發(fā)布時(shí)間：2020-04-22 01:34

【摘要】：目的:探究Renca細(xì)胞來源的外泌體(exosomes)活化的髓源抑制性細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)對(duì)腎癌抗原特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxic lymphocytes,CTLs)體外增殖和殺傷效應(yīng)的抑制作用。方法:超速離心法從Renca細(xì)胞無血清上清液中提取出exosomes,流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)exosomes對(duì)MDSCs的活化效應(yīng)。分離并培養(yǎng)小鼠樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DCs)和CD8+T細(xì)胞,制備DCs活化的腎癌抗原特異性CTLs。磁珠分選exosomes活化的MDSCs,羧基熒光素乙酰乙酸琥珀酰亞胺酯(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)熒光染色和流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)MDSCs對(duì)CTLs增殖的抑制作用。將MDSCs、CTLs和Renca細(xì)胞體外共培養(yǎng),乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)釋放實(shí)驗(yàn)檢測(cè)exosomes活化的MDSCs對(duì)CTLs殺傷效應(yīng)的抑制作用。結(jié)果:Renca細(xì)胞來源的exosomes有效地誘導(dǎo)了MDSCs的聚集,成功制備了DCs并獲得了DCs誘導(dǎo)的腎癌抗原特異性CTLs。與exosomes活化的MDSCs共培養(yǎng)后的CTLs其增殖指數(shù)和殺傷率明顯低于與未活化的MDSCs共培養(yǎng)后的CTLs和單獨(dú)的CTLs(P0.05)。結(jié)論:Renca細(xì)胞來源的exosomes活化的MDSCs抑制了腎癌抗原特異性CTLs的體外增殖和殺傷效應(yīng),可能在腎癌免疫逃逸中扮演重要作用。
【圖文】：

ratio）條件下 CTLs 的殺傷率，并以以下公式計(jì)算殺傷率（殺傷率％ 值－自然釋放孔 A 值）／（最大釋放孔 A 值－自然釋放孔 A 值）X統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 GraphPad Prism 7.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，每次至少重復(fù)三個(gè)樣本，數(shù)據(jù)來表述。2 組間比較采用配對(duì) t 檢驗(yàn)，3 組或以上比較采用 one-way以 P<0.05 表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。nca 細(xì)胞來源的 exosomes 的電鏡形態(tài)射電鏡對(duì) exosomes 進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定，200nm 視野下，見 exosomes 大脂質(zhì)膜包繞而成的類圓碟形，直徑在 30-100nm 之間（圖 1）。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文圖 3 流式檢測(cè)體外 PBS 處理和 Exosomes 處理 7 天后骨髓細(xì)胞 MDSCs 的比例變化Fig. 3 Flow cytometry analysis of changes in the proportion of MDSCs in bone marrow cellsafter 7 days of PBS treatment and Exosomes treatment2.4 MDSCs 的分離與鑒定體外經(jīng)磁珠分選出 exosomes 活化的 MDSCs 以及 PBS 處理的 MDSCs，流式細(xì)胞儀檢測(cè) Gr-1＋和 CD11b+雙陽(yáng)性細(xì)胞比例（均>95%），，倒置顯微鏡觀察 MDSCs形態(tài)，發(fā)現(xiàn) 20 m 視野下 PBS 處理的和 exosomes 活化的 MDSCs 分布均勻，大多呈圓球形，為單個(gè)核細(xì)胞，細(xì)胞核較大。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.11

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉曉玲;郭紅月;董猛;宋振川;;小鼠骨髓樹突狀細(xì)胞體外培養(yǎng)擴(kuò)增與生物學(xué)特性研究[J];腫瘤預(yù)防與治療;2014年01期

本文編號(hào)：2635978