【摘要】：細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)于細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、及它們之間的相互作用都極為重要,并受諸多因子的控制。CREB,即第二信使cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白,是核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子。CREB由341個(gè)氨基酸構(gòu)成,該蛋白質(zhì)屬于富含亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)(bZIP)超蛋白家族成員之一。CREB的二級(jí)結(jié)構(gòu)有兩個(gè)功能區(qū)構(gòu)成：C端富含堿性氨基酸,其中包含一個(gè)亮氨酸拉鏈區(qū)(Leucine zipper region),它是一段約50個(gè)氨基酸殘基組成的序列,亮氨酸在其中是周期性出現(xiàn)的。該區(qū)域與DNA的親和力強(qiáng),能夠形成卷曲的螺旋構(gòu)象,被稱(chēng)為DNA結(jié)構(gòu)域；N端是富含酸性氨基酸的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)域,該區(qū)可以細(xì)分為以下幾個(gè)結(jié)構(gòu)域,KID區(qū)(多種激酶誘導(dǎo)結(jié)構(gòu)域)、X區(qū)(拮抗KID區(qū)的功能)、A區(qū)(增強(qiáng)CREB轉(zhuǎn)錄功能)、Q3區(qū)(刺激轉(zhuǎn)錄活性的關(guān)鍵部位)、Q2區(qū)(輔助轉(zhuǎn)錄作用)和PRO區(qū)(協(xié)助發(fā)揮轉(zhuǎn)錄作用),這些區(qū)域協(xié)調(diào)配合共同對(duì)轉(zhuǎn)錄調(diào)控起作用。 作為核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的CREB參與細(xì)胞的各種生命活動(dòng)。已有研究發(fā)現(xiàn)CREB依賴(lài)其磷酸化,對(duì)靶基因上的啟動(dòng)子調(diào)控,最終影響各種細(xì)胞周期相關(guān)蛋白如CDKs, Cyclins, CKIs的轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的周期。CREB對(duì)細(xì)胞的調(diào)控還涉及到細(xì)胞凋亡。有研究表明在人體心肌細(xì)胞中,過(guò)氧化酶體能刺激受體α(PPAR α)的過(guò)表達(dá),受體α通過(guò)抑制Bcl-2誘發(fā)細(xì)胞凋亡,而上調(diào)心肌細(xì)胞中CREB的表達(dá)能夠拮抗受體α對(duì)Bcl-2的抑制作用,從而對(duì)心肌細(xì)胞的凋亡起保護(hù)作用。此外,CREB與腫瘤細(xì)胞的凋亡也密切相關(guān),關(guān)于非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(NSCLC)的研究發(fā)現(xiàn),用RNAi抑制CREB的表達(dá)后,能夠抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株的凋亡。CREB與細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的相關(guān)性,以及與腫瘤細(xì)胞凋亡的密切關(guān)聯(lián),揭示了CREB在癌癥發(fā)生中的重要作用,為本實(shí)驗(yàn)利用DU145細(xì)胞來(lái)研究CREB在前列腺癌中的作用提供依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立PP2A的正調(diào)控因子CREB的過(guò)表達(dá)細(xì)胞系DU145-CREB及對(duì)照組空載細(xì)胞系DU145-Neo進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)測(cè)定、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)以及蛋白質(zhì)印跡等實(shí)驗(yàn),在細(xì)胞水平,蛋白水平以及組織水平探究CREB在前列腺癌細(xì)胞DU145中的調(diào)控機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)CREB的DU145細(xì)胞比空載的DU145細(xì)胞的增長(zhǎng)速度慢,DU145-CREB細(xì)胞系比空載DU145-Neo細(xì)胞系的遷移能力弱,且裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)注射DU145-CREB細(xì)胞系的裸鼠體內(nèi)的腫瘤比注射空載DU145-Neo細(xì)胞系的腫瘤小。之后對(duì)所取腫瘤進(jìn)行石蠟切片,發(fā)現(xiàn)注射DU145-Neo細(xì)胞所成的腫瘤組織比注射DU145-CREB細(xì)胞所成的腫瘤組織內(nèi)的血管分布明顯,細(xì)胞數(shù)目更多,處在分裂期的細(xì)胞數(shù)目也多。初步可推測(cè)CREB具有抑制前列腺癌生成的效果。為進(jìn)一步探究前列腺癌的發(fā)生與調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ),也為前列腺癌的治療提供理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 王柏婧;魏群;;Ser/Thr蛋白磷酸酶PPP家族結(jié)構(gòu)研究新進(jìn)展[J];中國(guó)科學(xué)(C輯:生命科學(xué));2008年07期

2 余瑞元,王燕峰,徐長(zhǎng)法;CREB研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物工程雜志;2003年01期

3 張志文;;激素第二信使cAMP的發(fā)現(xiàn)[J];生物學(xué)通報(bào);2010年07期

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本文編號(hào)：2528320