【摘要】：研究背景腎細(xì)胞癌是泌尿系統(tǒng)中一種最常見的惡性腫瘤,約占成年人腎臟腫瘤的90%。腎細(xì)胞癌中最常見的病理類型為腎透明細(xì)胞癌,約占腎細(xì)胞癌的80%。以現(xiàn)在的技術(shù)手段,腎透明細(xì)胞癌早期診斷還比較困難,約30%-50%的患者在確診時已經(jīng)發(fā)生了轉(zhuǎn)移。由于腎透明細(xì)胞癌生物學(xué)特征復(fù)雜,而且對放化療均不敏感,目前根治性或部分腎切除是治療腎細(xì)胞癌的主要手段。雖然外科療效確切,但仍有20%-40%的患者術(shù)后出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。Ⅲ期和Ⅳ期腎透明細(xì)胞癌患者預(yù)后差,5年生存率僅有50%和10%。因此,對腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移機(jī)制進(jìn)行研究,將有利于腎透明細(xì)胞癌的臨床診斷和治療。酮體是脂肪酸在肝細(xì)胞分解氧化時產(chǎn)生的中間產(chǎn)物,包括乙酰乙酸、β-羥丁酸和丙酮。酮體由肝臟產(chǎn)生,然后轉(zhuǎn)運(yùn)至心、腎、腦及骨骼肌組織中進(jìn)行利用。腎臟作為酮體利用的重要器官,其酮體代謝能力很強(qiáng)。酮體作為體內(nèi)代謝的重要產(chǎn)物,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著緊密的關(guān)系。ACAT1、BDH2和HMGCL作為酮體代謝的關(guān)鍵基因在多種腫瘤的研究中都有相關(guān)報道,而在腎透明細(xì)胞癌中研究較少。因此,本文將探索酮體代謝關(guān)鍵基因ACAT1、BDH2和HMGCL在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)情況,并且探究其在腎透明細(xì)胞癌中的生物學(xué)功能。研究目的:探索ACAT1,BDH2和HMGCL基因在腎透明細(xì)胞癌中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平,及其對酮體代謝的調(diào)控作用,探究ACAT1,BDH2和HMGCL的異常表達(dá)對腎透明細(xì)胞癌惡性生物學(xué)行為的影響。研究方法:1.通過生物信息學(xué)的方法,運(yùn)用GCBI平臺、TCGA數(shù)據(jù)庫和GEPIA網(wǎng)站分析ACAT1、BDH2和HMGCL在腎透明細(xì)胞癌m RNA轉(zhuǎn)錄水平以及與臨床參數(shù)的關(guān)系。2.分別通過實時熒光定量PCR和免疫組織化學(xué)染色法分別驗證ACAT1、BDH2和HMGCL在腎透明細(xì)胞癌c DNA芯片中和腎透明細(xì)胞癌組織芯片中的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)情況。3.構(gòu)建外源性過表達(dá)ACAT1、BDH2和HMGCL的腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系,通過CCK-8實驗繪制生長曲線,2D細(xì)胞遷移實驗和3D細(xì)胞侵襲實驗來檢測ACAT1、BDH2和HMGCL基因?qū)δI透明細(xì)胞癌中的惡性腫瘤生物學(xué)的影響。4.檢測外源性過表達(dá)ACAT1、BDH2和HMGCL的腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系細(xì)胞中的酮體含量。5.利用外源性酮體處理腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系,通過CCK-8實驗來驗證外源性酮體對腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系增殖能力的影響。研究結(jié)果:1.ACAT1、BDH2和HMGCL基因在腎透明細(xì)胞癌中表達(dá)水平下調(diào)。我們通過分析生物信息學(xué)數(shù)據(jù),結(jié)果發(fā)現(xiàn)相比于正常腎臟組織,ACAT1、BDH2和HMGCL在腎透明細(xì)胞癌組織中表達(dá)下調(diào)。而且ACAT1、BDH2和HMGCL的表達(dá)量與腎透明細(xì)胞癌的生存和預(yù)后相關(guān)。進(jìn)一步通過RT-q PCR驗證ACAT1、BDH2和HMGCL基因在腎透明細(xì)胞癌組織中轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平低于癌旁組織,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。進(jìn)一步利用免疫組織化學(xué)染色方法,比較90例腎透明細(xì)胞癌和90例癌旁組織,發(fā)現(xiàn)在癌組織中ACAT1、BDH2和HMGCL蛋白表達(dá)水平顯著低于癌旁組織,兩者之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果提示,ACAT1、BDH2和HMGCL基因在腎透明細(xì)胞癌中表達(dá)下調(diào)。并且表達(dá)量高低與部分臨床參數(shù)相關(guān)。2.外源性過表達(dá)ACAT1,BDH2和HMGCL基因抑制腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)能力通過CCK-8細(xì)胞增殖實驗、細(xì)胞劃痕愈合實驗和Transwell實驗,發(fā)現(xiàn)外源性過表達(dá)ACAT1,BDH2和HMGCL可以抑制腎透明細(xì)胞癌的增殖能力和侵襲能力;外源性過表達(dá)ACAT1和BDH2可以抑制腎透明細(xì)胞癌的遷移能力。提示ACAT1,BDH2和HMGCL基因可抑制腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。3.酮體β-羥丁酸抑制腎透明癌細(xì)胞增殖能力。通過β-羥丁酸檢測試劑盒檢測發(fā)現(xiàn),外源性過表達(dá)ACAT1和HMGCL基因可以增加腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞中的酮體含量。通過CCK-8實驗發(fā)現(xiàn),外源性酮體β-羥丁酸可抑制腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖能力,且其抑制強(qiáng)度隨著β-羥丁酸濃度升高而逐漸增加,具有濃度依賴性,提示ACAT1,BDH2和HMGCL基因可能是通過調(diào)控酮體代謝從而影響腎透明細(xì)胞癌的增殖。研究結(jié)論:1.ACAT1、BDH2和HMGCL基因在腎透明細(xì)胞癌中轉(zhuǎn)錄和表達(dá)下調(diào),而且表達(dá)量高低與患者預(yù)后有聯(lián)系。2.過表達(dá)ACAT1,BDH2和HMGCL可以抑制腎透明細(xì)胞癌的增殖和侵襲能力;過表達(dá)ACAT1和BDH2可以抑制腎透明細(xì)胞癌遷移。3.過表達(dá)ACAT1和HMGCL可以增加腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞中β-羥丁酸的含量。4.外源性酮體β-羥丁酸抑制腎透明癌細(xì)胞增殖能力。
【圖文】：

