本文選題：miR-122 + 腎透明細胞癌　； 參考：《吉林大學》2014年博士論文

【摘要】：腎細胞癌(renal cell carcinoma, RCC)是起源于腎實質(zhì)泌尿小管上皮細胞的惡性腫瘤，簡稱腎癌；70％為腎透明細胞癌(Renal clear cell carcinoma, RCCC)。在我國腎癌發(fā)病率呈逐年增多的趨勢。由于腎細胞癌的發(fā)病機制不完全清楚，治療手段仍以手術為主。50%的患者首次就診時已經(jīng)屬于晚期腎細胞癌喪失手術時機，因此探索新的生物治療方法已經(jīng)成為臨床上迫切需要解決的實際問題。 MicroRNAs (miRNAs)是一類重要的非編碼的小RNA，長度在19到25個核苷酸，可與目標mRNA在3’非編碼區(qū)(untranslated regions, UTR)發(fā)生連接，從而引起mRNA的降解或抑制其翻譯。越來越多的證據(jù)表明，許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與miRNAs的異常表達密切相關，其可作為癌基因或抑癌基因在腫瘤中發(fā)揮作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)miR-122在腎癌組織中的表達上升，提示腎癌組織中miR-122被激活。但是目前miR-122在腎透明細胞癌組織中的功能和表達的研究很少，與腎透明細胞癌增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的具體關系迄今尚不清楚。 方法： 本研究應用實時定量PCR方法檢測miR-122在腎透明細胞癌及癌旁非腫瘤組織中表達情況，研究其與臨床分期、病理分級之間的關系。同時檢測各腎透明細胞癌細胞株中miR-122的表達情況，篩選合適的體外腎透明癌細胞模型，研究其對腎透明癌細胞的生物學性狀的影響，如細胞增殖能力、集落形成能力和侵襲轉(zhuǎn)移能力等。繼之用生物信息學方法預測miR-122可能的靶基因，并進行初步研究來探討其對腎透明癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移中可能的分子機制，為腎透明細胞癌的早期診斷和治療提供新的思路。 結果： 實時定量PCR結果發(fā)現(xiàn)，腎透明細胞癌組織中的miR-122的相對表達量為(4.04±2.23)，與癌旁非腫瘤組織比較有顯著差異(P 0.05)。根據(jù)病理分級進行分組，高分化組的miR-122相對表達量為(3.24±1.32)，中低分化組相對表達量為(5.05±2.76)，兩者沒有顯著差異(P0.05)。在不同臨床分期組合樣本中，I期腎透明細胞癌中miR-122的相對含量為(3.49±1.49)，II~III期腎透明細胞癌中的相對含量為(5.69±3.35)，沒有顯著統(tǒng)計學差異(P0.05)。實時定量PCR 結果顯示： 腎透明癌細胞株Caki-2細胞中miR-122的表達水平最高，而A498和786-O細胞中miR-122的表達水平相對其他細胞較低，因此A498和786-O用于后續(xù)實驗。不同濃度miR-122或陰性對照miR-Con轉(zhuǎn)染72h后，有效地促進A498和786-O細胞的增殖。生長曲線結果顯示：與miR-Con比較，miR-122促進A498和786-O細胞增殖，并呈時間依賴性。而anti-miR-122轉(zhuǎn)染可抑制A498和786-O細胞增殖。集落形成能力結果顯示：，轉(zhuǎn)染miR-122的A498和786-O細胞集落形成個數(shù)分別為160.67±7.37個和176.67±8.50個，明顯高于陰性對照組(127.33±3.21個和141.67±5.03個)。轉(zhuǎn)染anti-miR-122組A498和786-O細胞集落形成個數(shù)分別為93.67±5.69個和104.67±4.73個,明顯低于anti-miR-Con組細胞集落形成個數(shù)為(128.67±4.73和142.00±3.00)。Transwell小室侵襲實驗表明，在A498和786-O細胞，轉(zhuǎn)染陰性對照miR-Con組穿過Matrigel膠侵襲的細胞數(shù)分別為157.67±9.50個和108.00±4.58個，而轉(zhuǎn)染miR-122組細胞組穿過Matrigel膠侵襲的細胞數(shù)分別為203.33±13.80個和137.33±5.03個，明顯高于陰性對照組（P 0.01）。Transwell小室轉(zhuǎn)移實驗表明，在A498和786-O細胞，轉(zhuǎn)染陰性對照miR-Con組穿過Collagen IV轉(zhuǎn)移的細胞數(shù)分別為183.00±5.29個和146.67±6.03個，，而轉(zhuǎn)染miR-122組細胞組穿過Collagen IV轉(zhuǎn)移的細胞數(shù)分別為242.00±11.53個和185.00±6.56個，明顯高于陰性對照組（P 0.01）。生物軟件預測miR-122潛在的靶基因有200多個，Western blot結果證實，與miR-Con轉(zhuǎn)染組細胞比較，miR-122轉(zhuǎn)染組A498和786-O細胞中p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K和p-4E-BP1表達明顯增加。 結論： (1)腎透明細胞癌組織中miR-122的相對表達水平較癌旁非腫瘤組織明顯上調(diào)，提示miR-122的表達上調(diào)可能與腎透明細胞癌的發(fā)病機制相關。miR-122的表達水平與腎透明細胞癌的病理分級及臨床分期組合無顯著相關性。 (2)腎透明癌A498和786-O細胞中miR-122的表達水平較其他細胞ACHN、Caki-1、Caki-2較低，用于后續(xù)研究。 (3)過表達miR-122促進A498和786-O細胞增殖和集落形成能力，而Anti-miR-122轉(zhuǎn)染后抑制A498和786-O細胞增殖和集落形成能力。 (4).過表達miR-122促進A498和786-O細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。 (5) Akt/mTOR信號通路是miR-122潛在的靶基因。
[Abstract]:Renal cell carcinoma (RCC) is a malignant tumor originating in the renal tubule epithelial cells, referred to as renal cell carcinoma, and 70% is clear cell carcinoma of the kidney (Renal clear cell carcinoma, RCCC). The incidence of renal cancer in China is increasing year by year. The first.50% patients are the first time to lose the operation of advanced renal cell carcinoma, so exploring new biological treatments has become an urgent problem to be solved in the clinic.
MicroRNAs (miRNAs) is an important class of important non coding small RNA, with a length of 19 to 25 nucleotides, which can be linked with the target mRNA in the 3 'non coding region (untranslated regions, UTR), causing the degradation of mRNA or inhibiting its translation. More and more evidence suggests that many tumors are occurring, and their development is closely related to the abnormal expression of miRNAs, It can be used as oncogene or tumor suppressor gene in tumor. In recent years, it has been found that the expression of miR-122 in renal carcinoma tissue is rising, suggesting that miR-122 is activated in renal cell carcinoma. But there are few studies on the function and expression of miR-122 in the tissue of renal clear cell carcinoma, and the specific relationship with the proliferation, invasion and metastasis of renal cell carcinoma. It's not yet clear.
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本文編號：2016573