發(fā)布時(shí)間：2018-06-14 07:02

  本文選題：miR-122 + 腎透明細(xì)胞癌�。� 參考：《吉林大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma, RCC)是起源于腎實(shí)質(zhì)泌尿小管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，簡稱腎癌；70％為腎透明細(xì)胞癌(Renal clear cell carcinoma, RCCC)。在我國腎癌發(fā)病率呈逐年增多的趨勢。由于腎細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制不完全清楚，治療手段仍以手術(shù)為主。50%的患者首次就診時(shí)已經(jīng)屬于晚期腎細(xì)胞癌喪失手術(shù)時(shí)機(jī)，因此探索新的生物治療方法已經(jīng)成為臨床上迫切需要解決的實(shí)際問題。 MicroRNAs (miRNAs)是一類重要的非編碼的小RNA，長度在19到25個(gè)核苷酸，可與目標(biāo)mRNA在3’非編碼區(qū)(untranslated regions, UTR)發(fā)生連接，從而引起mRNA的降解或抑制其翻譯。越來越多的證據(jù)表明，許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與miRNAs的異常表達(dá)密切相關(guān)，其可作為癌基因或抑癌基因在腫瘤中發(fā)揮作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)miR-122在腎癌組織中的表達(dá)上升，提示腎癌組織中miR-122被激活。但是目前miR-122在腎透明細(xì)胞癌組織中的功能和表達(dá)的研究很少，與腎透明細(xì)胞癌增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的具體關(guān)系迄今尚不清楚。 方法： 本研究應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測miR-122在腎透明細(xì)胞癌及癌旁非腫瘤組織中表達(dá)情況，研究其與臨床分期、病理分級之間的關(guān)系。同時(shí)檢測各腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株中miR-122的表達(dá)情況，篩選合適的體外腎透明癌細(xì)胞模型，研究其對腎透明癌細(xì)胞的生物學(xué)性狀的影響，如細(xì)胞增殖能力、集落形成能力和侵襲轉(zhuǎn)移能力等。繼之用生物信息學(xué)方法預(yù)測miR-122可能的靶基因，并進(jìn)行初步研究來探討其對腎透明癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移中可能的分子機(jī)制，為腎透明細(xì)胞癌的早期診斷和治療提供新的思路。 結(jié)果： 實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腎透明細(xì)胞癌組織中的miR-122的相對表達(dá)量為(4.04±2.23)，與癌旁非腫瘤組織比較有顯著差異(P 0.05)。根據(jù)病理分級進(jìn)行分組，高分化組的miR-122相對表達(dá)量為(3.24±1.32)，中低分化組相對表達(dá)量為(5.05±2.76)，兩者沒有顯著差異(P0.05)。在不同臨床分期組合樣本中，I期腎透明細(xì)胞癌中miR-122的相對含量為(3.49±1.49)，II~III期腎透明細(xì)胞癌中的相對含量為(5.69±3.35)，沒有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。實(shí)時(shí)定量PCR 結(jié)果顯示： 腎透明癌細(xì)胞株Caki-2細(xì)胞中miR-122的表達(dá)水平最高，而A498和786-O細(xì)胞中miR-122的表達(dá)水平相對其他細(xì)胞較低，因此A498和786-O用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。不同濃度miR-122或陰性對照miR-Con轉(zhuǎn)染72h后，有效地促進(jìn)A498和786-O細(xì)胞的增殖。生長曲線結(jié)果顯示：與miR-Con比較，miR-122促進(jìn)A498和786-O細(xì)胞增殖，并呈時(shí)間依賴性。而anti-miR-122轉(zhuǎn)染可抑制A498和786-O細(xì)胞增殖。集落形成能力結(jié)果顯示：，轉(zhuǎn)染miR-122的A498和786-O細(xì)胞集落形成個(gè)數(shù)分別為160.67±7.37個(gè)和176.67±8.50個(gè)，明顯高于陰性對照組(127.33±3.21個(gè)和141.67±5.03個(gè))。轉(zhuǎn)染anti-miR-122組A498和786-O細(xì)胞集落形成個(gè)數(shù)分別為93.67±5.69個(gè)和104.67±4.73個(gè),明顯低于anti-miR-Con組細(xì)胞集落形成個(gè)數(shù)為(128.67±4.73和142.00±3.00)。Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)表明，在A498和786-O細(xì)胞，轉(zhuǎn)染陰性對照miR-Con組穿過Matrigel膠侵襲的細(xì)胞數(shù)分別為157.67±9.50個(gè)和108.00±4.58個(gè)，而轉(zhuǎn)染miR-122組細(xì)胞組穿過Matrigel膠侵襲的細(xì)胞數(shù)分別為203.33±13.80個(gè)和137.33±5.03個(gè)，明顯高于陰性對照組（P 0.01）。