(dá)量在不同時(shí)間點(diǎn)NC與NN組比較以及DN與DV組比較均無(wú)顯著性差異(P0.05)。5.Real-Time PCR:(1)不同時(shí)間點(diǎn)DN、DV組大鼠腎臟組織中RIP1、RIP3、IL-6m RNA相對(duì)表達(dá)量均較NC、NN明顯增加(P0.01),Nec-1組不同時(shí)間點(diǎn)RIP1、RIP3、IL-6m RNA相對(duì)表達(dá)量均較DN、DV組明顯減少(P0.01)。(2)RIP1、RIP3、IL-6m RNA表達(dá)量在不同時(shí)間點(diǎn)NC與NN組比較以及DN與DV組比較均無(wú)顯著性差異(P0.05)。結(jié)論:壞死性凋亡途徑的激活可能參與了糖尿病腎病大鼠腎組織的炎癥介質(zhì)的釋放和損傷。使用Nec-1干預(yù)后,糖尿病腎病大鼠腎組織中RIP1、RIP3和IL-6表達(dá)均下降,Nec-1可能通過(guò)抑制壞死性凋亡途徑而減輕糖尿病腎病腎組織炎癥介質(zhì)的釋放和損傷。
【圖文】：

五組不同時(shí)間點(diǎn)大鼠腎臟HE染色(×400)

25圖 6 五組不同時(shí)間點(diǎn)大鼠腎臟 PAS 染色(×400)2.4 免疫組化2.4.1 RIP1 免疫組化1）從第 4 周開(kāi)始，DN、DV 組不同時(shí)間點(diǎn) RIP1 表達(dá)量均明顯高于 NC、NN 組（P＜0.01）。2）使用 Nec-1 干預(yù)后，Nec-1 組不同時(shí)間點(diǎn) RIP1 表達(dá)量均較 DN、DV 組明顯減少（P＜0.01）。3）RIP1 表達(dá)量在不同時(shí)間點(diǎn) NC 與 NN 組以及 DN 與 DV 組比較均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。 (見(jiàn)表 13，圖 7、8)
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9

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2 裴峪;王W，

本文編號(hào)：2656356