【摘要】：目的:膀胱癌是當(dāng)今世界發(fā)病率最高而且發(fā)病機(jī)制最復(fù)雜的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一。本課題組長(zhǎng)期致力于錨蛋白重復(fù)序列6Diversin在腫瘤的發(fā)生發(fā)展侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的相關(guān)研究,前期結(jié)果顯示Diversin在非小細(xì)胞肺癌,三陰乳腺癌,神經(jīng)膠質(zhì)瘤,尤其是膀胱癌組織中表達(dá)水平均顯著高于癌旁組織。而且在非小細(xì)胞肺癌中Diversin通過(guò)激活Wnt/JNK通路對(duì)非小細(xì)胞肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移發(fā)揮上調(diào)作用。因此,本課題詣在證實(shí)Diversin對(duì)膀胱癌組織發(fā)生發(fā)展侵襲轉(zhuǎn)移發(fā)揮的功能,此外在細(xì)胞水平上,對(duì)其促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移,發(fā)生發(fā)展的表型及其分子機(jī)制進(jìn)行初步研究。研究方法:本研究收集沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院2009年1月~2015年12月收治的膀胱尿路上皮癌患者的術(shù)后標(biāo)本作為研究對(duì)象。通過(guò)免疫組化的方法對(duì)其癌組織和癌旁組織中的Diversin的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。為了進(jìn)一步證實(shí)Diversin在腫瘤的發(fā)生發(fā)展侵襲轉(zhuǎn)移等過(guò)程中的作用,本實(shí)驗(yàn)以膀胱尿路上皮癌T24細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染siRNA的方法對(duì)T24細(xì)胞中的Diversin的表達(dá)水平進(jìn)行下調(diào),并通過(guò)蛋白印記發(fā)對(duì)下調(diào)的效果進(jìn)行檢測(cè)。本課題采用MTS的方法對(duì)干擾組和對(duì)照組細(xì)胞的增殖能力進(jìn)行檢測(cè),并且根據(jù)MTS的結(jié)果繪制實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的生長(zhǎng)曲線;利用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照T24細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力進(jìn)行初步檢測(cè)。為了研究Diversin促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,同時(shí)基于本課題組的前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)利用Western-blot方法對(duì)T24實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞中Wnt通路的Wnt/β-catenin經(jīng)典途徑和Wnt/JNK途徑中的關(guān)鍵蛋白β-catenin,JNK,p-JNK的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),繼而表征Wnt信號(hào)通路經(jīng)典途徑和JNK途徑的活性。結(jié)果:1、Diversin在膀胱癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織,且Diversin的表達(dá)主要定位于腫瘤細(xì)胞的胞漿與包膜處(p0.05)。2、下調(diào)Diversin的膀胱癌細(xì)胞T24細(xì)胞系的增殖能力顯著低于陰性對(duì)照組。3、下調(diào)Diversin的T24細(xì)胞系的侵襲能力顯著低于陰性對(duì)照組。4、下調(diào)Diversin的T24細(xì)胞中,磷酸化JNK與本底JNK表達(dá)量的比值顯著低于陰性對(duì)照組。結(jié)論:1、Diversin與膀胱癌的發(fā)生,惡性轉(zhuǎn)化,TNM分期,有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病理因素呈正相關(guān)。2、Diversin可提高T24細(xì)胞系的增殖能力和侵襲轉(zhuǎn)移能力。3、Diversin可能通過(guò)激活T24細(xì)胞中Wnt信號(hào)通路的JNK途徑發(fā)揮其生物學(xué)功能。
【圖文】：

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 Dviersin 在膀胱癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織為了證明 Diversin 在膀胱腫瘤中對(duì)細(xì)胞增殖，侵襲轉(zhuǎn)移等病例因素中發(fā)揮促進(jìn)作用，本課題采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了收集的 40 例膀胱尿路上皮癌組織標(biāo)本中 Diversin 中的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。在收集的膀胱尿路上皮癌的病歷資料當(dāng)中，Diversin 呈陽(yáng)性表達(dá)的病例有 38 例（陽(yáng)性表達(dá)率為 95％）。同時(shí)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，Diversin 只要在膀胱癌組織中細(xì)胞的胞漿和包膜中表達(dá)水平較高（圖 1B、C、D）。而在正常尿路上皮中 Diversin 呈現(xiàn)陰性表達(dá)（圖 1A）。以上結(jié)果進(jìn)一步證實(shí) Diversin 的表達(dá)水平與膀胱癌的惡性轉(zhuǎn)化，TNM 分期，有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病理因素相關(guān)。

時(shí)轉(zhuǎn)染 Diversin 特異性小干擾 RNA 的手段對(duì) T24 細(xì)胞中 Diversin 的表達(dá)水平進(jìn)行下調(diào)，以無(wú)意義序列作為陰性對(duì)照。轉(zhuǎn)染 48h 后以 western-blot 的方法檢測(cè)Diversin 表達(dá)水平下調(diào)的效果，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)膀胱癌 T24 細(xì)胞轉(zhuǎn)染特異性 siRNA 48h 后，Diversin 的水平表達(dá)與對(duì)照組相比顯著下降（圖 2A）。為了證實(shí) Diversin 在膀胱癌 T24 細(xì)胞中對(duì)細(xì)胞增殖作發(fā)揮促進(jìn)作用。 我們對(duì)轉(zhuǎn)染后的 T24 細(xì)胞進(jìn)行 MTS 增殖能力檢測(cè)，，并對(duì)干擾組和對(duì)照組細(xì)胞繪制生長(zhǎng)曲線。MTS 結(jié)果顯示，Diversin 干擾組 T24 細(xì)胞的增殖能力與陰性對(duì)照組細(xì)胞相比顯著降低（圖 2B），這一結(jié)果提示下調(diào) Diversin 的表達(dá)水平可降低 T24細(xì)胞的增殖能力為了探討 Diversin 對(duì)膀胱癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的調(diào)控作用，本實(shí)驗(yàn)采用Transwell 的方法對(duì) T24 細(xì)胞的干擾組和陰性對(duì)照組進(jìn)行檢測(cè)。Transwell 結(jié)果顯示，陰性對(duì)照組 Transwell 小室下室染色的細(xì)胞數(shù)量顯著高于干擾組（圖 2 C,D），這一結(jié)果提示下調(diào) Diversin 的表達(dá)水平可降低 T24 細(xì)胞的侵襲能力。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.14

【參考文獻(xiàn)】

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1 潘起晨;王明昊;班允超;崔曉;王運(yùn)杰;;Diversin在人腦星形細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)及其對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲的影響[J];山東醫(yī)藥;2015年20期

本文編號(hào)：2653605