【摘要】：目的:膀胱癌是當(dāng)今世界發(fā)病率最高而且發(fā)病機制最復(fù)雜的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一。本課題組長期致力于錨蛋白重復(fù)序列6Diversin在腫瘤的發(fā)生發(fā)展侵襲轉(zhuǎn)移機制的相關(guān)研究,前期結(jié)果顯示Diversin在非小細(xì)胞肺癌,三陰乳腺癌,神經(jīng)膠質(zhì)瘤,尤其是膀胱癌組織中表達(dá)水平均顯著高于癌旁組織。而且在非小細(xì)胞肺癌中Diversin通過激活Wnt/JNK通路對非小細(xì)胞肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移發(fā)揮上調(diào)作用。因此,本課題詣在證實Diversin對膀胱癌組織發(fā)生發(fā)展侵襲轉(zhuǎn)移發(fā)揮的功能,此外在細(xì)胞水平上,對其促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移,發(fā)生發(fā)展的表型及其分子機制進(jìn)行初步研究。研究方法:本研究收集沈陽醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院2009年1月~2015年12月收治的膀胱尿路上皮癌患者的術(shù)后標(biāo)本作為研究對象。通過免疫組化的方法對其癌組織和癌旁組織中的Diversin的表達(dá)水平進(jìn)行檢測。為了進(jìn)一步證實Diversin在腫瘤的發(fā)生發(fā)展侵襲轉(zhuǎn)移等過程中的作用,本實驗以膀胱尿路上皮癌T24細(xì)胞作為實驗對象,利用瞬時轉(zhuǎn)染siRNA的方法對T24細(xì)胞中的Diversin的表達(dá)水平進(jìn)行下調(diào),并通過蛋白印記發(fā)對下調(diào)的效果進(jìn)行檢測。本課題采用MTS的方法對干擾組和對照組細(xì)胞的增殖能力進(jìn)行檢測,并且根據(jù)MTS的結(jié)果繪制實驗組和對照組的生長曲線;利用Transwell侵襲實驗對實驗組和對照T24細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力進(jìn)行初步檢測。為了研究Diversin促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制,同時基于本課題組的前期實驗結(jié)果,本實驗利用Western-blot方法對T24實驗組和對照組細(xì)胞中Wnt通路的Wnt/β-catenin經(jīng)典途徑和Wnt/JNK途徑中的關(guān)鍵蛋白β-catenin,JNK,p-JNK的表達(dá)水平進(jìn)行檢測,繼而表征Wnt信號通路經(jīng)典途徑和JNK途徑的活性。結(jié)果:1、Diversin在膀胱癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織,且Diversin的表達(dá)主要定位于腫瘤細(xì)胞的胞漿與包膜處(p0.05)。2、下調(diào)Diversin的膀胱癌細(xì)胞T24細(xì)胞系的增殖能力顯著低于陰性對照組。3、下調(diào)Diversin的T24細(xì)胞系的侵襲能力顯著低于陰性對照組。4、下調(diào)Diversin的T24細(xì)胞中,磷酸化JNK與本底JNK表達(dá)量的比值顯著低于陰性對照組。結(jié)論:1、Diversin與膀胱癌的發(fā)生,惡性轉(zhuǎn)化,TNM分期,有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病理因素呈正相關(guān)。2、Diversin可提高T24細(xì)胞系的增殖能力和侵襲轉(zhuǎn)移能力。3、Diversin可能通過激活T24細(xì)胞中Wnt信號通路的JNK途徑發(fā)揮其生物學(xué)功能。
【圖文】：

3 實驗結(jié)果3.1 Dviersin 在膀胱癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織為了證明 Diversin 在膀胱腫瘤中對細(xì)胞增殖，侵襲轉(zhuǎn)移等病例因素中發(fā)揮促進(jìn)作用，本課題采用免疫組織化學(xué)方法檢測了收集的 40 例膀胱尿路上皮癌組織標(biāo)本中 Diversin 中的表達(dá)水平進(jìn)行檢測。在收集的膀胱尿路上皮癌的病歷資料當(dāng)中，Diversin 呈陽性表達(dá)的病例有 38 例（陽性表達(dá)率為 95％）。同時免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，Diversin 只要在膀胱癌組織中細(xì)胞的胞漿和包膜中表達(dá)水平較高（圖 1B、C、D）。而在正常尿路上皮中 Diversin 呈現(xiàn)陰性表達(dá)（圖 1A）。以上結(jié)果進(jìn)一步證實 Diversin 的表達(dá)水平與膀胱癌的惡性轉(zhuǎn)化，TNM 分期，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病理因素相關(guān)。

時轉(zhuǎn)染 Diversin 特異性小干擾 RNA 的手段對 T24 細(xì)胞中 Diversin 的表達(dá)水平進(jìn)行下調(diào)，以無意義序列作為陰性對照。轉(zhuǎn)染 48h 后以 western-blot 的方法檢測Diversin 表達(dá)水平下調(diào)的效果，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)膀胱癌 T24 細(xì)胞轉(zhuǎn)染特異性 siRNA 48h 后，Diversin 的水平表達(dá)與對照組相比顯著下降（圖 2A）。為了證實 Diversin 在膀胱癌 T24 細(xì)胞中對細(xì)胞增殖作發(fā)揮促進(jìn)作用。 我們對轉(zhuǎn)染后的 T24 細(xì)胞進(jìn)行 MTS 增殖能力檢測，，并對干擾組和對照組細(xì)胞繪制生長曲線。MTS 結(jié)果顯示，Diversin 干擾組 T24 細(xì)胞的增殖能力與陰性對照組細(xì)胞相比顯著降低（圖 2B），這一結(jié)果提示下調(diào) Diversin 的表達(dá)水平可降低 T24細(xì)胞的增殖能力為了探討 Diversin 對膀胱癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的調(diào)控作用，本實驗采用Transwell 的方法對 T24 細(xì)胞的干擾組和陰性對照組進(jìn)行檢測。Transwell 結(jié)果顯示，陰性對照組 Transwell 小室下室染色的細(xì)胞數(shù)量顯著高于干擾組（圖 2 C,D），這一結(jié)果提示下調(diào) Diversin 的表達(dá)水平可降低 T24 細(xì)胞的侵襲能力。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.14

【參考文獻(xiàn)】

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1 潘起晨;王明昊;班允超;崔曉;王運杰;;Diversin在人腦星形細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)及其對腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲的影響[J];山東醫(yī)藥;2015年20期

本文編號：2653605