Transwell小室轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)表明，在A498和786-O細(xì)胞，轉(zhuǎn)染陰性對照miR-Con組穿過Collagen IV轉(zhuǎn)移的細(xì)胞數(shù)分別為183.00±5.29個(gè)和146.67±6.03個(gè)，，而轉(zhuǎn)染miR-122組細(xì)胞組穿過Collagen IV轉(zhuǎn)移的細(xì)胞數(shù)分別為242.00±11.53個(gè)和185.00±6.56個(gè)，明顯高于陰性對照組（P 0.01）。生物軟件預(yù)測miR-122潛在的靶基因有200多個(gè)，Western blot結(jié)果證實(shí)，與miR-Con轉(zhuǎn)染組細(xì)胞比較，miR-122轉(zhuǎn)染組A498和786-O細(xì)胞中p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K和p-4E-BP1表達(dá)明顯增加。 結(jié)論： (1)腎透明細(xì)胞癌組織中miR-122的相對表達(dá)水平較癌旁非腫瘤組織明顯上調(diào)，提示miR-122的表達(dá)上調(diào)可能與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。miR-122的表達(dá)水平與腎透明細(xì)胞癌的病理分級及臨床分期組合無顯著相關(guān)性。 (2)腎透明癌A498和786-O細(xì)胞中miR-122的表達(dá)水平較其他細(xì)胞ACHN、Caki-1、Caki-2較低，用于后續(xù)研究。 (3)過表達(dá)miR-122促進(jìn)A498和786-O細(xì)胞增殖和集落形成能力，而Anti-miR-122轉(zhuǎn)染后抑制A498和786-O細(xì)胞增殖和集落形成能力。 (4).過表達(dá)miR-122促進(jìn)A498和786-O細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。 (5) Akt/mTOR信號通路是miR-122潛在的靶基因。
[Abstract]:Renal cell carcinoma (RCC) is a malignant tumor originating in the renal tubule epithelial cells, referred to as renal cell carcinoma, and 70% is clear cell carcinoma of the kidney (Renal clear cell carcinoma, RCCC). The incidence of renal cancer in China is increasing year by year. The first.50% patients are the first time to lose the operation of advanced renal cell carcinoma, so exploring new biological treatments has become an urgent problem to be solved in the clinic.
MicroRNAs (miRNAs) is an important class of important non coding small RNA, with a length of 19 to 25 nucleotides, which can be linked with the target mRNA in the 3 'non coding region (untranslated regions, UTR), causing the degradation of mRNA or inhibiting its translation. More and more evidence suggests that many tumors are occurring, and their development is closely related to the abnormal expression of miRNAs, It can be used as oncogene or tumor suppressor gene in tumor. In recent years, it has been found that the expression of miR-122 in renal carcinoma tissue is rising, suggesting that miR-122 is activated in renal cell carcinoma. But there are few studies on the function and expression of miR-122 in the tissue of renal clear cell carcinoma, and the specific relationship with the proliferation, invasion and metastasis of renal cell carcinoma. It's not yet clear.
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本文編號：2016573