將酮體代謝相關(guān)基因篩選出來，繪制了熱圖（Heatmap）。通過熱圖，我們發(fā)現(xiàn)相比于正常腎組織，ACAT1、BDH2和HMGCL基因在腎透明細(xì)胞癌中表達(dá)下調(diào)。（如圖1-1）圖1-1：通過GCBI平臺，發(fā)現(xiàn)腎透明細(xì)胞癌芯片中ACAT1、BDH2和HMGCL基因表達(dá)下調(diào)。Figure 1-1: Down-regulation of ACAT1, BDH2 and HMGCL gene expression in renal clear cell carcinomachips by GCBI.

明細(xì)胞癌和癌旁中的mRNA表達(dá)量。運(yùn)用獨(dú)立樣本t檢驗的方法計算出，這三個基因在腎透明細(xì)胞在組織中的mRNA水平的表達(dá)量顯著下調(diào)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，如圖1-2）.圖1-2：TCGA數(shù)據(jù)庫中ACAT1、BDH2和HMGCLL在腎透明細(xì)胞癌和癌旁組織中的表達(dá)量Figure 1-2: ACAT1, BDH2, and HMGCLL expression in renal clear cell carcinoma and adjacent tissues inthe TCGA database2.2 ACAT1、BDH2 和 HMGCL 基因表達(dá)量與臨床參數(shù)的關(guān)系，高表達(dá)的患者預(yù)后更好我們從TCGA數(shù)據(jù)庫中提取了ACAT1、BDH2和HMGCL三個基因在腎透明細(xì)胞癌和癌旁中的mRNA表達(dá)量以及相對應(yīng)的臨床參數(shù)，分析了三個基因的表達(dá)量與臨床參數(shù)的關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn)ACAT1基因在較低的病理分期、較低的G分期、較低的T分期和沒有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的人群中表達(dá)量更高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。BDH2基因在女性，較低的病理分期、較低的T分期、沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和沒有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的人群中表達(dá)量更高，，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。HMGCL基因在較低的病理分期、較低的T分期的人群中表達(dá)量更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。（見表1-1）表1-1：TCGA數(shù)據(jù)庫中ACAT1、BDH2和HMGCLL的表達(dá)量與臨床參數(shù)的關(guān)系。Table 1-1: Relationship between expression levels of ACAT1, BDH2 and HMGCLL and clinical parametersin the TCGA database.
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.11

