發(fā)布時(shí)間：2018-10-13 14:41

【摘要】：目的通過構(gòu)建多功能共載藥聚合物膠束,高效包載多西他賽與核干因子,并為膠束添加靶向基團(tuán),研究其對(duì)于前列腺癌細(xì)胞的影響。方法1.聚合物的構(gòu)建及修飾:以ε-己內(nèi)酯和γ-甲酸叔丁酯-ε-己內(nèi)酯(tBuCCL)為混合單體,以一端為乙縮醛的PEO(Acetal-PEO,Mw=8655 g/mol)為引發(fā)劑進(jìn)行聚合反應(yīng),形成具有羧基官能化的大分子長鏈結(jié)構(gòu)PEO-b-PCL,并對(duì)其進(jìn)行化學(xué)基團(tuán)的修飾,為PCL疏水端修飾帶有正電性的精胺(Spermine,SP)基團(tuán)以結(jié)合siRNA,在PEO親水端分別修飾DCL多肽及TAT多肽以實(shí)現(xiàn)靶向及穿膜。分別通過核磁氫譜(1H NMR)、傅立葉紅外光譜(FT-IR)、凝膠滲透色譜儀(GPC)對(duì)各步產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、分子量及分子量分布進(jìn)行表征,同時(shí)驗(yàn)證各肽段修飾程度。2.多功能共載藥膠束的構(gòu)建及其物理化學(xué)性質(zhì)研究:利用制備共載藥膠束,使其同時(shí)攜載化療藥物多西他賽(DTX)和沉默核干因子(NS)的NS-siRNA。通過熒光探針法測(cè)定臨界膠束濃度,通過DLS法測(cè)量空膠束和共載膠束的粒徑、Zeta電位,利用高效液相色譜(HPLC)測(cè)算載藥率和包封率,利用凝膠電泳探索膠束與藥物和siRNA結(jié)合的最佳比例。3.體外細(xì)胞水平評(píng)價(jià)共載藥膠束對(duì)去勢(shì)抵抗性前列腺癌細(xì)胞的影響:通過MTT法評(píng)價(jià)聚合物膠束的細(xì)胞相容性,同時(shí)驗(yàn)證共載藥膠束對(duì)細(xì)胞活力的影響,通過RT-qPCR證明共載藥膠束對(duì)于NS基因表達(dá)的影響,Western blot證明其對(duì)NS蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果Acetal-PEO-b-PCL聚合物主鏈的1H NMR譜圖1.20 ppm處可見乙氧基上甲基特征峰,在4.64 ppm處則有縮醛叔碳上氫原子的特征峰,證實(shí)其結(jié)構(gòu)分子量為23311 g/mol,修飾SP后1H NMR譜圖在3.0-3.3 ppm處出現(xiàn)精胺特征峰,證實(shí)SP已連接。修飾DCL及TAT多肽后,紅外光譜顯示1500-1560 cm-1及1630-1690 cm-1處出現(xiàn)了酰胺特征峰,證實(shí)多肽鏈段已連接。聚合物臨界膠束濃度為1.17μg/mL,共載藥膠束的粒徑為152.8 nm,Zeta電位在修飾SP前為-12.8mv,修飾SP后變?yōu)?15.0 mv。凝膠電泳證實(shí),膠束攜載NS-siRNA呈電中性時(shí)N/P比為25:1。經(jīng)測(cè)算,膠束的載藥率為7.62%,包封率20.27%。MTT顯示聚合物濃度為256μg/mL時(shí),細(xì)胞存活率仍可保持在80%以上,而共載膠束在其有效藥物濃度為50μg/m L時(shí)即可使細(xì)胞存活率降至20%,顯著低于等量DTX或NS-siRNA。RT-qPCR表明,共載藥聚合物膠束降低了PCa細(xì)胞中NS基因的表達(dá),而Western blot證明其下調(diào)了NS蛋白的表達(dá),相比于Lipo 2000脂質(zhì)體,其對(duì)于C4-2細(xì)胞的表達(dá)效果要高于PC-3細(xì)胞。結(jié)論1.基于PEO-PCL的聚合物可以形成膠束形態(tài),并具有良好的理化性質(zhì)和較好的生物相容性,可以作為疏水性藥物的運(yùn)載體。2.PEO-PCL聚合物鏈段在添加了SP基團(tuán)后,能夠以聚合物膠束的形式同時(shí)有效攜載疏水性藥物DTX及anti-NS siRNA,對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性,且調(diào)低NS基因及蛋白的表達(dá),其效果優(yōu)于單純DTX藥物或anti-NS siRNA本身,具有協(xié)同增效作用。3.通過對(duì)聚合物膠束的親水端修飾DCL和TAT多肽,能夠有效提升其對(duì)于去勢(shì)抵抗性前列腺癌C4-2細(xì)胞的靶向性。4、帶有靶頭的共載藥膠束能夠最大限度的發(fā)揮其攜載化療藥物和基因藥物的能力,起到抑制和破壞去勢(shì)抵抗性前列腺癌細(xì)胞的效果,具有應(yīng)用于CRPC的治療的潛力。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

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1 錢蘇波;沈海波;齊雋;;比卡魯胺在去勢(shì)抵抗性前列腺癌治療中的應(yīng)用[J];現(xiàn)代泌尿外科雜志;2014年11期

2 劉冉錄;徐勇;張志宏;王萌;孫建濤;張s，

本文編號(hào)：2268986