【摘要】：背景和目的:小分子RNA作為非編碼RNA的重要組成部分參與多種病理及生理進(jìn)程,包括腫瘤的發(fā)生發(fā)展;此前有研究證明了Mi RNA-9-5p在人類腫瘤發(fā)生中的重要調(diào)節(jié)作用,主要表現(xiàn)為抑制腫瘤的惡性生物學(xué)行為。但是其調(diào)節(jié)腫瘤的具體機(jī)制遠(yuǎn)沒有完全闡明。這項(xiàng)研究的目的就Mi RNA-9-5p如何影響前列腺癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲的機(jī)制進(jìn)行具體研究。方法:應(yīng)用實(shí)時定量PCR分別檢測前列腺癌細(xì)胞系PC3,DU145以及前列腺癌對照細(xì)胞正常前列腺上皮細(xì)胞RWPE-1中mi RNA-9-5p與CXCR4的表達(dá)水平,并同時檢測其在前列腺癌組織中的表達(dá)水平。應(yīng)用慢病毒感染技術(shù)建立穩(wěn)定表達(dá)mi RNA-9-5p的前列腺癌細(xì)胞系PC3/mi RNA-9-5p,并進(jìn)行實(shí)時定量PCR驗(yàn)證。利用CCK-8法分析PC3/mi R-9-5p細(xì)胞增殖能力的變化,通過Transwell遷移和侵襲試驗(yàn)分析PC3/mi R-9-5p細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化。利用生物信息學(xué)方法預(yù)測mi R-9-5p的靶基因,并構(gòu)建靶基因3’-UTR的野生型(WT)和突變型(Mut)熒光素酶報告基因質(zhì)粒,并通過熒光素酶報告基因法和熒光定量PCR驗(yàn)證。結(jié)果:前列腺癌對照細(xì)胞正常前列腺上皮細(xì)胞RWPE-1中mi R-9-5p的表達(dá)水平顯著高于前列腺癌細(xì)胞PC3和DU145。在穩(wěn)定過表達(dá)mi R-9-5p的PC3/mi R-9-5p細(xì)胞中mi R-9-5p的表達(dá)水平顯著高于PC3細(xì)胞(P0.01)和對照組細(xì)胞(PC3/mi R-NC)(P0.01)。細(xì)胞增殖能力檢測顯示與PC3組(P0.05)和PC3/mi R-NC組(P0.01)相比PC3/mi R-9-5p組在72 h和96 h時細(xì)胞活力顯著降低。Transwell遷移和侵襲試驗(yàn)結(jié)果顯示PC3/mi R-9-5p組與PC3組和PC3/mi R-NC組相比細(xì)胞遷移和侵襲能力顯著下降(P0.01)。生物信息學(xué)預(yù)測顯示mi R-9-5p能夠靶向結(jié)合CXCR4的3’-UTR;雙熒光素酶報告基因分析顯示:mi R-9-5p能夠靶向作用于CXCR4的3’-UTR抑制螢光素酶表達(dá),CXCR4可以部分回復(fù)mi R-9-5p的腫瘤抑制作用。熒光定量PCR檢測的結(jié)果顯示在過表達(dá)\miR-9-5p能夠顯著抑制PC3細(xì)胞中CXCR4的表達(dá)。結(jié)論miR-9-5p能夠抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,這可能是通過靶向抑制CXCR4的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。
【圖文】：

定量 PCR 檢測 miR-9-5p 在 RWPE-1、PC3 和 DU145 細(xì)胞中的表達(dá) .05，**P<0.01應(yīng)用實(shí)時熒光定量 PCR 在 7 對前列腺癌組織和腫瘤旁的正常9-5p 的基礎(chǔ)表達(dá)水平，重復(fù)三次結(jié)果顯示 miR-9-5p 在前列腺癌降低，在有限的檢測例數(shù)里面有一半以上（編號 1,2,3,6）的表以上，其中一例（編號 1）達(dá)到了百分之九十。如圖 2 所示.

熒光定量 PCR 檢測 miR-9-5p 在 RWPE-1、PC3 和 DU145 細(xì)胞中的表達(dá) 與 P*P<0.05，**P<0.01同時應(yīng)用實(shí)時熒光定量 PCR 在 7 對前列腺癌組織和腫瘤旁的正常組織iR-9-5p 的基礎(chǔ)表達(dá)水平，重復(fù)三次結(jié)果顯示 miR-9-5p 在前列腺癌組織顯著降低，，在有限的檢測例數(shù)里面有一半以上（編號 1,2,3,6）的表達(dá)減一半以上，其中一例（編號 1）達(dá)到了百分之九十。如圖 2 所示.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.25

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本文編號：2636360