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊建;劉建和;李沛;王光;楊童欣;石鑫;;早期腎透明細(xì)胞癌的高風(fēng)險因素及預(yù)后分析[J];現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志;2019年02期

2 鄭丹琴;劉志磊;朱松杰;呂錦晶;章文韻;鄧海騰;周韌;;過氧化物還原酶3參與腎透明細(xì)胞癌發(fā)生與發(fā)展的分子機(jī)制[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2019年02期

3 徐輝景;張梅花;余德洪;馮耀霞;;多層螺旋CT檢查診斷腎透明細(xì)胞癌病理對比分析[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2017年12期

4 孫連桃;肖偉利;;巨噬細(xì)胞移動抑制因子在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與意義[J];中國老年學(xué)雜志;2017年24期

5 潘險峰;;內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子水平與腎透明細(xì)胞癌發(fā)生及惡性程度的相關(guān)性[J];實用癌癥雜志;2018年02期

6 陳文峰;;后腹腔鏡腎癌根治術(shù)治療局限性腎透明細(xì)胞癌的臨床療效[J];中國醫(yī)藥指南;2015年31期

7 夏韓;哈木拉提·吐送;王文光;王玉杰;張立東;;漢族、維吾爾族腎透明細(xì)胞癌患者血清差異氨基酸的比較[J];現(xiàn)代泌尿外科雜志;2015年11期

8 蘭英;劉燕娜;曲國田;陳曉慧;;結(jié)節(jié)性硬化癥合并腎透明細(xì)胞癌的超聲表現(xiàn)及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];東南國防醫(yī)藥;2015年02期

9 霍英杰;袁靜;王成健;張玉;趙永強(qiáng);姚文娟;楊景震;;低級別腎透明細(xì)胞癌的3.0TMRI研究[J];臨床放射學(xué)雜志;2014年02期

10 張勇;;腎透明細(xì)胞癌影像學(xué)表現(xiàn)與病理學(xué)改變的相關(guān)性[J];菏澤醫(yī)學(xué)�？茖W(xué)校學(xué)報;2013年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 桂定文;張青漢;;腎透明細(xì)胞癌頭皮轉(zhuǎn)移一例報告[A];第七次中國中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)年會暨第二次廣東省中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)年會論文集[C];2009年

2 劉婧;;腎透明細(xì)胞癌伴全身轉(zhuǎn)移在全身擴(kuò)散加權(quán)成像的影像規(guī)律[A];中華醫(yī)學(xué)會第16次全國放射學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2009年

3 吳俊;梅長林;趙海丹;戴兵;劉亞偉;;多囊蛋白-1在腎透明細(xì)胞癌及常染色體顯性多囊腎病患者體液中含量的比較研究[A];中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

4 柏瑞;歐陜興;林偉光;;雙腎透明細(xì)胞癌胰腺轉(zhuǎn)移一例報告[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三屆全國放射學(xué)大會論文匯編（下冊）[C];2006年

5 何還珠;;腎透明細(xì)胞癌的1例報道[A];2003年全國醫(yī)學(xué)影像技術(shù)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

6 畢偉;徐麗偉;徐春媚;董曉秋;;腎透明細(xì)胞癌超聲造影模式及定量指標(biāo)分析[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第七屆全國腹部超聲學(xué)術(shù)會議學(xué)術(shù)論文匯編[C];2007年

7 徐麗偉;徐春媚;畢偉;董曉秋;;腎透明細(xì)胞癌超聲造影模式與其病理分化程度的相關(guān)性[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第七屆全國腹部超聲學(xué)術(shù)會議學(xué)術(shù)論文匯編[C];2007年

