本文選題：自噬　切入點(diǎn)：ROS　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景急性腎損傷(acute kidney injury,AKI)是ICU常見病之一,發(fā)病率正逐年增高。研究顯示腎小管細(xì)胞凋亡為其重要發(fā)病機(jī)理之一。組蛋白是真核生物染色質(zhì)的主要結(jié)構(gòu)蛋白,然而,有研究提出細(xì)胞外組蛋白也是一種內(nèi)源性損傷相關(guān)模式分子(damage associated molecular patterns,DAMPs),其在 AKI 發(fā)病機(jī)理中有著重要作用。研究顯示,通過小鼠腎動脈注射組蛋白,可以引起中性粒細(xì)胞浸潤、微血管滲漏、腎臟炎癥反應(yīng)以及AKI病理改變。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)細(xì)胞外組蛋白可導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞凋亡。自噬是指膜包裹胞質(zhì)蛋白或細(xì)胞器等進(jìn)行降解的一種動態(tài)過程,起維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)及更新細(xì)胞器的作用。同時,自噬也是一種應(yīng)激調(diào)控機(jī)制,許多AKI模型中已證實(shí)自噬是上調(diào)的。有大量研究提出自噬可以抑制凋亡,比如在饑餓或生長因子缺乏時,自噬可以抑制凋亡保證細(xì)胞存活。研究報道,在缺血/再灌注腎損傷小鼠模型,自噬水平提高,而用自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)或者氯喹預(yù)處理,腎細(xì)胞凋亡增加。目前已經(jīng)明確應(yīng)激情況下產(chǎn)生的過多反應(yīng)活性氧類(Reactive oxygen species,ROS)可以導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。自噬是否通過減少ROS的產(chǎn)生從而抑制組蛋白誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)凋亡尚未清楚,本實(shí)驗(yàn)將針對此方面進(jìn)行觀測與探討。研究目的1.明確組蛋白是否可以誘導(dǎo)HK-2凋亡及自噬;2.探討自噬是否通過減少ROS產(chǎn)生來抑制組蛋白介導(dǎo)的HK-2凋亡。研究方法1.以不同濃度組蛋白刺激HK-2,分別應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和免疫印跡法檢測HK-2凋亡情況和自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ、Beclin1表達(dá)的情況,初步了解組蛋白對HK-2凋亡和自噬的影響。2.以自噬抑制劑3-MA預(yù)處理后,分別應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和免疫印跡法檢測組蛋白誘導(dǎo)的HK-2凋亡情況和caspase3活化情況,明確自噬對凋亡的作用。3.以自噬抑制劑3-MA預(yù)處理后,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測組蛋白誘導(dǎo)的HK-2的ROS生成量,進(jìn)而明確自噬是否通過減少ROS產(chǎn)生從而抑制組蛋白介導(dǎo)的HK-2凋亡。統(tǒng)計學(xué)處理使用IBM SPSS 21統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析,計量資料以X±S表示,多組間均值比較采用單因素方差分析,進(jìn)一步組間均值兩兩比較采用LSD法或Dunnett's T3法,以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。研究結(jié)果1.不同濃度組蛋白對HK-2凋亡的影響流式結(jié)果顯示,不同濃度組蛋白對HK-2凋亡的影響有統(tǒng)計學(xué)差異(F=57.497,P0.01)。組間兩兩比較顯示:與對照組(7.94±1.78%)比較,組蛋白 25、50、100ug/ml 組(17.31±4.41%,27.98±2.45%,53.15±7.12%)隨著濃度升高而出現(xiàn)早期和晚期凋亡所占的比例依次升高(P0.05,P0.01,P0.01)。2.不同濃度組蛋白對HK-2 Beclin1和LC3Ⅱ表達(dá)的影響灰度分析提示不同濃度組蛋白對HK-2 Beclinl和LC3Ⅱ表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=4.279、4.815,P0.05)。與對照組比較,各濃度組蛋白組LC3Ⅱ、Beclin1表達(dá)水平均升高(P0.05)。3.3-MA對組蛋白誘導(dǎo)的HK-2凋亡的影響流式及Western blotting結(jié)果分別顯示,單純3-MA處理對HK-2凋亡率及caspase3活化水平無影響(P0.05),但顯著提高了組蛋白誘導(dǎo)的HK-2凋亡率及caspase3 活化水平(P0.05,P0.01)。4.3-MA對組蛋白誘導(dǎo)的HK-2活性氧產(chǎn)生的影響流式結(jié)果顯示,單純3-MA處理對HK-2的ROS生成量無影響(P0.05),但顯著增加組蛋白誘導(dǎo)的HK-2ROS生成量(P0.01)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論自噬通過減少ROS產(chǎn)生從而保護(hù)組蛋白介導(dǎo)的HK-2凋亡,提示活化自噬通路在AKI中具有潛在的應(yīng)用價值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R692.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1582659