【摘要】：目的:探討鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體-7(ZnT7)在高糖(HG)誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞(NRK-52E)轉(zhuǎn)分化(EMT)中的作用,并分析其機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法:雙重?zé)晒馊旧綔y(cè)正常大鼠腎小管上皮細(xì)胞(NRK-52E)中ZnT7的亞細(xì)胞定位。在正常大鼠腎小管上皮細(xì)胞中高糖(HG,30 mM)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)分化(EMT)。hZnT7-EGFP和siRNA分別轉(zhuǎn)染、干擾NRK-52E細(xì)胞制造ZnT7過(guò)表達(dá)和沉默模型。Western blot檢測(cè)ZnT7和EMT指標(biāo)的表達(dá),以及MAPK/ERK和TGF-β/Smad信號(hào)通路。結(jié)果:1、HG誘導(dǎo)NRK-52E細(xì)胞中Zn~(2+)水平下降。30 Mm HG刺激NRK-52E細(xì)胞12 h,24 h,48 h和72 h,TSQ熒光染色顯示HG刺激24h后,與對(duì)照組相比細(xì)胞內(nèi)Zn~(2+)水平明顯下降。2、HG誘導(dǎo)NRK-52E細(xì)胞中ZnT7表達(dá)水平上調(diào)以及干擾、轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)。Western blot顯示與對(duì)照組相比,HG刺激48h后NRK-52E細(xì)胞中ZnT7的表達(dá)水平上調(diào),轉(zhuǎn)染、干擾48h后效率最高,把48h作為后期實(shí)驗(yàn)干擾、轉(zhuǎn)染的時(shí)間點(diǎn)。3、ZnT7在NRK-52E細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位。熒光圖顯示ZnT7在NRK-52E細(xì)胞核周區(qū)域的高爾基體上有表達(dá)。4、NRK-52E細(xì)胞中Zn~(2+)水平。熒光圖顯示在HG組,ZnT7低表達(dá)組,ZnT7低表達(dá)/HG組Zn~(2+)著色斑點(diǎn)分布在NRK-52E細(xì)胞核周區(qū)域。ZnT7過(guò)表達(dá)組Zn~(2+)著色最強(qiáng),ZnT7低表達(dá)/HG組Zn~(2+)著色最弱。5、ZnT7對(duì)HG誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞的EMT有保護(hù)作用。Western blot結(jié)果顯示與對(duì)照組相比ZnT7過(guò)表達(dá)顯著減弱了HG誘導(dǎo)的EMT,如α-SMA和vimentin表達(dá)上調(diào),E-cadherin表達(dá)下調(diào)。6、ZnT7對(duì)TGF-β/Smad信號(hào)通路的影響。Western blot結(jié)果顯示與對(duì)照組相比,HG組p-Smad2/3表達(dá)顯著上調(diào),ZnT7過(guò)表達(dá)顯著抑制了HG誘導(dǎo)的p-Smad2/3水平;HG組,HG/ZnT7過(guò)表達(dá)組增強(qiáng)了p-Smad2/3的表達(dá)和HG誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞的EMT。但是TGF-βI受體的抑制劑10μM SB43152共處理細(xì)胞后,有效的抑制了Smad2/3的磷酸化和HG誘導(dǎo)的EMT。7、ZnT7對(duì)MAPK信號(hào)通路的而影響。Western blot結(jié)果顯示與對(duì)照相比,HG處理組phospho-p38 MAPK和phospho-ERK的表達(dá)顯著上調(diào),相反,ZnT7過(guò)表達(dá)顯著抑制phospho-ERK的表達(dá)。但是ERK的抑制劑PD98059共處理后,降低了HG誘導(dǎo)的EMT。結(jié)論:1、ZnT7在NRK-52E的高爾基體上有表達(dá)。2、ZnT7對(duì)HG誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞的EMT有保護(hù)作用。3、ZnT7通過(guò)調(diào)節(jié)TGF-β/Smad和MAPK/ERK信號(hào)通路抑制HG誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞的EMT。
【圖文】：

圖 2 ：a 和 b， NRK-52E 細(xì)胞 30 mM HG 處理 12 h，24 h， 48 h 和 72 h，，Western blot檢測(cè) ZnT7 的表達(dá) (n=10)；圖 c-f， Western blot 檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率(n=3)。所有的實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次。(* P < 0.05 與對(duì)照組相比； ** P < 0.001 與對(duì)照組相比)3.3 ZnT7 在 NRK-52E 細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位有文獻(xiàn)報(bào)道 ZnT7 在多種細(xì)胞的高爾基體上有表達(dá)，為了檢測(cè) NRK-52E 細(xì)胞中 ZnT7 的亞細(xì)胞定位，雙標(biāo)記 ZnT7 和 TGN38 (高爾基體 Marker 蛋白)。熒光結(jié)果顯示 ZnT7 在 NRK-52E 細(xì)胞的高爾基體上有表達(dá)(圖 3a-d)。

圖 2 ：a 和 b， NRK-52E 細(xì)胞 30 mM HG 處理 12 h，24 h， 48 h 和 72 h，Western blot檢測(cè) ZnT7 的表達(dá) (n=10)；圖 c-f， Western blot 檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率(n=3)。所有的實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次。(* P < 0.05 與對(duì)照組相比； ** P < 0.001 與對(duì)照組相比)3.3 ZnT7 在 NRK-52E 細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位有文獻(xiàn)報(bào)道 ZnT7 在多種細(xì)胞的高爾基體上有表達(dá)，為了檢測(cè) NRK-52E 細(xì)胞中 ZnT7 的亞細(xì)胞定位，雙標(biāo)記 ZnT7 和 TGN38 (高爾基體 Marker 蛋白)。熒光結(jié)果顯示 ZnT7 在 NRK-52E 細(xì)胞的高爾基體上有表達(dá)(圖 3a-d)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R587.2;R692.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 Kyria Jayanne Clímaco Cruz;Ana Raquel Soares de Oliveira;Dilina do Nascimento Marreiro;;Antioxidant role of zinc in diabetes mellitus[J];World Journal of Diabetes;2015年02期

2 Samy L Habib;;Diabetes and renal tubular cell apoptosis[J];World Journal of Diabetes;2013年02期

3 秦海宏,王福O

本文編號(hào)：2631054