8 鄭宇朋;;腎透明細(xì)胞癌三次轉(zhuǎn)移至鼻腔[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

9 耿江;方祖軍;吳忠;姜昊文;鄭捷;丁強(qiáng);;腎透明細(xì)胞癌術(shù)后遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(附15例報告)[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

10 田野;;腎透明細(xì)胞癌組織中COX-2的表達(dá)與淋巴管生成關(guān)系的研究[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前3條

1 張中橋;Survivin在腎透明細(xì)胞癌中起重要作用[N];中國醫(yī)藥報;2006年

2 王茜;隱瞞病情可能更會嚇壞患者,好心態(tài)是良藥[N];新華每日電訊;2007年

3 本報記者 譚嘉;別把PET—CT當(dāng)體檢“神器”[N];健康報;2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 孫雅玲;COMMD10基因在小鼠和人體組織中的表達(dá)與分布及生物信息挖掘[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

2 臧元偉;eIF3b在腎透明細(xì)胞癌中預(yù)后價值和生物學(xué)作用的研究[D];山東大學(xué);2018年

3 穆中一;LncRNA AFAP1-AS1通過抑制PTEN-AKT信號通路誘導(dǎo)腎透明細(xì)胞癌生長和轉(zhuǎn)移[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

4 肖文;PGC1A/UCP1介導(dǎo)的脂質(zhì)棕色化在腎透明細(xì)胞癌中作用以及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2018年

5 楊帆;miR-543通過靶向KLF6調(diào)控腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和侵襲的機(jī)制研究[D];中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

6 王延?xùn)|;MiR-455-3p.1靶向調(diào)控PIK3R1基因促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移的研究[D];貴州醫(yī)科大學(xué);2018年

7 陳奇?zhèn)?應(yīng)用力學(xué)模型研究腎透明細(xì)胞癌微環(huán)境中淋巴細(xì)胞與腫瘤生長介導(dǎo)的壓力對腫瘤細(xì)胞作用的分子機(jī)制[D];大連醫(yī)科大學(xué);2018年

8 楊海玲;基于芯片數(shù)據(jù)對腎癌轉(zhuǎn)移和非轉(zhuǎn)移的生物網(wǎng)絡(luò)分析及代謝通路分析[D];吉林大學(xué);2018年

9 李家寬;長鏈非編碼RNA MRCCAT1通過解除NPR3對MAPK通路的抑制而促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移的生物學(xué)機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

10 蔣照輝;色素上皮衍生因子在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及影響[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳展;ABAT基因在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其對腎癌細(xì)胞增殖、遷移、代謝的影響[D];廈門大學(xué);2018年

2 崔強(qiáng);NEDD4L在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及作用研究[D];廈門大學(xué);2018年

3 徐明彬;術(shù)前外周血淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞比值和白蛋白在腎透明細(xì)胞癌預(yù)后評估中的價值[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

4 崔萬猛;酮體代謝關(guān)鍵基因抑制腎透明細(xì)胞癌增殖和轉(zhuǎn)移的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

5 沈培永;腎透明細(xì)胞癌的CT表現(xiàn)與病理分級相關(guān)性的探討及與腎乏脂血管平滑肌脂肪瘤的鑒別診斷[D];蘇州大學(xué);2018年

6 徐明哲;磁共振DWI和DTI在腎臟腫瘤診斷中的價值[D];大連醫(yī)科大學(xué);2018年

7 MOHAMED ABDULLAHI MOHAMUD;單源雙能CT平掃直方圖分析評估腎透明細(xì)胞癌（ccRCC）分級的作用[D];大連醫(yī)科大學(xué);2018年

8 吳榮祖;術(shù)前前白蛋白在腎透明細(xì)胞癌患者預(yù)后中的意義[D];蘇州大學(xué);2018年

9 宋群;腎透明細(xì)胞癌患者血清miRNAlet-7a的表達(dá)及其診斷價值[D];湖南師范大學(xué);2018年

10 趙斌;PIM1通過靶向細(xì)胞核中的Smads和c-Myc來調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程并增強(qiáng)腎透明細(xì)胞癌的腫瘤活動[D];大連醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號：2635476