【摘要】：[目的]本研究通過建立大鼠腎臟缺血再灌注損傷(Renal ischemia-reperfusion injury,RIRI)模型,探討重組人促紅細(xì)胞生成素(Recombineant human erythropoietih,rhEPO)和褪黑素(Melatonin,Mel)對大鼠腎臟缺血再灌注損傷的作用,并對其可能機(jī)制進(jìn)行初步研究。[方法]健康雄性SD(Sprague-dawly)大鼠共32只,隨機(jī)分成4組,每組8只,分別為:(1)假手術(shù)組(Sham組):麻醉后以腹正中線為切口,逐層開腹,將部分腸管移出體外,游離兩側(cè)腎臟,分離左右兩側(cè)腎蒂,并不結(jié)扎,暴露切口 45分鐘后縫合切口;(2)缺血再灌注組(IR組):麻醉后以腹正中線為切口,逐層開腹,將部分腸管移出體外,游離兩側(cè)腎臟,分離左右兩側(cè)腎蒂,用無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉兩側(cè)腎蒂45分鐘造成腎缺血(腎臟由鮮紅色變成暗紅色),45分鐘后松開無創(chuàng)動(dòng)脈夾實(shí)行再灌注,松開動(dòng)脈夾5分鐘內(nèi)肉眼觀測腎臟顏色變化,若腎灌注后顏色由暗紅色轉(zhuǎn)為鮮紅色,表示灌注成功,然后逐層縫合切口;(3)促紅細(xì)胞生成素組(EPO組):在術(shù)前24小時(shí)給予重組人促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)(3000u/kg)腹腔注射預(yù)處理,注射24小時(shí)后建立大鼠缺血再灌注模型,手術(shù)方式參照IR組;(4)褪黑素組(Mel組):在術(shù)前24小時(shí)給予褪黑素(Melatonin,Mel)(20mg/kg)腹腔注射預(yù)處理,注射24小時(shí)后建立大鼠缺血再灌注模型,手術(shù)方式參照IR組。假手術(shù)組和缺血再灌注組分別在術(shù)前24小時(shí)給予等量生理鹽水(0.7ml/kg)腹腔注射。各組大鼠在腎臟恢復(fù)血液灌注24小時(shí)后處死,同時(shí)留取血清和腎組織標(biāo)本。測定各組大鼠血清肌酐(serum creatinine Values,Scr)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN);將各組腎臟標(biāo)本進(jìn)行蘇木精-伊紅(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色,觀察其病理學(xué)改變;免疫組化分析法測定血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1),觀察其在腎臟組織中的表達(dá)情況。[結(jié)果]腎功能結(jié)果分析:與Sham組比較,IR組血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與IR組比較,EPO組和Mel組血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與EPO組相比較、Mel組血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)無明顯變化,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。腎臟組織形態(tài)學(xué)結(jié)果分析:Sham組大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)基本完整,未見明顯異常。與Sham組大鼠腎臟組織相比,IR組腎臟組織出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變,可見腎小管上皮細(xì)胞及腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞明顯腫脹、部分甚至壞死,大量管型形成,腎間質(zhì)充血、水腫、大量炎癥細(xì)胞浸潤。與IR組大鼠腎臟組織相比,EPO組和Mel組腎臟組織可見少量炎癥細(xì)胞浸潤,組織損傷程度明顯減輕。血紅素加氧酶-1(HO-1)在腎臟表達(dá)情況結(jié)果分析:在Sham組僅見少量HO-1表達(dá),與Sham組相比較,IR組腎臟HO-1表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與IR組相比較,EPO組和Mel組腎臟HO-1表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與EPO組相比較,Mel組的腎臟HO-1表達(dá)無明顯差異,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。[結(jié)論]1.大鼠腎臟缺血再灌注損傷模型制備成功,腎臟缺血再灌注損傷可導(dǎo)致血清肌酐及尿素氮升高,引起腎功能損傷,HO-1在腎臟的表達(dá)增加。2.rhEPO預(yù)處理能顯著減輕腎功能損害程度,在病理上明顯減輕腎臟損傷。3.Mel預(yù)處理能顯著減輕腎功能損害程度,在病理上明顯減輕腎臟損傷。4.rhEPO和Mel可以增加HO-1的表達(dá),我們可以推測rhEPO和Mel通過誘導(dǎo)HO-1在腎臟的表達(dá)減輕氧化應(yīng)激反應(yīng),起到對腎臟IRI的保護(hù)作用。5.rhEPO和Mel對腎臟IRI的保護(hù)程度基本相同。
【圖文】：

與Ｓｈａｍ比較，ＩＲ組可見腎小管細(xì)胞明顯腫脹，部位出現(xiàn)變性，甚至壞死，逡逑管腔變狹窄，間質(zhì)充血水腫，周圍可見大量炎癥細(xì)胞浸潤，伴大量紅細(xì)胞滲出（見逡逑圖８－９）。ＥＰ０組和Ｍｅｌ組病理改變基本相同，，腎組織結(jié)構(gòu)基本完整，可見腎小管逡逑上皮細(xì)胞輕度水腫，無變性、壞死，管腔稍狹窄，部分間質(zhì)充血水腫，伴少量炎逡逑癥細(xì)胞浸潤（見圖１０－１３）。與Ｓｈａｍ組比較，ＥＰ０組和Ｍｅｌ組腎臟病理改變輕微，逡逑且病理改變程度明顯輕于ＩＲ組。逡逑１９逡逑

注：圖６、７為Ｓｈａｍ組可見腎組織切片未見明顯異常，腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)清楚，逡逑形態(tài)基本正常，腎小管上皮細(xì)胞未見腫脹，無變性、壞死，無管腔狹窄，間質(zhì)無逡逑充血水腫，無炎癥細(xì)胞浸潤，無紅細(xì)胞滲出。（ＨＥｘ２００）逡逑
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R692

【參考文獻(xiàn)】

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1 王穎;李志輝;鄧旭;康志娟;夏團(tuán)紅;銀燕;;缺血預(yù)處理對大鼠缺血再灌注腎損傷誘發(fā)凋亡的保護(hù)機(jī)制[J];中華實(shí)用兒科臨床雜志;2016年05期

2 李強(qiáng);靳書濱;陳晶;王杰;霍韶軍;張瑞剛;;刺五加注射液預(yù)處理在大鼠腎缺血再灌注損傷中的抗氧化作用及其對腫瘤壞死因子-α的影響[J];海南醫(yī)學(xué);2015年07期

3 楊紅英;賈孟良;謝守霞;黃毅;謝立;;褪黑素對急性腎臟缺血-再灌注損傷小鼠熱休克蛋白表達(dá)的影響[J];中國藥業(yè);2011年21期

本文編號(hào)：2620726