發(fā)布時間：2018-06-14 07:15

  本文選題：非梗阻性不育 + 精子��； 參考：《河北大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 以非梗阻性男性不育患者為研究對象，利用透射電鏡觀察其精子超微結(jié)構(gòu)的畸變，以及比較常規(guī)電鏡包埋的材料與僅用戊二醛固定和醋酸鈾染色的材料超微結(jié)構(gòu)的不同，探討其超微結(jié)構(gòu)的病變與男性不育之間的關(guān)系。 方法： 實驗一：研究對象為結(jié)婚2年，女方生殖系統(tǒng)功能正常，非梗阻性男性不育患者6例和3例結(jié)婚1年孕育有孩子的正常生育男性，研究對象在禁欲一周后，在室溫25~30℃實驗室里，由供精者自行按摩取精。待精液自動液化后，緩慢注入離心管中，以1850g離心10min，用吸管輕輕吸出精漿，沉淀精子用瓊脂糖進行預(yù)包埋，戊二醛固定液固定1h后，PBS緩沖液（pH=7.3）洗滌3次（10min/次），鋨酸固定1h，然后用Epon812環(huán)氧樹脂包埋，半薄切片用甲苯胺藍染色，光鏡下進行半薄定位，切超薄切片，用醋酸鈾-檸檬酸鉛雙重染色，透射電子顯微鏡下觀察。主要觀察精子的頂體、精子核、精子頸部、線粒體和微管等病理性改變。 實驗二：由于精子膜的特殊性與重要性，我們又著重對實驗一這6例非梗阻性不育患者精子膜的超微結(jié)構(gòu)進行了研究。實驗材料與方法同實驗一。在透射電子顯微鏡下，主要觀察精子的質(zhì)膜、頂體內(nèi)膜、頂體外膜等病理性改變。 實驗三：常規(guī)電鏡包埋的精子材料來源及實驗方法同實驗一；對照組的精子材料來源同實驗一，但是包埋過程只用了戊二醛單固定和醋酸鈾單染。通過對精子超微結(jié)構(gòu)進行對比分析，發(fā)現(xiàn)精子在頂體、核內(nèi)區(qū)域輪廓清晰度、電子密度方面有著明顯不同。 結(jié)果： 1、通過透射電鏡觀察，正常精子的質(zhì)膜和頂體雙層膜結(jié)構(gòu)完整清晰，精子核呈梨狀，核染色質(zhì)電子密度均勻一致，尾部線粒體大小形態(tài)一致，排列規(guī)律，精子尾部微管9+2結(jié)構(gòu)完好。 2、不育患者精子頂體超微結(jié)構(gòu)也發(fā)生了畸變。精子腫脹變形及產(chǎn)生褶皺，有些頂體內(nèi)容物疏松呈低電子密度，頂體后環(huán)部分缺失，頂體邊緣卷曲，頂體下間隙增大，遠離精子核等。 3、精子核異常的精子經(jīng)常表現(xiàn)為頭部形態(tài)的異常，在不育患者中可發(fā)現(xiàn)有錐形頭精子、長頭精子、圓頭精子、尖頭精子、雙頭精子、不定型精子等。核濃縮異常，電子密度增高，核周出現(xiàn)囊性空泡，空泡與頂體內(nèi)膜相融合，空泡間有膜性結(jié)構(gòu)，個別精子細胞核出現(xiàn)巨型空泡。另外，在觀察到的未發(fā)育成熟精子中可見未分離的多核精子。 4、頭部畸形的精子伴有頸部變形腫脹，存在胞質(zhì)小滴等。 5、多數(shù)精子可見其尾部軸絲兩側(cè)的線粒體數(shù)減少，線粒體分布不均，大小不一，疏密不均；不育患者精子線粒體腫脹變形，嚴重腫脹的線粒體發(fā)生線粒體內(nèi)空泡化，形成微囊，囊內(nèi)可見高電子密度膜狀物；出現(xiàn)雙層或三層重疊線粒體圍繞于軸絲等。 6、尾部橫斷面見微管系統(tǒng)錯位，模糊不清，有些微管與纖維鞘融合呈高電子密度，軸絲異常，9+2結(jié)構(gòu)紊亂異常，周圍微管或中央微管有缺失等。 7、不育患者精子膜大多出現(xiàn)了病變，表面粗糙。質(zhì)膜邊緣可與頂體前膜融合變得模糊不清，質(zhì)膜腫脹破損，多處出現(xiàn)大小不等的囊泡,甚至質(zhì)膜缺失等。頂體雙層膜結(jié)構(gòu)可呈不平行或波浪狀改變，外膜彎曲和不連貫，嚴重者頂體內(nèi)外層膜破損，內(nèi)容物溢出等。 8、與常規(guī)電鏡包埋的材料相比，僅用戊二醛固定和醋酸鈾染色的精子頂體囊內(nèi)脂類物質(zhì)被抽提，電子密度極低；精子核內(nèi)因未用檸檬酸鉛染色，而染色效果較差。 結(jié)論： 在電鏡下，發(fā)現(xiàn)不育男性患者精子存在多形態(tài)超微結(jié)構(gòu)異常的現(xiàn)象，，在精子膜、頂體、精子核、頸部和尾部線粒體、微管等超微結(jié)構(gòu)存在病理性改變。由于不育患者精子超微結(jié)構(gòu)的改變，致使精子細胞內(nèi)生化成分也發(fā)生了改變，也可能是導(dǎo)致男性不育的原因之一。綜上所述，精子超微結(jié)構(gòu)異常系非梗阻性男性不育原因之一。
[Abstract]:Objective:
The aberration of sperm ultrastructure of the non obstructive male infertility was observed by transmission electron microscopy, and the ultrastructure of the material embedded in the conventional electron microscope and the materials stained with only glutaraldehyde and uranium acetate were compared, and the relationship between the ultrastructure and male infertility was discussed.
Method錛

本文編號：2016612