【摘要】：目的通過流式微球載體技術(shù)檢測體外淋巴細胞刺激上清液白細胞介素2(IL-2)和IL-6水平,探索預測移植腎急性排斥反應的方法。方法 52例腎移植受者(急性排斥反應組22例和腎功能穩(wěn)定組30例)的外周血淋巴細胞經(jīng)佛波酯和離子霉素體外刺激8 h,應用流式微球載體技術(shù)檢測培養(yǎng)液上清中的IL-2和IL-6的含量。比較刺激后上清液與未經(jīng)刺激的血漿中IL-2和IL-6表達水平及其預測急性排斥反應的能力。結(jié)果經(jīng)刺激后的急性排斥反應組IL-2和IL-6的水平均顯著高于腎功能穩(wěn)定組,各組淋巴細胞刺激上清液IL-2和IL-6水平顯著高于相應未刺激的患者血漿中的水平;刺激后,IL-2和IL-6聯(lián)合預測排斥反應的靈敏度和特異度分別為81.8%和90%,均大于各自單獨預測排斥反應的靈敏度和特異度。結(jié)論建立了流式微球載體技術(shù)檢測體外淋巴細胞培養(yǎng)液IL-2、IL-6的方法,兩者聯(lián)合起來預測移植腎急性排斥反應具有良好的靈敏度和特異度。
【圖文】：

欏２捎檬蓯哉吖ぷ魈卣?receiveroperatingcharacteristic，ＲOC)曲線來評價IL-2聯(lián)合IL-6預測腎移植術(shù)后急性排斥反應的價值。P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2．1IL-2和IL-6在刺激后各組淋巴細胞培養(yǎng)液上清中的水平顯著高于相應未經(jīng)刺激血漿的水平腎移植受者的外周血淋巴細胞經(jīng)過10ng/mLPMA、1μg/mL離子霉素刺激8h后，收集培養(yǎng)上清液，應用流式微載體技術(shù)進行上清液IL-2和IL-6表達水平的檢測。AＲ組IL-2熒光強度為77．11±38．00，STA組水平為36．25±27．25，AＲ組水平顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0．01，圖1)。AＲ組IL-6相對熒光強度為252．48±98．81，STA組為122．19±87．79，AＲ組IL-6也顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0．01，圖1)。1:陰性對照血清;2:健康人的血清;3:AＲ組患者血清;4:STA組患者血清;5:設(shè)門;6:只加微球;7:只加二抗及PE．圖1淋巴細胞培養(yǎng)上清液的IL-2和IL-6流式微球載體技術(shù)檢測圖將淋巴細胞刺激實驗同一患者未經(jīng)刺激的血漿(在進行淋巴細胞刺激前留取同一患者的血漿)應用流式微球載體技術(shù)檢測IL-2、IL-6的表達強度。未經(jīng)刺激的血漿IL-2熒光強度值在AＲ組為15．98±12．91，STA組為11．06±7．75，差異無統(tǒng)計學意義(P=0．093)。但未經(jīng)刺激的AＲ組患者血漿IL-6熒光強度為37．26±25．27，STA組為21．48±17．66，顯著高于STA組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)。刺激后STA組及AＲ組的細胞培養(yǎng)液上清IL-2、IL-6熒光強度值均分別顯著高于相應未刺激的患者血漿的熒光強度值(P＜0．01)。在STA組，刺激后細胞培養(yǎng)液上清IL-2、IL-6的水平是未經(jīng)刺激的血漿中IL-2、IL-6水平的3．28倍及5．69倍。在AＲ組刺激后上清液IL-2、IL-6的水平是未經(jīng)刺激的血漿中IL-2、IL-6水平的4．83倍及6．78倍。2．2刺激后IL-

性排斥反應ＲOC曲線比較;B:刺激后與未刺激的IL-6預測急性排斥反應ＲOC曲線比較．圖2刺激后與未刺激的IL-2和IL-6預測急性排斥反應ＲOC曲線比較2．3刺激后IL-6聯(lián)合IL-2提高預測急性排斥反應的能力將刺激后IL-2和IL-6這兩個指標聯(lián)合建立二元logistic回歸模型，試圖提高預測排斥反應的能力。經(jīng)過比較ＲOC曲線分析聯(lián)合指標二元logistic回歸模型預測排斥反應的AUC(圖3)，我們發(fā)現(xiàn)IL-6聯(lián)合IL-2預測排斥反應的AUC最大(0．903)，，聯(lián)合后的靈敏度和特異度分別為81．8%和90%，均大于各自單獨預測排斥反應的靈敏度和特異度。圖3IL-6聯(lián)合IL-2與其各自單獨預測排斥反應ＲOC曲線比較3討論體液中的細胞因子是所有免疫和炎癥反應的誘導和效應階段的關(guān)鍵介質(zhì)［10－11］。因此，越來越多的研究試圖在體液中尋找生物標志分子［12－14］。目前已經(jīng)確定IL-2［15－16］和IL-6在細胞介導的排斥反應中具有重要作用，過多的IL-6、效應T細胞的激活與調(diào)節(jié)性T細胞的抑制有關(guān)［17－18］。本研究目的是在體外刺激腎移植受者的外周血淋巴細胞，通過流式微球載體技術(shù)檢測細胞培養(yǎng)液中IL-2和IL-6表達的差異，來預測急性排斥反應。目前傳統(tǒng)的免疫監(jiān)測方法是直接采集患者的血液或者尿液進行指標的檢測。由于患者外周血的免疫細胞和分子受到免疫抑制劑的抑制，表達水平降低，致使腎功能正�；颊吆图毙耘懦饣颊唧w液的免疫標志分子表達量的差距較小，這種小的差距導致被檢測指標診斷或預測急性排斥反應的敏感度與特異度偏低［7］。本研究中同一患者未經(jīng)刺激的血漿的IL-2、IL-6的表達強度顯著低于刺激后的上清液的水平。未經(jīng)刺激IL-2預測急性排斥反應的ＲOC曲線評價無統(tǒng)計學意義。盡管未經(jīng)刺激IL-6預測急性排斥反應的ＲOC曲線評價有統(tǒng)計學?
【作者單位】： 陜西省人民醫(yī)院骨科;西安交通大學第一附屬醫(yī)院腎臟病醫(yī)院腎移植科;陜西省人民醫(yī)院陜西省臨床檢驗中心;陜西省人民醫(yī)院泌尿外科;陜西省人民醫(yī)院輸血科;
【基金】：國家自然科學基金(81670681) 高等學校博士學科點專項科研基金(20130201110059)
【分類號】：R699.2

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本文編號：2518773